黃豪萬(wàn)，常明泉，李 玲，陳 芳

顛胃酸口服液中熊果酸的含量測(cè)定

黃豪萬(wàn)1，常明泉2*，李 玲1，陳 芳2

目的 建立顛胃酸口服液中熊果酸的含量測(cè)定方法。方法 采用高效液相色譜法，色譜柱：Diamonsil-C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-水(88∶12)；檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm，進(jìn)樣量20 μL，流速1.0 mL/min，柱溫25 ℃。結(jié)果 熊果酸在2.1～63.0 μg/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，y=1.793 5x+0.528 2(r=0.999 8),回收率為98.9%,RSD=1.48%(n=9)。結(jié)論 所建方法便捷、專屬性強(qiáng),適用于顛胃酸口服液中熊果酸的含量測(cè)定。

顛胃酸口服液；熊果酸；含量測(cè)定

0 引言

嬰幼兒因感染、食物過(guò)敏、酶缺乏、免疫低下、營(yíng)養(yǎng)不良或因胃寒、胃冷、食積等先天因素，易出現(xiàn)食后嘔吐、胃腸痙攣、腹瀉癥狀，這些癥狀在幼兒中頻發(fā)、常見。顛胃酸口服液是一個(gè)針對(duì)上述癥狀和嬰幼兒生理特點(diǎn)而開發(fā)的一個(gè)口服液[1]。該制劑以純中藥提取物為原料組方，主要成分為山楂提液、顛茄提取液、生姜提取液，輔以其他相應(yīng)成分制備。山楂提取液是顛胃酸口服液中主要成分之一，具有健胃消食的功效，與6-姜辣素結(jié)合起到止瀉的作用。顛茄提取液中的莨菪堿類物質(zhì)用高效液相色譜法已能準(zhǔn)確測(cè)定其含量[2-3]。生姜提取液中6-姜辣素按藥典方法也可測(cè)得，之前該制劑中山楂提取液的含量測(cè)定還是空白。為了健全質(zhì)量控制體系，確保臨床用藥安全、有效，本試驗(yàn)以熊果酸為指標(biāo)，用高效液相色譜法對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

戴安3000型高效液相色譜儀(美國(guó)戴安公司);定量用熊果酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110876-201054)；顛胃酸口服液(本院自制，批號(hào)：20130515、20130516、20130517)；甲醇為色譜純，水為純化水和超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[4-5]色譜柱：Diamonsil-C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-水(88∶12)；檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm，進(jìn)樣量20 μL，流速1.0 mL/min，柱溫25 ℃。

2.2 溶液的制備 ①對(duì)照品溶液：精密稱取熊果酸對(duì)照品10.5 mg于50 mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，既得濃度為0.21 mg/mL的對(duì)照儲(chǔ)備液，精密吸取該溶液1.0于10 mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，得21.0 μg/mL溶液，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得；②供試品溶液：精密吸取顛胃酸口服液2.0 mL于100 mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；③陰性樣品溶液：精密吸取不含山楂提取液的顛胃酸口服液2.0 mL于100 mL容量瓶中，按供試品溶液方法制備，即得。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 分別取“2.2”項(xiàng)下的各溶液在“2.1”色譜條件下進(jìn)樣，記錄色譜圖，結(jié)果除陰性樣品溶液外，對(duì)照品溶液、供試品溶液在同一時(shí)間均有相同色譜峰出現(xiàn)，理論塔板數(shù)為6 450，分離度為1.88，對(duì)照品溶液重復(fù)性試驗(yàn)RSD為0.94%(n=5)，拖尾因子為0.98，說(shuō)明制劑中的其他成分對(duì)熊果酸含量測(cè)定無(wú)干擾。圖1為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜圖。

圖1 高效液相色譜色譜圖注：A對(duì)照品；B供試品；C陰性樣品；1 熊果酸

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 分別取“2.2” 項(xiàng)下濃度為0.21 mg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL置10 mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，即得每mL含熊果酸2.1、10.5、21.0、31.5、42.0、52.5、63.0 μg的溶液，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液在“2.1”色譜條件下進(jìn)樣，重復(fù)操作3次，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為y=1.793 5 x+0.528 2(r=0.999 8),熊果酸在2.1～63.0 μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度性試驗(yàn) 取“2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，在“2.1”色譜條件下分別進(jìn)樣5次，記錄熊果酸的峰面積值，結(jié)果RSD為0.94%

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.2”項(xiàng)下的供試品溶液，在“2.1”色譜條件下分別于0、3、6、12、24 h進(jìn)樣，測(cè)定熊果酸的峰面積值，結(jié)果RSD為1.49%，說(shuō)明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)(20130410)的顛胃酸口服液樣品，按“2.2”項(xiàng)下供試品溶液方法制備,共5份，在“2.1”色譜條件下進(jìn)樣,測(cè)定熊果酸的平均含量，結(jié)果RSD為1.01%。

2.8 回收率試驗(yàn) 精密吸取不含山楂提取液的顛胃酸口服液樣品2.0 mL于100 mL容量瓶中，共9份，每3份1組，按已測(cè)知樣品含量的80%、100%、120%分別加入適量對(duì)照品溶液，按“2.2”項(xiàng)下供試品溶液方法制備，在“2.1”色譜條件下進(jìn)樣，測(cè)定樣品峰面積值，按外標(biāo)法計(jì)算熊果酸的含量，結(jié)果見表1。

2.9 含量測(cè)定 取顛胃酸口服液樣品3批，各精密吸取2.0 mL于100 mL容量瓶中，按“2.2 ”項(xiàng)下供試品溶液方法制備，在“2.1”色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算熊果酸的含量，結(jié)果見表2。

表1 顛胃酸口服液熊果酸回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=9)

表2 顛胃酸口服液中熊果酸含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討論

山楂中主要含多種水溶性脂肪酸(如蘋果酸、枸櫞酸酸、琥珀酸)、脂溶性三萜酸(熊果酸)、芳香酸(如齊墩果酸、咖啡酸、綠原酸)，這些酸類物質(zhì)具有助消化作用，而熊果酸是其中具有代表性的成份，其含量的高低決定顛胃酸口服液消化功能的強(qiáng)弱、臨床療效的好壞，它與6-姜辣素按一定比例復(fù)合，對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌都具有良好的抑制作用[6]，《中國(guó)藥典》[4]只規(guī)定了用氫氧化鈉為滴定液滴定有機(jī)酸的方法，沒(méi)有規(guī)定用高效液相色譜法測(cè)定、分離多種酸類成份的方法。本文參考相關(guān)文獻(xiàn)，建立用高效液相色譜法測(cè)定熊果酸的含量。本研究為系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)，在現(xiàn)有條件下將逐步摸索方法，對(duì)其他酸類成份的含量進(jìn)行儀器測(cè)定。

熊果酸與齊墩果酸為一對(duì)異構(gòu)體，兩者含量測(cè)定均采用高效液相色譜法，在測(cè)定時(shí)顯示兩種成分分離效果均不理想，拖尾因子也比較大[5]，試驗(yàn)時(shí)分別比較了以甲醇-水(88∶12)、乙腈-0.02 mol/mL磷酸二氫鉀(含0.2%辛烷磺酸鈉)、磷酸二氫銨-磷酸緩沖液(pH 3.0)3種流動(dòng)相對(duì)熊果酸的出峰效果[6]，曾在磷酸二氫銨-磷酸緩沖液(pH 3.0)和乙腈-0.02 mol/mL磷酸二氫鉀(含0.2%辛烷磺酸鈉)溶液中先后加入三乙胺、四丁基氫氧化銨，測(cè)定結(jié)果顯示，三乙胺對(duì)改善拖尾因子和優(yōu)化峰型無(wú)意義，四丁基氫氧化銨加入后，可使峰型收窄，拖尾因子變小，但回收率不理想，而提高甲醇用量，以甲醇-水(88∶12)做流動(dòng)相時(shí)檢測(cè)效果最佳。

顛胃酸口服液中還有顛茄提取液、生姜提取液，一些復(fù)雜成分的存在可能會(huì)對(duì)熊果酸的分離產(chǎn)生干擾，所以選擇能充分溶解熊果酸的溶劑和流動(dòng)相對(duì)有效提取該成分十分重要。在供試液制備時(shí)，曾參考文獻(xiàn)考察了醇提、水提對(duì)熊果酸的檢出率，結(jié)果以80%以上甲醇溶液提取效果最好，故使用流動(dòng)相甲醇-水(88∶12)為提取溶劑，這可能因?yàn)樾芄嵯抵苄运?，而甲醇為脂溶性溶劑，在高濃度甲醇溶液中溶解效果好。不需要再另外配制流?dòng)相，降低檢測(cè)成本。該方法用于顛胃酸口服液中熊果酸的含量測(cè)定，專屬性強(qiáng)，結(jié)果重現(xiàn)性好。

[1] 常明泉，郝新才，葉立紅，等.顛胃酸口服液的制備與質(zhì)量控制[J].中國(guó)藥師，2011，14(7)：1050-1051.

[2] 常明泉，黃良永，郝新才，等.HPLC法測(cè)定顛胃酸口服液中硫酸阿托品的含量[J].中國(guó)藥師，2011,14(4)：566-567.

[3] 陳芳，常明泉，肖琴，等.高效液相色譜法測(cè)定顛胃酸口服液中東莨菪堿的含量[J].兒科藥學(xué)雜志，2012,18(2)：39-41.

[4] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:39-30，176-177.

[5] 周巧霞，顧振綸.山楂中熊果酸和齊墩果酸的高效液相色譜分析[J].中成藥，2010,3(5):862-864.

[6] 王芳.山楂中熊果酸含量的RP-HPLC測(cè)定法[J].職業(yè)與健康，2011,27(20):2316-2318.

Content detection of ursolic acid in dianweisuan oral liquid

HUANG Hao-wan1,CHANG Ming-quan2*,LI-Ling1,CHEN-Fang2

(1.The People′s Hospital of MaoJian Distrct,Shiyan 442001,China;2.Shiyan Maternal and Child Health Hospital，Shiyan 442000,China)

Objective To establish the content detection method of ursolic acid in dianweisuan oral liquid.Methods HPLC method was used with Diamonsil-C18column (250 mm×4.6 mm,5 μm)，the mobile phase was methyl alcohol and water (88∶12),the detection wavelength was at 210 nm,injection volume was 20 μL,column temperature was 25 ℃and flow rate was 1.0 mL/min.Results Ursolic acid curve was liner within a range of 2.1～63.0 μg/mL,liner equation was y=1.793 5 x+0.528 2(r=0.999 8),the average recovery was 98.9% withRSDof 1.48%(n=9).Conclusion The established method is simple and with good reproducibility,could be further used to investigate the determination of ursolic acid in dianweisuan oral liquid.

Dianweisuan oral liquid;Ursolic acid;Content detection

2013-08-25

1.湖北省十堰市茅箭區(qū)人民醫(yī)院，湖北 十堰 442001；2.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院；湖北 十堰 442000

*通信作者