王茂峰，應(yīng)俊，蔣新良，陳德寶，蔣小偉，樓永剛，張巧紅，萬汝根

（1.東陽市人民醫(yī)院 檢驗科，浙江 金華 322100；2.溫州醫(yī)科大學(xué) 檢驗醫(yī)學(xué)院，浙江 溫州325035）

肺癌是發(fā)病率和病死率高的惡性腫瘤之一，眾多細胞因子參與腫瘤免疫的調(diào)節(jié)，其中白細胞介素10（IL-10）具有多種抑制抗腫瘤免疫應(yīng)答的作用[1]。維生素D及其受體除了調(diào)節(jié)體內(nèi)鈣、磷代謝之外，還具有調(diào)節(jié)腫瘤細胞凋亡以及免疫調(diào)節(jié)作用[2]。研究表明，維生素D在肺部疾病中可發(fā)揮有益的作用，適當?shù)木S生素D水平可能是預(yù)防肺癌的重要因素[3]。因此，肺癌患者維生素D與細胞因子IL-10的關(guān)系如何值得探討。本研究將采用電化學(xué)發(fā)光、酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法檢測肺癌患者血漿25-羥基維生素D與IL-10水平，并探討兩者的相關(guān)性及其臨床價值，為肺癌預(yù)防和干預(yù)提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料和方法

1.1 一般資料 收集本院2012年3月-2013年1月新入院肺癌患者78例，其中男41例，女37例，年齡38～77歲，中位年齡57歲。納入標準：經(jīng)病理或細胞學(xué)、影像學(xué)檢查確診的肺癌患者，具有完整的臨床和病理資料，所有患者均無免疫相關(guān)性疾病和其他腫瘤病史，且無使用激素類藥物及免疫抑制劑史。病理分型分類：腺癌40例，鱗狀細胞癌28例，小細胞癌10例。健康對照組50例，均為2010年6月至2010年8月本院體檢中心的健康體檢者，其中男26例，女24例，年齡35～71歲，中位年齡57歲；均無糖尿病、類風(fēng)濕、甲狀腺功能亢進等自身免疫性疾病及免疫治療史。所有研究對象均獲得知情告知并同意參加本研究。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑和儀器：血漿IL-10濃度檢測試劑盒購自Biosource公司，檢測儀器伯樂酶標儀。25-羥基維生素D采用羅氏電化學(xué)發(fā)光Cobas 601儀器檢測，試劑、校準品、質(zhì)控品均為羅氏原裝配套產(chǎn)品。

1.2.2 樣本采集：肺癌患者在治療前抽血，取一管抗凝血2 mL，離心分離血漿后保存于-80 ℃冰箱待檢。

1.2.3 檢測方法：血漿IL-10濃度檢測根據(jù)說明書操作進行，根據(jù)標準品的濃度及對應(yīng)的OD值，計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。最終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。25-羥基維生素D檢測按照電化學(xué)發(fā)光檢測標準操作，在定標和質(zhì)控均通過后檢測樣本。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計學(xué)軟件。正態(tài)分布和方差分析采用Shapiro-Wilk檢驗評估；正態(tài)分布資料采用±s表示，2組間比較采用兩獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析；非正態(tài)分布資料采用中位數(shù)（四分位數(shù)間距）表示，兩組間比較采用Mann-Whitney U檢驗，多組間比較采用Kruskal-Wallis H檢驗；相關(guān)分析采用Spearman相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肺癌患者血漿IL-10水平 肺癌患者血漿IL-10濃度為1 031 ng/L[（805～1 243）ng/L]，高于健康對照組的445 ng/L[（320～580）ng/L]，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=12.9，P＜0.05）；肺腺癌患者血漿IL-10濃度為1 255 ng/L[（1 050～1 440）ng/L]，高于肺鱗狀細胞癌患者的840 ng/L[（530～1 010）ng/L]，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Z=-3.957，P＜0.05），如圖1所示。

圖1 肺癌患者血漿IL-10檢測結(jié)果

2.2 肺癌患者血漿25-羥基維生素D水平 肺癌患者血漿25-羥基維生素D濃度為（24.5±6.8）ng/mL，低于健康對照組的（35.1±8.7）ng/mL，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=4.251，P＜0.05）；肺腺癌患者血漿25-羥基維生素D濃度為（25.1±7.7）ng/mL，與肺鱗狀細胞癌患者的（23.6±6.5）ng/mL比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），如圖2所示。

2.3 肺癌患者血漿IL-10與25-羥基維生素D相關(guān)性分析 經(jīng)過Spearman相關(guān)分析，肺癌患者血漿IL-10與25-羥基維生素D不存在相關(guān)性（r=-0.011，P＞0.05）。

3 討論

圖2 肺癌患者血漿25-羥基維生素D濃度檢測結(jié)果

維生素D作用于免疫系統(tǒng)的主要靶細胞是抗原遞呈細胞，包括樹突狀細胞、巨噬細胞和T淋巴細胞。本研究顯示，肺癌患者外周血25-羥基維生素D水平低于健康對照組，且存在維生素D缺乏者約占60%。既往研究也證實了相似的結(jié)果，Grant等[4]對美國人群的研究提示太陽紫外線輻射（增加維生素D）和肺癌病死率呈負相關(guān)，Mohr等[5]研究了多個國家的肺癌發(fā)病率，發(fā)現(xiàn)紫外線照射量與肺癌的發(fā)病率有關(guān)，這些研究均表明維生素D與肺癌存在密切關(guān)系。分析肺癌患者血漿IL-10表明，肺癌患者血漿IL-10高于健康對照者，國內(nèi)研究[6]發(fā)現(xiàn)肺癌患者血漿IL-10升高，國外報道[1]腫瘤患者血漿IL-10明顯異常。研究[1，7]證實，IL-10是肺癌中主要的細胞因子，能夠以自分泌及旁分泌形式促進患者體內(nèi)腫瘤生長，調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境，逃逸機體免疫監(jiān)視。既往研究[8]顯示，在肺癌患者外周血中調(diào)節(jié)性T細胞明顯增加，活化后的調(diào)節(jié)性T細胞分泌IL-10，抑制腫瘤特異性T細胞，促進了腫瘤生長。這些研究進一步證明了血漿IL-10可能參與了肺癌的免疫逃逸。

進一步研究表明，肺腺癌患者血漿IL-10濃度高于肺鱗狀細胞癌患者，肺腺癌患者血漿25-羥基維生素D濃度與肺鱗狀細胞癌患者比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。有報道顯示維生素D能促進樹突狀細胞產(chǎn)生IL-10，后者作為免疫抑制細胞因子，可以抑制Th1細胞產(chǎn)生IL-12，已證實維生素D在體外能抑制T細胞增殖和細胞周期從G1a期向G1b期進展，它還能影響T細胞產(chǎn)生細胞因子，在減少Th1細胞因子IFN-γ產(chǎn)生的同時，增加Th2細胞因子如IL-4、IL-5和IL-10的產(chǎn)生，從而促進活化的T細胞向Th2細胞的分化[8]。研究[9]發(fā)現(xiàn)非小細胞肺癌組織中高表達IL-10的患者預(yù)后差。本研究發(fā)現(xiàn)血漿IL-10與維生素D兩者間不存在相關(guān)性。本研究屬于橫斷面研究，樣本例數(shù)也相對較少，未能全面說明維生素D與IL-10之間的關(guān)系，但是維生素D與IL-10之間的相互關(guān)系值得更深入的研究，特別是與肺癌患者臨床資料、工作方式、生活習(xí)慣、飲食習(xí)慣、家族遺傳史、居住環(huán)境、免疫細胞、腫瘤標志物等指標的關(guān)聯(lián)性和臨床意義。

總之，維生素D缺乏和IL-10增加可能增加肺癌患者的風(fēng)險，檢測維生素D和IL-10對肺癌患者具有一定的臨床價值，為肺癌預(yù)防和干預(yù)提供科學(xué)依據(jù)。