解士海 黃榮云

紫草素在人表皮共培養(yǎng)體系中對(duì)酪氨酸酶活性及黑素生成的影響

解士海 黃榮云

目的 探討紫草素在人表皮共培養(yǎng)體系中對(duì)酪氨酸酶活性及黑素生成的影響。方法在共培養(yǎng)體系中測(cè)定紫草素對(duì)酪氨酸酶活性和黑素生成的影響。結(jié)果0.25 μmol/L、0.5 μmol/L和1 μmol/L紫草素對(duì)于人表皮共培養(yǎng)細(xì)胞增殖無影響, 0.25 μmol/L、0.5 μmol/L和1 μmol/L紫草素對(duì)于表皮共培養(yǎng)細(xì)胞酪氨酸酶活性及黑素生成均有較強(qiáng)的劑量相關(guān)性激活作用, 0.5 μmol/L及 1 μmol/L紫草素與對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。結(jié)論紫草素對(duì)于人表皮共培養(yǎng)體系中酪氨酸酶活性和黑素生成有一定促進(jìn)作用。

紫草素；表皮共培養(yǎng)體系；酪氨酸酶；黑素生成

色素紊亂性皮膚病一般比較難治, 其中白癜風(fēng)更為不易治療。我國中醫(yī)中藥治療白癜風(fēng)有數(shù)千年歷史, 其中成方達(dá)幾十種之多。紫草素高頻率的出現(xiàn)在許多治療白癜風(fēng)的方劑中, 作者前期研究了紫草素在黑素瘤細(xì)胞中對(duì)黑素合成的影響［1］, 本研究進(jìn)一步研究其在人表皮共培養(yǎng)體系中對(duì)酪氨酸酶活性及黑素生成的影響。

1 材料與方法

1. 1材料 紫草素購自英國FLUOROCHEM(分析純) , 配制成1 mmol/L的貯存液, -80℃冰箱保存, 使用前稀釋至工作濃度。8-MOP(甲氧沙林)溶于二甲基亞砜, 配成10 ml。

8-MOP、中性酶、胰酶、二甲基亞砜(DMSO)、四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)均購自Sigma公司, 小牛血清購自杭州四季青公司；高通量多功能微板測(cè)試系統(tǒng)(德國BMG), 圖像信號(hào)采集與分析系統(tǒng)(德國LEICA公司), 倒置顯微鏡, 無菌工作臺(tái)等。

1. 2方法

1. 2. 1人表皮黑素細(xì)胞與角質(zhì)形成細(xì)胞共培養(yǎng)體系的建立參考文獻(xiàn)［2］。

1. 2. 2紫草素對(duì)人共培養(yǎng)細(xì)胞增殖的影響： MTT法檢測(cè)。

1. 2. 3酪氨酸酶活性測(cè)定實(shí)驗(yàn)［3］參考文獻(xiàn), 根據(jù)MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果選取3個(gè)濃度(0.25 μmol/L、0.5 μmol/L、1 μmol/L)的紫草素, 測(cè)定其對(duì)酪氨酸酶活性的影響。

1. 2. 4黑素含量的測(cè)定［4］參考文獻(xiàn), 測(cè)定 0.25 μmol/L、0.5 μmol/L及1 μmol/L的紫草素對(duì)黑素生成的影響。

1. 3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 全部數(shù)據(jù)采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行兩因素方差分析檢驗(yàn), 計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 行t檢驗(yàn), P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1紫草素對(duì)細(xì)胞增殖的影響 MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示紫草素濃度在(0.25～1 μmol/L)對(duì)人表皮共培養(yǎng)細(xì)胞無生長抑制作用。

2. 2紫草素對(duì)人表皮共培養(yǎng)體系中酪氨酸酶活性及黑素生成的影響 結(jié)果表明(見表1), 紫草素對(duì)于人表皮共培養(yǎng)體系中酪氨酸酶活性及黑素生成呈劑量依賴性激活作用, 紫草素組與對(duì)照組比較, 0.5 μmol/L及1 μmol/L紫草素對(duì)人表皮共培養(yǎng)體系中氨酸酶活性激活及黑素生成均差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01), 8-MOP 為陽性對(duì)照, 1 μmol/L紫草素作用優(yōu)于8-MOP(P＜0.01)。

表1 紫草素對(duì)共培養(yǎng)體系中酪氨酸酶活性和黑素生成的影響(n=3, x-±s, %)

3 討論

中醫(yī)中藥的研究對(duì)于白癜風(fēng)未來的治療越來越重要, 作者系統(tǒng)研究了許多中藥對(duì)于黑素生成的影響。紫草素不僅在黑素瘤細(xì)胞中可以劑量依賴地促進(jìn)黑素生成, 本研究發(fā)現(xiàn)紫草素在模擬人體的共培養(yǎng)體系中同樣具有促進(jìn)黑素生成和酪氨酸酶活性的作用, 為進(jìn)一步研究開發(fā)紫草素打下基礎(chǔ)。

［1］ 解士海, 黃榮云, 趙衛(wèi)華, 等.紫草素對(duì)人黑素瘤細(xì)胞增殖及黑素合成的影響.臨床合理用藥雜志, 2010, 3(9):10-12.

［2］ 解士海, 陳志強(qiáng), 馬鵬程, 等.人表皮黑素細(xì)胞與角質(zhì)形成細(xì)胞共培養(yǎng)體外模型中黑素小體轉(zhuǎn)運(yùn)的觀察.臨床皮膚科雜志, 2006, 35(5):286-288.

［3］ Chen X, Oppenheim J, Howard OM, et al. Shikonin, a component of antiinflammatory Chinese herbal medicine, selectively blocks chemokine binding to CC chemokine receptor-1, Int Immunopharmacol, 2001(1): 229-236.

516001 惠州市皮膚病醫(yī)院