譚漢添 詹利之

HPLC測定二甲雙胍格列美脲膠囊中的格列美脲含量

譚漢添 詹利之

目的采用 HPLC方法測定二甲雙胍格列美脲膠囊中格列美脲的含量。方法色譜柱采用 Diamonsil C18( 200 mm × 4.6 mm, 5 μm) , 流動相為 0.05 mol/L甲酸銨緩沖液(pH 4) - 乙腈( 體積比為41∶63) , 檢測波長為228 nm, 流速10 ml/min。結果格列美脲的平均回收率為99.4% ( RSD = 1.0% , n =9) , 線性范圍為 0.1～0.6 mg/L(r=0.9991, n=6)。結論采用 HPLC方法測定二甲雙胍格列美脲膠囊中格列美脲的含量, 方法簡便、擁有較高準確性、專屬性, 且在測定過程中測量結果并不會受到鹽酸二甲雙胍的干擾, 效果較好, 可以應用到對該類復方制劑的質量控制過程中。

格列美脲含量；二甲雙胍；高效液相色譜法

作為第3 代磺脲類口服降糖藥, 針對呈漸進性發(fā)展的2型糖尿病的特點, 起效迅速、長效、高效、用量小、低血糖發(fā)生率低等是格列美脲所特有的優(yōu)點。為了可以有效控制患者血糖, 臨床上往往采用不同作用機制的藥物聯(lián)合療法對患者進行針對治療［1］。二甲雙胍格列美脲膠囊往往會含有較高含量的鹽酸二甲雙胍, 而格列美脲含量則較小的特點, 作者使用HPLC 法對膠囊中格列美脲含量進行準確的測量。該方法靈敏、準確且不復雜, 可以有效避免鹽酸二甲雙胍對格列美脲測定的干擾?，F(xiàn)將報告總結如下。

1 儀器與材料

SPD-20A 紫外可見光檢測器、LC-20A 高效液相色譜儀、LCsolution 色譜工作站( 日本 Shimadzu公司) 。無水磷酸氫二鈉( 分析純, 天津瑞金特化學品有限公司) , 磷酸(分析純,沈陽經濟技術開發(fā)區(qū)試劑廠), 十二烷基硫酸鈉(分析純, 天津博迪化工股份有限公司), 重蒸水(實驗室自制) , 二甲雙胍格列美脲膠囊( 實驗室自制, 每片標示量格列美脲 2.0 mg, 鹽酸二甲雙胍 500 mg), 格列美脲對照品( 批號 100674-201102,中國藥品生物制品檢定所) 、鹽酸二甲雙胍對照品( 批號100664-200602, 中國藥品生物制品檢定所) , 乙腈( 色譜純,天津康科德科技有限公司) 。

2 方法與結果

2. 1色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗 色譜柱： Diamonsil C18(200 mm ×4.6 mm, 5 μm), 流動相為0.05 mol/L甲酸銨緩沖液( pH 4)-乙腈(41：63), 檢測波長228 nm, 保持25℃柱溫, 進樣量25 μl。鹽酸二甲雙胍與格列美脲的分離度為 6.2, 保證兩者達到完全分離。

2. 2溶液的配制 取標示量鹽酸二甲雙胍500 mg、格列美脲2 mg的二甲雙胍格列美脲膠囊10粒, 取出內容物并研細,精密稱定［2］。按照50∶50的體積比加乙腈-水共 90 ml, 置于 100 ml 量瓶中, 首先利用頻率 59 kHz, 功率250 W的超聲處理40 min 然后后冷卻至室溫, 若未至刻度線則繼續(xù)加乙腈-水(體積比50∶50) 稀釋至刻度, 并搖勻, 濾過。精密量取續(xù)濾液1 ml, 置于50 ml量瓶中, 然后用體積比30：70的乙腈-水溶液稀釋至刻度, 搖勻, 作為供試溶液。

2. 3線性關系考察 精密稱取格列美脲10 mg , 置于100 ml量瓶中, 加適量甲醇, 溶解使用超聲處理, 待冷卻至室溫后加甲醇定容。精密量取 0.5、1.5、2.5、3.5、5. 0、10.0 ml, 分別置 50 ml 量瓶中, 用流動相定容。記錄峰面積時分別精密量取 50 μl 上述系列溶液進樣。以峰面積對濃度 ( μg/ml) 進行線性回歸, 得回歸方程為: Y=161.32X -3.25(r=0.9999), 結果表明: 1.121～ 21.245 μg/ml格列美脲與峰面積的線性關系良好。

分別精密量取混合儲備液0.5、1.0、1.5、2. 0、2.5、3.0 ml,置 10 ml 量瓶中, 用體積比 30∶70的乙腈-水溶液稀釋至刻度, 搖勻, 配制成含格列美脲質量濃度為 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mg/L及鹽酸二甲雙胍質量濃度為 25.0、50.0、75.0、100.0、125.0、150.0 mg/L的系列標準溶液。按“2.1”條色譜條件測定, 記錄色譜圖。以樣品質量濃度(ρ) 為橫坐標,以峰面積(A) 為縱坐標, 計算格列美脲和鹽酸二甲雙胍的線性回歸方程分別為 A =59.41ρ+ 0.5941(r=0.9993, n=6) 和A = 84.75ρ- 61.23(r=0.9997, n=6)。結果表明, 格列美脲和鹽酸二甲雙胍質量濃度分別在 0.1～0.5 mg/L和 25.0 ～155.0 mg/L內與峰面積呈良好的線性關系［3］。

2. 5回收率試驗 在分別取鹽酸二甲雙胍和格列美脲對照品適量后, 按處方比例加入空白輔料, 按照質量分數(shù)分別為80%、100%、120% 及供試品處方量中主藥成分含量配制成供試溶液, 每個質量濃度配制 3 份, 結果均符合測定要求,結果見表 1。

表1 回收率試驗結果(mg, n =9)

3 討論

方制劑。鹽酸二甲雙胍可以降低血糖主要是通過降低肝糖輸出, 同時增加外周胰島素敏感性導致的［4］; 格列美脲則是通過增加體內胰島素水平和敏感性進而降低血糖。兩藥可以聯(lián)合應用于單純飲食和鍛煉不能控制血糖的2 型糖尿病患者。

曾選擇甲醇和乙腈作為提取溶劑, 結果發(fā)現(xiàn): 對甲醇、甲酸銨、乙酸銨緩沖液和乙腈進行流動相組成及比例考察時,發(fā)現(xiàn)作為流動相, 甲酸銨緩沖液 -乙腈測定得到的格列美脲色譜峰的峰形最好, 同時鹽酸二甲雙胍對格列美脲干擾較小。并且乙腈在流動相中的比例, 會影響格列美脲的出峰時間。當甲酸銨緩沖液 - 乙腈體積比例為 41:63時, 格列美脲在 8 min 出峰, 可以最大限度的分離鹽酸二甲雙胍與格列美脲［5］。用甲醇提取兩組分的色譜峰響應值都較高, 同時在測定格列美脲含量的過程中可以通過調節(jié)流動相的組成使鹽酸二甲雙胍不干擾測定。選定適當?shù)纳V條件, 可以將鹽酸二甲雙胍和格列美脲較好地分離并且出現(xiàn)較為滿意的峰形。HPLC方法可以有效、簡便的測定二甲雙胍格列美脲膠囊中格列美脲的含量。

［1］ 劉偉, 嚴潔.地特胰島素聯(lián)合格列美脲治療老年 2 型糖尿病療效觀察.現(xiàn)代中西醫(yī)結合雜志, 2012, 21(10):1065-1066.

［2］ 王秀榮. 瑞格列奈聯(lián)合甘精胰島素治療老年 2 型糖尿病及其安全性分析.南方醫(yī)科大學學報, 2010, 30(7):1707-1708.

［3］ 童向前.地特胰島素聯(lián)合格列美脲片治療老年 2 型糖尿病的有效性及安全性.中外醫(yī)療-藥物與臨床, 2012, 10(26):99-100.

［4］ 曲 穎, 張純利, 胡文娟, 等.西格列汀、羅格列酮分別聯(lián)合二甲雙胍治療老年 2 型糖尿病的療效觀察.現(xiàn)代生物醫(yī)學進展, 2013, 13(21):4077-4080.

［5］ 劉慶豐, 李中東, 施孝金, 等.二甲雙胍格列本脲片中兩種成分的離子對HPLC法測定.藥學服務與研究 , 2009, 09(01)：44-47.

510000 廣州中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院(譚漢添)；廣州中醫(yī)藥大學青蒿研究中心(詹利之)