孫冬妮

·實(shí)驗(yàn)研究·

姜黃素長(zhǎng)循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒大鼠體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)研究

孫冬妮

建立了熒光分光光度法測(cè)定姜黃素在大鼠血漿中的含量, 并考察了尾靜脈注射Cur(姜黃素)注射液、Cur-SLN(姜黃素納米粒)和Cur-LSLN(姜黃素長(zhǎng)循環(huán)納米粒)后大鼠體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)過(guò)程。

姜黃素長(zhǎng)循環(huán)納米粒；藥物動(dòng)力學(xué)

姜黃素(curcumin,Cur)是姜科植物姜黃(Curcuma longa L.)中提取的一種酚類化合物,是中藥姜黃的主要活性成分。研究表明［1］,具有抗腫瘤、抗氧化、抗炎、降血脂等廣泛的藥理作用,且毒性很低, 有良好的臨床應(yīng)用潛力, 但姜黃素難溶于水, 體外容易被氧化, 體內(nèi)利用度低, 限制了姜黃素的推廣使用。體內(nèi)研究是對(duì)藥物制劑進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)的最根本和最可靠的方法, 采用熒光分光光度法來(lái)測(cè)定姜黃素含量, 以姜黃素的含量測(cè)定為依據(jù), 以姜黃素注射液和姜黃素納米粒為對(duì)照組, 考察了姜黃素長(zhǎng)循環(huán)納米粒的藥動(dòng)學(xué)特征。

1 儀器、材料與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

電子天平(FA-1104型, 上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司)；離心機(jī)(TGL-16G型, 上海安亭科學(xué)儀器廠)；渦旋混合器(WX-80A型, 上海精科實(shí)業(yè)有限公司)；熒光分光光度儀(960型, 上海精密科學(xué)儀器有限公司)。

Cur注射液(自制)；Cur-SLN分散液(自制)；Cur-LSLN分散液(自制)；乙酸乙酯(分析純, 天津市博迪化工有限公司)；乙醚(分析純, 天津市博迪化工有限公司)

Wistar大鼠：(220±10)g, 清潔級(jí), 雄鼠, 沈陽(yáng)藥科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

2 方法

2. 1血漿樣品的采集、處理與檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)前將SD大鼠禁食12 h, 自由飲水。實(shí)驗(yàn)時(shí)采用大鼠尾靜脈注射給藥方式, 按照大鼠體重給予5 mg/kg劑量。給藥后分別于不同時(shí)間點(diǎn)自大鼠眼眶靜脈叢取血0.5 ml, 置于事先經(jīng)過(guò)肝素處理的1.5 ml離心管中, 10000 r/min 離心10 min取上清液部分, 即得血漿樣品。

精密吸取各時(shí)間點(diǎn)的血漿樣品200 μl于5 ml離心管中,加入3 ml沉淀劑(乙酸乙酯), 渦旋3 min混勻, 以10000 r/min速度離心5 min。將上層有機(jī)層轉(zhuǎn)移至另一離心管中, 利用熒光分光光度法(參考相關(guān)文獻(xiàn)［2］, 選擇激發(fā)波長(zhǎng)436 nm,發(fā)射波長(zhǎng)536 nm條件下)測(cè)定各時(shí)間點(diǎn)的熒光強(qiáng)度值, 帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線F=13.081C+22.046, r.2=0.9957, 計(jì)算相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的藥物濃度。姜黃素?zé)晒鈴?qiáng)度=測(cè)得熒光強(qiáng)度-空白血漿熒光強(qiáng)度。

2. 2大鼠藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)方案 9只大鼠, 隨機(jī)分3組。A組尾靜脈注射姜黃素注射液, B組尾靜脈注射姜黃素納米粒, C組尾靜脈注射姜黃素長(zhǎng)循環(huán)納米粒。劑量均為5 mg·kg-1。給藥后定時(shí)取樣, 眼眶取血(約0.5 ml)于肝素潤(rùn)洗的離心管中, 10000 r/min 離心5 min分離血漿。將血樣按“2.1血漿樣品的處理方法”項(xiàng)下操作, 熒光分光光度計(jì)測(cè)定血漿中姜黃素的含量。

3 藥代動(dòng)力學(xué)研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3. 1血藥濃度測(cè)定結(jié)果 Cur液、Cur-SLN液與Cur-LSLN液給藥后各時(shí)間點(diǎn)的血藥濃度數(shù)據(jù)見(jiàn)表1、2、3。

表1 Cur注射液給藥后各時(shí)間點(diǎn)的血藥濃度數(shù)據(jù)

表2 Cur-SLN液給藥后各時(shí)間點(diǎn)的血藥濃度數(shù)據(jù)

表3 Cur-LSLN液給藥后各時(shí)間點(diǎn)的血藥濃度數(shù)據(jù)

3. 2平均血藥濃度-時(shí)間曲線 根據(jù)測(cè)得的血藥濃度, 繪制平均血藥濃度-時(shí)間曲線, 見(jiàn)圖1。

圖1 平均血藥濃度-時(shí)間曲線

3. 3隔室模型依賴方法求算藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù) 采用DAS 2.1.1 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理, 得到三種制劑隔室模型有關(guān)參數(shù),結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 Cur液、Cur-SLN液與Cur-LSLN液的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)

4 討論

4. 1文獻(xiàn)報(bào)道, 納米載藥系統(tǒng)可以延長(zhǎng)藥物的半衰期, 提高血藥濃度-時(shí)間曲線下面積, 增加藥物在血液中滯留時(shí)間［3］。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn), 納米制劑組改變了藥物在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。與注射液組相比, 大鼠尾靜脈注射納米制劑組后,可顯著提高姜黃素的t1/2和AUC, t1/2分別增大3.4倍和7.1倍, AUC0-t分別增大3.4倍和9.0倍, 且Cur-LSLN的增加程度要明顯大于Cur-SLN。由以上結(jié)果可知, 在同樣劑量條件下, Cur-LSLN可延長(zhǎng)姜黃素體內(nèi)循環(huán)時(shí)間, 更有利于被動(dòng)靶向到腫瘤組織, 產(chǎn)生更好的抗腫瘤效果。

4. 2姜黃素制備成長(zhǎng)循環(huán)納米粒, 克服了普通納米粒注射給藥后被內(nèi)皮網(wǎng)狀系統(tǒng)的單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng) (MPS) 識(shí)別和吞噬, 而迅速?gòu)难邢膯?wèn)題。對(duì)納米粒進(jìn)行PEG修飾可以增加其表面親水性, 形成立體位阻, 使納米粒躲過(guò)MPS的識(shí)別, 延長(zhǎng)其血循環(huán)時(shí)間, 為姜黃素用于抗腫瘤研究提供一種新思路。

［1］ Anuchapreeda S, Leechanachai P, Smith MM, et al. Modulation of P-glycoprotein expression and function by curcumin multidrugresistant human KB cells. Biochem Pharmacol, 2002, 64(4): 573-575.

［2］ Miyajima K.Role of saccharides for the freeze-thawing and the freeze-drying of liposome.Adv Drug Del Rev,1997(24):151-159.

［3］ Fundarò A, Cavalli R, Bargoni A, et al. Non-stealth and stealth solid lipid nanoparticles (SLN) carrying doxorubicin: pharmacokinetics and tissue distribution after i.v. administration to rats. Pharmacol Res., 2000, 42(4): 337-343.

114000 鞍山師范學(xué)院附屬衛(wèi)生學(xué)校