曲長(zhǎng)紅，張 寧，曹東華，郝冬梅

解放軍第202醫(yī)院 優(yōu)生優(yōu)育計(jì)劃生育研究所，遼寧沈陽(yáng) 110003

240例耳聾患者常見耳聾基因篩查分析

曲長(zhǎng)紅，張 寧，曹東華，郝冬梅

解放軍第202醫(yī)院 優(yōu)生優(yōu)育計(jì)劃生育研究所，遼寧沈陽(yáng) 110003

目的 分析非綜合征型耳聾患者常見耳聾基因突變情況，探討遺傳性耳聾基因芯片檢測(cè)的臨床意義。方法 2013年3 - 8月來(lái)自沈陽(yáng)市和平區(qū)殘聯(lián)的非綜合征型耳聾患者240例，患者或監(jiān)護(hù)人簽署知情同意后提取被檢者外周靜脈血基因組DNA，采用晶芯?遺傳性耳聾基因檢測(cè)試劑盒對(duì)常見的4個(gè)耳聾基因(GJB2、GJB3、SLC26A4以及線粒體12S rRNA)的9個(gè)突變位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果 240例受檢者中，102例存在被檢測(cè)基因突變，其中GJB2基因突變44例(18.33%，44/240)，SLC26A4基因突變38例(15.83%，38/240)，線粒體12S rRNA基因突變17例(7.08%，17/240)，GJB3 538 C＞T 1例(0.39%，1/240)。明確診斷為遺傳性耳聾60例，提示遺傳性耳聾42例，占全部耳聾患者的42.5%(102/240)。結(jié)論 非綜合征型耳聾患者耳聾基因攜帶率較高，對(duì)高危人群進(jìn)行耳聾基因突變的篩查和遺傳咨詢是防止和控制遺傳性耳聾、優(yōu)生優(yōu)育的重要步驟。

遺傳性耳聾；基因芯片；耳聾基因

新生兒耳聾的發(fā)病率為0.1% ～ 0.3%，一半以上的先天性耳聾是由于遺傳因素造成的。遺傳性耳聾按表型特征不同分為綜合征型耳聾和非綜合征型耳聾。綜合征型耳聾除聽力損傷外還伴有耳外組織的異常或病變，約占30%；非綜合征型耳聾只有聽力損害，不伴有耳外組織的異常和病變，約占70%[1]。隨著耳聾基因研究的深入，耳聾基因檢測(cè)已成為防控遺傳性耳聾的重要舉措[2-4]。國(guó)內(nèi)分子流行病學(xué)研究表明，我國(guó)大部分遺傳性耳聾主要由為數(shù)不多的幾個(gè)基因突變引起，如GJB2、GJB3、SLC26A4以及線粒體12S rRNA等[5-6]。為此，本研究應(yīng)用北京博奧生物有限公司的晶芯?九項(xiàng)遺傳性耳聾基因芯片檢測(cè)試劑盒，檢測(cè)了沈陽(yáng)市和平區(qū)240例非綜合征型耳聾患者，探討常見遺傳性耳聾基因檢測(cè)的臨床應(yīng)用價(jià)值。

對(duì)象和方法

1 研究對(duì)象 2013年3 - 8月來(lái)自沈陽(yáng)市和平區(qū)殘聯(lián)的耳聾患者240例，其中男117例，女123例，年齡5 ～ 59歲。經(jīng)患者或監(jiān)護(hù)人知情同意后，收集病史資料，包括患者的一般信息、出生史、耳聾發(fā)病年齡、家族史、個(gè)人史（耳聾性藥物應(yīng)用史、頭部外傷史等）及母孕期情況等，排除綜合征型耳聾。

2 DNA提取 采集受檢者外周靜脈血2 ml，置于EDTA抗凝的真空采血管中，應(yīng)用天根公司全血核酸提取試劑盒提取基因組DNA，并檢測(cè)濃度和純度。3 耳聾基因篩查 PCR擴(kuò)增、芯片雜交、芯片洗滌與甩干、芯片掃描與判讀，應(yīng)用博奧生物有限公司提供的晶芯?遺傳性耳聾基因檢測(cè)試劑盒(微陣列芯片法)，具體步驟參照說(shuō)明書。

結(jié) 果

1 常見耳聾基因突變情況 240例受檢者中，102例存在被檢測(cè)基因突變。同時(shí)攜帶兩個(gè)突變基因的2例，其中1例同時(shí)檢出GJB3 538C＞T雜合突變和SLC26A4 IVS7-2A＞G雜合突變；另1例同時(shí)檢出GJB2 235del C雜合突變和SLC26A4 2168 A＞G雜合突變。見表1。

2 受檢者耳聾病因分析 240例中，明確診斷為遺傳性耳聾60例，提示遺傳性耳聾42例，原因不明耳聾138例。60例明確遺傳性耳聾患者中，GJB2基因突變27例，其中純合突變型12例，復(fù)合雜合突變型15例； SLC26A4基因突變16例，其中純合突變型13例，復(fù)合雜合突變型3例；線粒體12S rRNA均質(zhì)突變型17例。42例提示遺傳性耳聾患者中，GJB2基因單雜合突變17例，SLC26A4基因單雜合突變22例，GJB3基因單雜合突變1例，無(wú)線粒體12S rRNA基因異質(zhì)突變型，2例存在兩個(gè)基因的單雜合突變。102例耳聾患者攜帶遺傳性耳聾致病基因(102/240，42.5%)，138例未提供致病基因信息(138/240，57.5%)。見表2。

討 論

耳聾是臨床上常見的遺傳性疾病，嚴(yán)重影響人類的生活質(zhì)量。由遺傳因素導(dǎo)致的耳聾約占60%[7-8]。遺傳性耳聾臨床上根據(jù)不同表現(xiàn)分為綜合征型耳聾和非綜合征型耳聾。非綜合征型耳聾是以聽力損失為唯一癥狀的遺傳性疾病。耳聾具有很強(qiáng)的遺傳異質(zhì)性，其遺傳學(xué)基礎(chǔ)比較復(fù)雜。根據(jù)遺傳方式不同，遺傳性耳聾可分為常染色體顯性遺傳、常染色體隱性遺傳、X連鎖遺傳、Y連鎖遺傳及線粒體遺傳。遺傳性耳聾的致病基因及同一基因的突變位點(diǎn)在不同種族、不同地區(qū)的人群中不全相同。GJB2、SLC26A4及線粒體12SrRNA基因是導(dǎo)致中國(guó)大部分遺傳性耳聾發(fā)生的最常見的3個(gè)基因，其中GJB2、SLC26A4屬常染色體隱性遺傳，線粒體12S rRNA屬母系遺傳[9-10]。

我國(guó)流行病學(xué)調(diào)查顯示，21%的耳聾患者攜帶GJB2基因突變，18.5%的患者攜帶SLC26A4基因突變，3.8%和0.6%的患者分別攜帶線粒體12SrRNA 1555 A＞G和線粒體12SrRNA 1494 C＞T突變，提示GJB2、SLC26A4、線粒體基因是導(dǎo)致中國(guó)人大部分遺傳性耳聾發(fā)生的3個(gè)基因[11]。本研究中檢出攜帶有遺傳性耳聾相關(guān)突變基因的患者102例(42.5%，102/240)，其中45例GJB2基因突變(18.75%，45/240)，GJB2 235del C占該基因全部突變檢出位點(diǎn)的88.89%(40/45)，是沈陽(yáng)市和平區(qū)最常見的耳聾基因突變位點(diǎn)。其次，檢出39例SLC26A4突變(16.25%，39/240)，其中IVS7-2 A＞G占該基因全部突變的87.18(34/39)，在SLC26A4基因突變中最常見。攜帶線粒體12SrRNA突變基因檢出率7.08%(17/240)，通過(guò)對(duì)所有母系成員進(jìn)行用藥宣教，終生禁用氨基糖苷類抗生素，可有效避免藥物性耳聾的發(fā)生。

表1 受檢者中基因序列改變方式及例數(shù)Tab. 1 Deafness gene mutations of patients included in this study (n)

表2 受檢者耳聾病因分析Tab. 2 Characteristics of deaf patients included in this study (n)

本文檢測(cè)的240例耳聾患者中，60例證實(shí)為遺傳性耳聾，占耳聾患者的25%(60/240)，其中27例為GJB2基因突變，16例為SLC26A4基因突變，17例為線粒體12S rRNA均質(zhì)突變。另外，有42例為雜合突變，占耳聾患者的17.5%(42/240)，其中GJB2基因17例，SLC26A4基因22例，GJB3基因1例，2例存在兩個(gè)基因的單雜合突變。我們將對(duì)相應(yīng)基因進(jìn)行全基因測(cè)序，提示可能存在其他突變位點(diǎn)。應(yīng)用遺傳性耳聾基因芯片檢測(cè)試劑盒，我們篩出102例遺傳性耳聾患者，占耳聾患者的42.5%(102/240)，我們將對(duì)這些患者進(jìn)行優(yōu)生優(yōu)育指導(dǎo)，結(jié)合產(chǎn)前診斷技術(shù)有效預(yù)防下一代耳聾患者的出生。

綜上所述，通過(guò)對(duì)沈陽(yáng)市和平區(qū)240例非綜合征型耳聾患者進(jìn)行常見4個(gè)耳聾相關(guān)基因的9個(gè)致病突變位點(diǎn)檢測(cè)，了解到沈陽(yáng)市和平區(qū)非綜合征型耳聾基因突變攜帶率較高，GJB2基因突變中235del C最為常見，IVS7-2 A＞G在SLC26A4基因突變中最為常見，與國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道基本相符[12-16]。對(duì)該地區(qū)耳聾患者及高危人群進(jìn)行耳聾基因突變的篩查是防止和控制該地區(qū)遺傳性耳聾的重要步驟，建議遺傳性耳聾基因檢測(cè)試劑盒在臨床推廣應(yīng)用。

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《解放軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)》 編輯部

Analysis of common deafness genes screening in 240 deaf patients

QU Chang-hong, ZHANG Ning, CAO Dong-hua, HAO Dong-mei
Institute of Obstetrics and Gynecology, Chinese PLA 202 Hospital, Shenyang 110003, Liaoning Province, China

HAO Dong-mei. Email: bennyhg@aliyun.com

Objective To investigate the incidence of common deafness gene mutations in patients with non-syndromic deafness. Methods The genomic DNA of 240 deafness patients were extracted from their peripheral blood. The hot-spot deafness gene mutations, including GJB2, GJB3, SLC26A4 and mitochondrial 12S rRNA genes, were detected using a nine deafness gene mutations detection kit. Results Various types of gene locus mutations were detected in 102 of the 240 patients, including 44 GJB2 gene mutations (18.33%, 44/240), 38 SLC26A4 gene mutations (15.83%, 38/240), 17 mitochondrial 12S rRNA gene mutations (7.08%, 17/240). The diagnosis results suggested that 60 cases were sure to be hereditary hearing loss and 42 cases were suspected hereditary hearing loss, which accounted for 42.5% (102/240) of the total. Conclusion Non-syndromic deafness patients have a high ratio of carrying deafness gene, and molecular genetic screening for these hot-spot mutations is a pivotal step for the prevention and control of genetic deafness.

hereditary deafness; gene chip; deafness gene

R 714.55

A

2095-5227(2014)10-1019-03

10.3969/j.issn.2095-5227.2014.10.012

時(shí)間：2014-07-15 09:56

http://www.cnki.net/kcms/detail/11.3275.R.20140715.0956.005.html

2014-05-11

曲長(zhǎng)紅，女，在讀碩士。研究方向：優(yōu)生優(yōu)育。Email: quchanghong2014@163.com

郝冬梅，女，博士，副主任醫(yī)師。Email: bennyhg@aliyun. com