羅遠(yuǎn)材 郭 路

P53對(duì)蛋白激酶R和宮頸癌HeLa細(xì)胞生物學(xué)行為的影響

羅遠(yuǎn)材 郭 路

目的 探討P53蛋白對(duì)蛋白激酶R（PKR）表達(dá)和活性以及對(duì)宮頸癌HeLa細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。方法構(gòu)建過(guò)表達(dá)p53基因的重組質(zhì)粒pEGFP-C1/p53，轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞，采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)pEGFP-C1/p53轉(zhuǎn)染組、空質(zhì)粒pEGFP-C1轉(zhuǎn)染組及空白對(duì)照組（僅加入轉(zhuǎn)染試劑）p53及PKR mRNA的表達(dá)；采用Western Blot法檢測(cè)上述3組中P53、PKR、磷酸化型PKR(p-PKR)，PKR下游底物真核細(xì)胞翻譯啟始因子2α （eIF2α）的磷酸化型p-eIF2α的表達(dá)；采用四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）法檢測(cè)HeLa細(xì)胞增殖活性變化，Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HeLa細(xì)胞侵襲能力變化。結(jié)果pEGFP-C1/p53轉(zhuǎn)染組p53及PKR mRNA的相對(duì)表達(dá)量高于pEGFP-C1轉(zhuǎn)染組和空白對(duì)照組（均P＜0.05），pEGFP-C1轉(zhuǎn)染組和空白對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；pEGFP-C1/p53轉(zhuǎn)染組P53、PKR、p-PKR及p-eIF2α蛋白的相對(duì)表達(dá)量高于pEGFP-C1轉(zhuǎn)染組和空白對(duì)照組（均P＜0.05），pEGFP-C1轉(zhuǎn)染組和空白對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；pEGFP-C1/p53轉(zhuǎn)染組HeLa細(xì)胞增殖活性及侵襲能力均顯著低于pEGFP-C1轉(zhuǎn)染組和空白對(duì)照組（均P＜0.05），pEGFP-C1轉(zhuǎn)染組和空白對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論P(yáng)53能上調(diào)PKR的表達(dá)及活性，激活PKR/eIF2α信號(hào)通路，抑制宮頸癌HeLa細(xì)胞增殖及侵襲。

基因，p53；蛋白激酶類(lèi)；細(xì)胞增殖；腫瘤侵潤(rùn)；真核細(xì)胞翻譯啟始因子2α

高危型人乳頭狀瘤病毒（high-risk human papilloma virus，hsHPV）感染宮頸上皮細(xì)胞在宮頸癌的成因中起重要作用。蛋白激酶R(PKR)是機(jī)體抗病毒防御機(jī)制中的重要分子，在抵御病毒感染、抗腫瘤方面均發(fā)揮重要的生物學(xué)效應(yīng)。本研究小組前期工作發(fā)現(xiàn)，在宮頸癌HeLa細(xì)胞中，PKR的表達(dá)及活性均受到明顯的抑制[1]。因此，尋找能夠上調(diào)PKR表達(dá)及活性的調(diào)控因子對(duì)于抵御宮頸hsHPV感染、預(yù)防及治療宮頸癌均具有重要意義。p53基因是機(jī)體重要的抑瘤基因，其在誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯、調(diào)節(jié)細(xì)胞的分化與衰老等方面發(fā)揮重要作用，并參與多種基因的調(diào)控[2]。本研究采用使宮頸癌HeLa細(xì)胞過(guò)表達(dá)p53的方法來(lái)觀(guān)察其對(duì)PKR表達(dá)及活性、HeLa細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 人宮頸癌HeLa細(xì)胞由天津醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供；pEGFP-C1質(zhì)粒載體、大腸桿菌菌株XL1-Blue感受態(tài)細(xì)胞、內(nèi)切酶KpnⅠ和BamHⅠ、T4DNA連接酶，購(gòu)自天津賽爾生物技術(shù)有限公司；新生胎牛血清（FBS）、DMEM高糖培養(yǎng)基，購(gòu)自美國(guó)Hyclone生物科技發(fā)展公司；質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑LipofectamineTM2000購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司；RNA提取及逆轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增試劑盒均購(gòu)自北京全式金生物公司；小鼠抗人管家基因甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）內(nèi)參單克隆抗體、兔抗人PKR、磷酸化型PKR（p-PKR）（Thr446）、磷酸化型真核細(xì)胞翻譯啟始因子2α（peIF2α）（Ser51）、突變型p53多克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz生物公司；HRP-標(biāo)記山羊抗小鼠IgG、HRP-標(biāo)記山羊抗兔IgG購(gòu)自北京中杉金橋生物公司；噻唑藍(lán)(MTT)粉末購(gòu)自Sigma公司；Transwell侵襲小室購(gòu)自美國(guó)BD公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)條件及生長(zhǎng)特點(diǎn) 人宮頸癌HeLa細(xì)胞培養(yǎng)于含10％FBS的DMEM高糖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為37℃、5％ CO2、相對(duì)濕度90％，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞呈單層貼壁生長(zhǎng)，鋪滿(mǎn)培養(yǎng)瓶后用胰蛋白酶消化后進(jìn)行傳代。

1.2.2 載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)染 設(shè)計(jì)含有KpnⅠ、BamHⅠ酶切位點(diǎn)并能擴(kuò)增p53基因（序列號(hào)：NC_000017）的引物序列，上游5′-CGGGGTACCATGGAGGAGCCGCAGTCAGATCC-3′，下游5′-CGCGGATCC TCAGTCTGAGTCAGGCCCTTCTG-3′，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度1 182 bp。PCR法擴(kuò)增p53基因序列，反應(yīng)程序：94℃預(yù)變性4 min；94℃變性45 s，58℃退火40 s，72℃延伸90 s，30個(gè)循環(huán)；72℃附加延伸10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)KpnⅠ和BamHⅠ雙酶切后連入線(xiàn)性化的pEGFP-C1質(zhì)粒載體，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌菌株XL1-Blue感受態(tài)細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增，然后回收、純化重組質(zhì)粒進(jìn)行酶切鑒定，獲得重組質(zhì)粒pEGFP-C1/p53；轉(zhuǎn)染前1 d將2×105的HeLa細(xì)胞接種至6孔板中，用2 mL的DMEM高糖培養(yǎng)基（含10％FBS）培養(yǎng)24 h后，將p53過(guò)表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-C1/p53載體及其對(duì)應(yīng)空載體pEGFP-C1轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞，轉(zhuǎn)染步驟嚴(yán)格按照轉(zhuǎn)染試劑LipofectamineTM2000的操作說(shuō)明進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)分3組：pEGFPC1/p53轉(zhuǎn)染組、pEGFP-C1轉(zhuǎn)染組及空白對(duì)照組（僅加入轉(zhuǎn)染試劑），轉(zhuǎn)染6 h后更換為含10％FBS的完全培養(yǎng)液，在37℃、5％CO2、相對(duì)濕度90％的細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)48 h，進(jìn)行下列實(shí)驗(yàn)，mRNA及蛋白提取所用細(xì)胞數(shù)量級(jí)相同，每種實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3次。

1.2.3 逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)p53及PKR mRNA的表達(dá) 轉(zhuǎn)染48 h后收集細(xì)胞，Trizol法提取細(xì)胞總RNA，檢測(cè)RNA純度:吸光度(A)260/A280在1.8～2.0之間，瓊脂糖凝膠電泳鑒定總RNA的完整性。取4 μL總RNA，加入到20 μL逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系中，逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，然后以p53及PKR對(duì)應(yīng)的PCR引物以及GAPDH作內(nèi)參進(jìn)行PCR檢測(cè)。RNA提取及逆轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增的實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。引物序列：GAPDH上游5′-AGCCACATCGCTCAGACAC-3′，下游5′-CCATCACGCCACAGTTTCC-3′，擴(kuò)增片段長(zhǎng)616 bp；p53上游5′-AGAATCTCCGCAAGAAAGG-3′，下游5′-GCTGGTATGTCCTACTCCC-3′，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度539 bp；PKR上游5′-AAGAAGAGGCGAGAAACTAG-3′，下游5′-TTCAGAAGGGCTCTAACATG-3′，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度529 bp。PCR反應(yīng)程序：94℃預(yù)變性4 min；94℃變性30 s，56℃退火1 min，72℃延伸40 s，40個(gè)循環(huán)；72℃附加延伸6 min。PCR產(chǎn)物進(jìn)行2％瓊脂糖凝膠電泳，經(jīng)凝膠成像分析系統(tǒng)掃描、成像，用Bio-Rad成像分析軟件Quantity One分析結(jié)果。

1.2.4 Western Blot檢測(cè)P53、PKR、p-PKR、p-eIF2α及GAPDH蛋白的表達(dá) 轉(zhuǎn)染48 h后收集細(xì)胞，提取細(xì)胞總蛋白，BCA法測(cè)定蛋白濃度后進(jìn)行12％SDS-PAGE變性膠電泳、轉(zhuǎn)膜、5％脫脂奶粉溶液封閉2 h后加入一抗工作液于4℃過(guò)夜，TBST洗膜、加入二抗工作液室溫孵育2 h、TBST洗膜后加入化學(xué)發(fā)光底物，感光膠片顯影，經(jīng)凝膠成像分析系統(tǒng)掃描、成像，用Bio-Rad成像分析軟件Quantity One分析結(jié)果。目的條帶相對(duì)含量＝目的條帶灰度值/標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)參灰度值。

1.2.5 MTT法檢測(cè)HeLa細(xì)胞增殖活性 于96孔板中，用p53過(guò)表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-C1/p53載體及其對(duì)應(yīng)空載體pEGFP-C1轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞，每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔，每孔分別加入新鮮配制的5 g/L MTT溶液20 μL，同時(shí)設(shè)置調(diào)零孔。培養(yǎng)箱內(nèi)溫育4 h，分別于轉(zhuǎn)染后12、24和48 h各檢測(cè)1次。檢測(cè)前每孔加入150 μL二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩10 min，酶標(biāo)儀波長(zhǎng)490 nm處檢測(cè)各孔的A值，以此間接代表每組細(xì)胞的增殖狀態(tài)。

1.2.6 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HeLa細(xì)胞侵襲能力 于24孔板中，每組設(shè)4個(gè)復(fù)孔，將Matrigel基質(zhì)膠稀釋1倍后均勻鋪于Transwell小室的上室微孔膜上，37℃孵育4 h。收集轉(zhuǎn)染48 h后的HeLa細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞密度至2×105/mL，在37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中饑餓培養(yǎng)24 h。Transwell小室的上室加入不含血清的饑餓培養(yǎng)細(xì)胞懸液200 μL 及0.1％BSA，下室加入500 μL含15％FBS的DMEM培養(yǎng)基，常規(guī)培養(yǎng)36 h，棉簽擦去上室上面的非侵襲細(xì)胞及基質(zhì)膠，4％多聚甲醛室溫固定30 min，0.01％伊紅染液37℃染色30 min，將小室晾干，正置于載玻片上，在倒置顯微鏡下隨機(jī)讀取10個(gè)200×視野，計(jì)數(shù)穿膜細(xì)胞數(shù)目并取均值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料多組間比較用單因素方差分析，多重比較采用Newman-Keuls-q檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組p53、PKR mRNA的表達(dá)水平 p53及PKR mRNA的相對(duì)表達(dá)量在pEGFP-C1/p53轉(zhuǎn)染組均高于pEGFP-C1轉(zhuǎn)染組和空白對(duì)照組（P＜0.05），而pEGFP-C1轉(zhuǎn)染組與空白對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見(jiàn)圖1、表1。

Fig.1 Transcription level of p53 and PKR in every group圖1 各組p53、PKR mRNA的表達(dá)

2.2 各組P53、PKR、p-PKR、p-eIF2α蛋白的表達(dá)水平 P53、PKR、p-PKR、p-eIF2α蛋白的相對(duì)表達(dá)量在pEGFP-C1/p53轉(zhuǎn)染組均高于pEGFP-C1轉(zhuǎn)染組和空白對(duì)照組（P＜0.05），而pEGFP-C1轉(zhuǎn)染組與空白對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)圖2、表1。

2.3 各組HeLa細(xì)胞增殖活性 轉(zhuǎn)染后12 h,細(xì)胞增殖活性A值3組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；轉(zhuǎn)染后24 h和48 h，pEGFP-C1/p53轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖活性A值均低于pEGFP-C1轉(zhuǎn)染組和空白對(duì)照組（P＜0.05），而pEGFP-C1轉(zhuǎn)染組與空白對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表2。

Fig.2 Protein expression of p53，PKR，p-PKR and p-eIF2α in every group圖2 各組P53、PKR、p-PKR、p-eIF2α蛋白的表達(dá)

Tab.1 Transcription levels of of p53，PKR mRNA and protein expression levels of P53，PKR，p-PKR and p-eIF2α in every group表1 各組p53、PKR mRNA及P53、PKR、p-PKR、p-eIF2α蛋白的表達(dá)水平 （n=6，±s）

Tab.1 Transcription levels of of p53，PKR mRNA and protein expression levels of P53，PKR，p-PKR and p-eIF2α in every group表1 各組p53、PKR mRNA及P53、PKR、p-PKR、p-eIF2α蛋白的表達(dá)水平 （n=6，±s）

＊P＜0.05；a與pEGFP-C1/p53轉(zhuǎn)染組比較，P＜0.05，表2同

組別pEGFP-C1/p53轉(zhuǎn)染組pEGFP-C1轉(zhuǎn)染組空白對(duì)照組F mRNA p53 1.35±0.42 0.76±0.22a0.71±0.21a7.658＊PKR 0.94±0.31 0.58±0.14a0.56±0.12a6.823＊組別pEGFP-C1/p53轉(zhuǎn)染組pEGFP-C1轉(zhuǎn)染組空白對(duì)照組F蛋白P53 1.28±0.37 0.62±0.15a0.57±0.14a7.239＊PKR 1.73±0.46 0.77±0.21a0.82±0.24a8.261＊p-PKR 0.89±0.25 0.23±0.07a0.26±0.08a8.787＊p-eIF2α 0.53±0.12 0.15±0.04a0.17±0.04a7.586＊

Tab.2 Comparison of absorbance value and transmembrane cell number in every group表2 各組細(xì)胞增殖活性及穿膜細(xì)胞數(shù)比較（n=6，±s）

Tab.2 Comparison of absorbance value and transmembrane cell number in every group表2 各組細(xì)胞增殖活性及穿膜細(xì)胞數(shù)比較（n=6，±s）

組別pEGFP-C1/p53轉(zhuǎn)染組pEGFP-C1轉(zhuǎn)染組空白對(duì)照組F轉(zhuǎn)染后細(xì)胞增殖活性(A值) 12 h 0.47±0.12 0.56±0.14 0.58±0.14 2.496 24 h 0.52±0.13 0.77±0.18a0.79±0.19a6.709＊48 h 0.35±0.09 0.86±0.21a0.88±0.21a7.596＊穿膜細(xì)胞數(shù)（個(gè)）22.7±4.6 41.8±7.3a45.2±7.9a18.515＊＊

2.4 各組HeLa細(xì)胞侵襲能力 pEGFP-C1/p53轉(zhuǎn)染組穿膜細(xì)胞數(shù)均低于pEGFP-C1轉(zhuǎn)染組和空白對(duì)照組（P＜0.05），而pEGFP-C1轉(zhuǎn)染組與空白對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表2。

3 討論

p53基因編碼393個(gè)氨基酸組成的53 ku的核內(nèi)磷酸化蛋白，被稱(chēng)為P53蛋白。P53蛋白控制著細(xì)胞周期的啟動(dòng)，與細(xì)胞周期的調(diào)控、DNA修復(fù)、細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡等重要的生物學(xué)功能有關(guān)[3]。目前研究認(rèn)為，hsHPV E6蛋白能使P53蛋白滅活，而hsHPV感染恰恰是宮頸癌發(fā)生的重要因素，因此，p53基因在宮頸癌細(xì)胞的表達(dá)及活性被抑制[4]。筆者在前期工作中發(fā)現(xiàn)，通過(guò)RNA干擾的辦法沉默宮頸癌HeLa細(xì)胞HPV18 E6基因的表達(dá)，PKR的表達(dá)及磷酸化水平均顯著升高[1]。究其原因，除了HPV18 E6蛋白對(duì)PKR的直接抑制作用外，還可能與HPV18 E6蛋白表達(dá)降低，部分恢復(fù)P53蛋白的表達(dá)及活性，增強(qiáng)了其對(duì)PKR的正調(diào)節(jié)作用有關(guān)。

PKR是一種絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶，在病毒復(fù)制過(guò)程中產(chǎn)生的雙鏈RNA能與PKR結(jié)合，誘使PKR分子構(gòu)型發(fā)生改變，導(dǎo)致其多個(gè)絲氨酸、蘇氨酸位點(diǎn)自動(dòng)磷酸化而被激活，其中以第446位蘇氨酸殘基磷酸化最為重要[5-7]。PKR的底物主要是真核細(xì)胞翻譯啟動(dòng)因子2α（eIF2α），激活的PKR能使eIF2α第51位絲氨酸殘基磷酸化，磷酸化的eIF2α再通過(guò)其下游一系列級(jí)聯(lián)反應(yīng)，最終導(dǎo)致宿主細(xì)胞蛋白合成完全受到抑制而凋亡[7]。通過(guò)抑制蛋白合成、誘導(dǎo)感染細(xì)胞凋亡是PKR抑制病毒復(fù)制及傳播、及時(shí)清除病變細(xì)胞的主要機(jī)制。因此，PKR是宿主防御機(jī)制中發(fā)動(dòng)細(xì)胞死亡來(lái)對(duì)抗病毒感染和腫瘤形成的重要靶點(diǎn)，而PKR/eIF2α信號(hào)通路的活性維持對(duì)控制HPV感染、及時(shí)清除腫瘤前體細(xì)胞具有重要意義。相關(guān)研究認(rèn)為，P53蛋白能直接作用于干擾素調(diào)節(jié)因子9(IRF9)，其為干擾素激活PKR途徑中的重要因子，亦能直接作用于PKR的啟動(dòng)子，對(duì)PKR的表達(dá)及激活起重要作用[8-9]。

為進(jìn)一步驗(yàn)證宮頸癌HeLa細(xì)胞中p53對(duì)PKR的調(diào)節(jié)作用，本研究成功構(gòu)建了過(guò)表達(dá)p53基因的重組質(zhì)粒載體pEGFP-C1/p53，將其轉(zhuǎn)染宮頸癌HeLa細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)，PKR的表達(dá)及活性（磷酸化水平）均顯著升高，表明p53確實(shí)對(duì)PKR的表達(dá)及活性具有升調(diào)節(jié)作用。PKR是一個(gè)重要的凋亡效應(yīng)因子，本研究結(jié)果顯示，在PKR表達(dá)及活性升高的情況下，其下游底物p-eIF2α水平亦明顯升高，在此情況下HeLa細(xì)胞蛋白合成將受到顯著地抑制而發(fā)生凋亡，導(dǎo)致其增殖活性下降，而穿膜細(xì)胞數(shù)的顯著降低亦表明HeLa細(xì)胞的侵襲能力同樣受到了明顯的抑制。以上結(jié)果表明，P53蛋白通過(guò)上調(diào)PKR的表達(dá)及活性激活了PKR/eIF2α信號(hào)傳導(dǎo)通路，間接導(dǎo)致HeLa細(xì)胞的增殖及侵襲能力受到了明顯的抑制，故P53可作為PKR/eIF2α信號(hào)通路的有效調(diào)節(jié)者。

有研究指出，p53與PKR共表達(dá)對(duì)調(diào)控細(xì)胞周期阻滯有協(xié)同作用，PKR還可促進(jìn)P53蛋白磷酸化、增強(qiáng)其穩(wěn)定性及活性[10]，對(duì)阻斷HPV感染及誘導(dǎo)病變細(xì)胞凋亡無(wú)疑具有重要意義。但如何持久保持兩者在宮頸病變細(xì)胞中的活性還有待更深入的研究。

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（2014-02-13收稿 2014-09-05修回）

（本文編輯 魏杰）

Effect of p53 on Protein Kinase R and Biological Behavior of Cervical Cancer HeLa Cells

LUO Yuancai，GUO Lu
Department of Gynecology and Obstetrics,Tianjin First Central Hospital，Tianjin 300192，China

ObjectiveTo investigate the effects of p53 on expression and activity of protein kinase R(PKR)as well as biological characters of HeLa cells from cervical carcinoma patients.MethodsRecombinant plasmid vector pEGFPC1/p53 was constructed to over-express p53 then it was transfected into HeLa cells.Transcription levels of p53 and PKR mRNA were detected by reverse transcriptase polymerase chain reaction(RT-PCR)among pEGFP-C1/p53 transfection group,pEGFP-C1 transfection group and blank control group（only transfection reagent was added）；Protein expression levels of p53,PKR,phosphated PKR（p-PKR）and phosphated α subunit of eukaryotic initiation factor 2（p-eIF2α）which is the downstream substrate of PKR were detected by Western Blot among three groups；Proliferation of HeLa cell were determined by methyl thiazolyl tetrazolium（MTT）assay；Invasion of HeLa cell were determined by Transwell cell assay.ResultsRecombinant plasmid vector pEGFP-C1/p53 was successfully constructed to overexpress p53；Transcription level of p53 and PKR mRNA in pEGFP-C1/p53 transfection group were higher than those in pEGFP-C1 transfection group and in blank control group(P＜0.05)，and there were no significant difference between their levels in pEGFP-C1 transfection group and in blank control group；Protein expression levels of p53,PKR,p-PKR andp-eIF2α in pEGFP-C1/p53 transfection group were higher than those in pEGFP-C1 transfection group and in blank control group(P＜0.05)，and there were no significant difference between those expression levels in pEGFP-C1 transfection group and in blank control group；MTT and Transwell cell results showed that proliferation and invasion of HeLa cells in pEGFP-C1/p53 transfection group were weaker than those in pEGFP-C1 transfection group and in blank control group(P＜0.05)，and there were no significant difference between proliferation and invasion of HeLa cells in pEGFP-C1 transfection group and in blank control group.Conclusionp53 can up-regulate the expression and activity of PKR,promote activation of PKR/eIF2α signal transduction passage and restrain cell proliferation and invasion of HeLa cells.

genes,p53;protein kinases;cell proliferation;neoplasm invasiveness;α subunit of eukaryotic initiation factor 2

R737.33

A

10.3969/j.issn.0253-9896.2014.12.005

天津市衛(wèi)生局科技基金重點(diǎn)項(xiàng)目(2012KR05)

天津市第一中心醫(yī)院婦產(chǎn)科（郵編300192）