何佳麗 周 威 程清洲 瞿永華

鄂產(chǎn)蜂膠的抗氧化效能研究※

何佳麗 周 威 程清洲 瞿永華

目的通過測(cè)定小鼠血液中抗氧化酶含量來研究蜂膠（PROPOLIS）的抗氧化效能。方法采用D-半乳糖制作的衰老模型，將小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、藥物低、中、高劑量組。連續(xù)給藥灌胃30d后，檢測(cè)抗氧化酶相關(guān)指標(biāo)。結(jié)果各劑量組能提高小鼠血液中SOD、GSH-PX的活性，并能降低MDA的含量。結(jié)論蜂膠（PROPOLIS）具有較好的消除自由基、抗氧化的作用。

蜂膠；D-半乳糖；抗氧化；血液

研究表明，香菇、人參等很多中草藥可以直接清除自由基，降低丙二醛（MDA）含量，提高谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）等抗氧化酶的活性，發(fā)揮抗氧化作用[1-2]。自由基與多種疾病的發(fā)病與轉(zhuǎn)歸有關(guān)，因此，在營(yíng)養(yǎng)學(xué)、中醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域內(nèi)研究天然抗氧化物質(zhì)是一大熱點(diǎn)。蜂膠是蜜蜂在修補(bǔ)蜂巢時(shí)分泌的粘性物質(zhì)，顏色通常為黑褐色或黃褐色，具有保護(hù)胃黏膜、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、調(diào)節(jié)血脂、血糖等功能[3]。其藥理活性及各種產(chǎn)品研發(fā)也是蜂膠研究的重點(diǎn)。此項(xiàng)研究中采用小鼠衰老動(dòng)物模型，研究鄂產(chǎn)蜂膠提取物（Propolis extraction）對(duì)小鼠血液中SOD、GSH-Px的活性及MDA含量的測(cè)定，來研究蜂膠提取物的延緩衰老和抗氧化等作用。

1 材料與方法

1.1 材料 D-半乳糖（貴州同濟(jì)堂制藥有限公司，批號(hào)：0009743822）；SOD試劑盒、MDA試劑盒、GSH-Px試劑盒、（廣州白云山陳李劑藥廠有限公司，批號(hào)130730-2，130812-7，130926-3）；測(cè)定參照南京建成生物工程公司GSH-Px、MDA、SOD試劑盒說明書方法測(cè)定。WFZ-UV2000紫外可見分光光度計(jì)（浙江泰康儀器有限公司，AA20130402）。

1.2 蜂膠藥物組的準(zhǔn)備 實(shí)驗(yàn)用蜂膠購(gòu)自神農(nóng)架玉泉綠色產(chǎn)品有限公司，由武漢市小蜜蜂有限公司提供。采用醇法提取蜂膠提取物[4]，灌胃前配制成大鼠的小30mg/kg、中60mg/kg、高90mg/kg劑量濃度，加吐溫-80℃助溶，4℃低溫保存，備用。每日分兩次，每次 0.5ml，按給藥劑量進(jìn)行灌胃。模型組和對(duì)照組用相應(yīng)體積的生理鹽水灌胃。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組和處理 將昆明種系實(shí)驗(yàn)小白鼠，雌雄各半，共60只，體質(zhì)量18～20g，隨機(jī)分為五組，每組12只，雌雄各半，分籠飼喂。每日一次，頸背部皮下注射120mg·kg-1，D-半乳糖滅菌溶液，連續(xù)30天，進(jìn)行小鼠衰老動(dòng)物模型的制作[5]。第Ⅰ組為對(duì)照組：生理鹽水兩次灌胃，每次0.5ml；第Ⅱ組為模型組：按上述動(dòng)物模型制作方案制作，同時(shí)生理鹽水灌胃兩次，每次 0.5ml；第Ⅲ組、第Ⅳ組、第Ⅴ組：頸背部皮下注射D-半乳糖120mg·kg-1體重，按上述小、中、高劑量分兩次灌胃，每次0.5ml。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物全部都使用全價(jià)混合飼料喂養(yǎng)，自由攝食和取水，持續(xù)30天后，拔眼球采血（每管加0.2ml肝素鈉注射液抗凝），分別測(cè)定血液中MDA的含量和SOD及GSH-Px的活性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS軟件13.0版進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和數(shù)據(jù)處理。

2 結(jié)果

將SOD、GSH-Px及MDA的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果匯總，列表（表1）。表1數(shù)據(jù)中，模型組較對(duì)照組SOD、GSH-Px明顯降低及MDA含量升高（P＜0.05），說明此衰老模型組制作成功并可作為此次實(shí)驗(yàn)所用。藥物組中的低、中、高各劑量組GSH-Px、SOD活性均有升高和MDA含量的降低，達(dá)到中等劑量即為明顯（P＜0.05，或P＜0.01）。蜂膠的用量達(dá)到60mg/kg時(shí)即可有效發(fā)揮作用，具有降低MDA含量和升高小鼠血液GSH-Px、SOD活性的作用。

3 討論

D-半乳糖所致小鼠衰老模型穩(wěn)定可靠，在抗衰老研究中被廣泛應(yīng)用[5]。此次實(shí)驗(yàn)復(fù)制的D-半乳糖小鼠衰老模型，經(jīng)過檢測(cè)具備衰老模型組使用條件。正常細(xì)胞內(nèi)存在有自由基的清除系統(tǒng)，機(jī)體內(nèi)常見SOD、GSH-Px、CAT和MDA等可作為氧自由基生成量的指標(biāo)，反應(yīng)機(jī)體通過酶系統(tǒng)與非酶系統(tǒng)引發(fā)產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化作用，以及其產(chǎn)物引起的蛋白質(zhì)分子內(nèi)與分子間形成交聯(lián)，發(fā)生裂解、加成、去氫等眾多反應(yīng)，從而引起DNA的雙螺旋交聯(lián)出現(xiàn)錯(cuò)誤或者沒有辦法進(jìn)行分裂，進(jìn)而導(dǎo)致一些酶的活性發(fā)生變化，最后直接影響到細(xì)胞代謝的機(jī)理[6]。蜂膠能顯著降低MDA的含量和提高GSH-Px、SOD的活性，是一種很強(qiáng)的天然抗氧化劑，服用蜂膠不僅可以減少自由基對(duì)細(xì)胞的損害，還可防治多種并發(fā)癥。本實(shí)驗(yàn)中，蜂膠提取物具有的升高血液SOD、GSH-Px活性及降低MDA含量作用，從一個(gè)側(cè)面證實(shí)了蜂膠具有免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗腫瘤、抗炎、抗病毒、抑菌、護(hù)肝等多種生物學(xué)活性[7-8]，為鄂產(chǎn)蜂膠的醫(yī)療應(yīng)用和多功能產(chǎn)品開發(fā)奠定了一定的基礎(chǔ)。

表1 蜂膠提取物對(duì)小鼠血液SOD、GSH-Px活性及MDA含量的影響[(±s),n=12]

表1 蜂膠提取物對(duì)小鼠血液SOD、GSH-Px活性及MDA含量的影響[(±s),n=12]

注：與模型組比較；aP＜0.05，bP＜0.01

組別 SOD(U/ml) GSH-Px(U/ml) MDA(nmol/ml)對(duì)照組 169.41±17.96a 230.81±22.46a 9.86±2.80a模型組 119.86±22.84 218.65±18.42 11.44±1.90低劑量組 128.94±14.34 233.08±27.12a 9.45±3.08a中劑量組 162.40±18.43b 318.46±18.40a 8.66±1.94b高劑量組 145.16±16.95a 286.54±22.18b 9.75±3.35a

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R285.5

A

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武漢市科技攻關(guān)項(xiàng)目（編號(hào)：201220822276）；武漢輕工大學(xué)大學(xué)生科研項(xiàng)目（編號(hào)：xsky054）

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