沈秀玲

高效液相色譜法測(cè)定清開靈注射液中黃芩苷與綠原酸的含量

沈秀玲

目的對(duì)高效液相色譜法檢測(cè)清開靈注射液中黃芩苷與綠原酸含量的效果進(jìn)行分析探討，為今后的藥學(xué)研究工作提供可靠的參考依據(jù)。方法固定相為C18硅膠柱，流動(dòng)相為甲醇-0.4%磷酸水溶液，梯度洗脫，流速1.0ml/min，波長(zhǎng)為323nm。結(jié)果綠原酸的線性范圍4.251～105.900μg/ml，r=0.9998，黃芩苷的線性范圍9.223～203.700μg/ml，r=0.9999。實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性、精密度良好，樣品穩(wěn)定性理想。結(jié)論經(jīng)高效液相色譜法對(duì)清開靈注射液中黃芩苷與綠原酸含量進(jìn)行檢測(cè)具有操作簡(jiǎn)單、快速、結(jié)果準(zhǔn)確可靠、精密度與重現(xiàn)性理想，在清開靈注射液質(zhì)量控制中具有重要作用，值得關(guān)注。

清開靈注射液；黃芩苷；綠原酸；含量測(cè)定；高效液相色譜法

本次研究出于對(duì)清開靈注射液中黃芩苷與綠原酸含量進(jìn)行檢測(cè)的目的，采取高效液相色譜法對(duì)清開靈注射液的有效成分黃芩苷和綠原酸展開了含量測(cè)定，現(xiàn)匯報(bào)結(jié)果如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器 所用儀器為KNAUER高效液相色譜儀，包括有K-501HPLC泵、分析型動(dòng)態(tài)混合器、K-2600UV Detector、7725i手動(dòng)進(jìn)樣閥、Eero-chrom 2000 Basic Edition色譜工作站軟件V2、O5和T3000柱溫箱，除以上儀器外還需用到KQ-400BD型數(shù)控超生波清洗器、U-1900型紫外分光光度計(jì)、賽多利斯BP211D電子分析天平、離心機(jī)等。

1.2 試劑與試藥 實(shí)驗(yàn)中所用試劑包括甲醇、磷酸均為分析純，中蒸餾水。所用試藥包括清開靈注射液，批號(hào)為 MP1231、MP1232、MP1233。綠原酸對(duì)照品、黃芩苷對(duì)照品均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為 C18硅膠柱，規(guī)格為150.0mm×4.6mm，5μm，流動(dòng)相為：分析甲醇-濃度為 0.4%的磷酸水溶液，梯度洗脫，流速控制在1.0ml/min，柱溫為30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為323nm，進(jìn)樣量為20μl[1]。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液制備 精密稱定5.31mg的綠原酸對(duì)照品和11.53mg的黃芩苷對(duì)照品，分別放置在25ml的棕色容量瓶中，綠原酸經(jīng)甲醇-水=1:1溶解后定容，黃芩苷首先經(jīng)純甲醇溶解，而后經(jīng)甲醇-水=1:1定容。制成濃度為0.2124mg/ml的綠原酸對(duì)照品溶液和濃度為0.4612mg/ml的黃芩苷對(duì)照品溶液，冰箱內(nèi)低溫保存。

2.2.2 供試品溶液制備 準(zhǔn)確吸取1.0ml的清開靈注射液，放置在10ml的容量瓶中，經(jīng)甲醇-水=1:1溶液定容至刻度，取1.0ml溶液放置在10ml的容量瓶中，甲醇-水=1:1定容至刻度。制成供試品溶液備用[2]。

2.3 線性關(guān)系考察 精密量取綠原酸、黃芩苷對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、1.5、2.0、2.5ml，分別放置在 5ml的棕色容量瓶中，經(jīng)甲醇-水=1:1定容至刻度，搖勻后經(jīng)0.45微孔濾膜過(guò)濾，以2.1所示色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，將標(biāo)準(zhǔn)物的峰面積作為縱坐標(biāo)，將標(biāo)準(zhǔn)物的濃度作為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。經(jīng)計(jì)算發(fā)現(xiàn)，綠原酸與黃芩苷的線性回歸方程分別為：Y綠原酸=891.82C－0.6113，r=0.9998，證實(shí)綠原酸濃度范圍在 4.251～105.900μg/ml之間存在良好線性關(guān)系；Y黃芩苷=671.02C－0.9891，r=0.9999，證實(shí)黃芩苷濃度范圍在9.223～203.700μg/ml之間存在良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度實(shí)驗(yàn) 精密量取線性關(guān)系下濃度的綠原酸、黃芩苷對(duì)照品溶液各0.8ml，經(jīng)2.1色譜條件分別連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定綠原酸與黃芩苷的峰面積，計(jì)算RSD值。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，綠原酸峰面積的RSD值為0.76%，黃芩苷峰面積的RSD值為1.82%，證實(shí)儀器具有良好的精密度。

2.5 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 取同一批次的清開靈注射液，經(jīng)2.2所示條件制成供試品溶液，在2.1所示色譜條件下對(duì)綠原酸、黃芩苷的峰面積分別進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算RSD值。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，綠原酸峰面積的 RSD值為1.98%，黃芩苷峰面積的RSD值為2.67%，證實(shí)重現(xiàn)性理想。

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密量取0.1ml清開靈注射液，經(jīng)2.2所示制成供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10、12h內(nèi)以2.1所示色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，計(jì)算RSD值，結(jié)果發(fā)現(xiàn)綠原酸峰面積的RSD值為1.7%，黃芩苷峰面積的RSD值為0.51%，證實(shí)清開靈注射液在12h內(nèi)可保持足夠穩(wěn)定性。

2.7 加樣回收實(shí)驗(yàn) 精密量取0.1ml樣品，共3份，放置在 50ml棕色容量瓶中，分別加入綠原酸對(duì)照品0.4、0.6、0.8ml，黃芩苷對(duì)照品0.5、1.0、1.5ml，而后經(jīng)甲醇-水=1:1溶解并定容，經(jīng)2.1色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)。計(jì)算回收率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，綠原酸平均回收率為102.00%，黃芩苷的平均回收率為100.42%，見表1。

2.8 樣品中綠原酸與黃芩苷含量測(cè)定 取3個(gè)批次的清開靈注射液，經(jīng)2.2所示方法制成供試品溶液，在2.1所示色譜條件下進(jìn)樣檢測(cè)，測(cè)定綠原酸與黃芩苷的峰面積，以線性回歸方程計(jì)算二者的含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，各批次樣品中綠原酸與黃芩苷含量無(wú)明顯差異，分別為（0.2246±0.0123）%、（4.2198± 0.2141）%。

表1 加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)(%)

3 討論

目前在臨床上清開靈注射液具有良好的退燒、抗炎作用，其是由黃芩和金銀花組成的一種復(fù)方中藥注射劑，現(xiàn)代藥理研究結(jié)果顯示，清開靈注射液的主要有效成分為黃芩苷、綠原酸等，現(xiàn)階段在清開靈注射液質(zhì)量控制中，一般以這兩種成分作為質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)[3]。本次實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，經(jīng)高效液相色譜法對(duì)清開靈注射液中綠原酸、黃芩苷進(jìn)行測(cè)定時(shí)具有良好的精密度、重現(xiàn)性，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，操作簡(jiǎn)單迅速，值得關(guān)注。

[1] 唐奇.HPLC法測(cè)定復(fù)方金銀花顆粒中綠原酸的含量[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用,2010,4(19):133-134.

[2] 李昌海,譚忠軍.高效液相色譜法測(cè)定麻杏止咳合劑中綠原酸含量[J].中國(guó)藥業(yè),2010,19(19):21-22.

[3] 劉放,陳冰冰,吳小平,等.HPLC法測(cè)定菊花中綠原酸的含量[J].西北藥學(xué)雜志,2010.25(05):350-352.

R927.2

A

1673-5846(2014)02-0030-02

吉林省集安益盛藥業(yè)，吉林通化 134200