靳自斌 趙后鋒 朱相華 耿德勤 喬娟

五羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體啟動(dòng)子區(qū)基因多態(tài)性、應(yīng)激事件與抑郁癥的相關(guān)性*

靳自斌1趙后鋒2朱相華2耿德勤3喬娟1

目的探討5－羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體啟動(dòng)子區(qū)(5－HTTLPR)基因多態(tài)性與抑郁癥的關(guān)系以及基因型、應(yīng)激事件對(duì)抑郁癥狀的影響。方法運(yùn)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)和限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR－RFLP)測(cè)定100例抑郁癥患者(研究組)和100例健康對(duì)照者(對(duì)照組)的5－HTTLPR基因多態(tài)性的分布頻率。應(yīng)用漢密爾頓抑郁量表(HAMD)評(píng)定抑郁癥患者的嚴(yán)重程度，應(yīng)用生活事件量表(LES)評(píng)定抑郁癥患者的應(yīng)激事件。結(jié)果兩組5－HTTLPR基因型頻率和等位基因頻率比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05);研究組SS基因型的HAMD總分大于LL、LS基因型患者(P＜0．05);SS基因型患者焦慮/軀體化、核心因子、睡眠因子分高于SL及LL基因型患者(P＜0．05);5－HTTLPR基因多態(tài)性與應(yīng)激事件的交互作用對(duì)抑郁癥的嚴(yán)重程度存在影響(P=0．002)。結(jié)論5－HTTLPR基因多態(tài)性可能與抑郁癥的發(fā)病無(wú)關(guān)，但與應(yīng)激事件的交互作用影響抑郁癥嚴(yán)重程度，其基因型與抑郁癥患者的臨床癥狀有關(guān)。

抑郁癥5－羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體基因多態(tài)性應(yīng)激事件

目前關(guān)于5－羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體基因啟動(dòng)子區(qū)多態(tài)性(5－HTTLPR)與抑郁癥之間的關(guān)系一直是研究的焦點(diǎn)，但有關(guān)的研究存在不少相互矛盾的結(jié)果。Scott J等［1］隨訪研究認(rèn)為，重大的應(yīng)激事件應(yīng)激或長(zhǎng)期存在一定程度的應(yīng)激事件應(yīng)激常常是許多抑郁癥患者癥狀反復(fù)并持續(xù)存在的重要原因。關(guān)于5－HTTLPR與生活應(yīng)激聯(lián)合作用對(duì)抑郁癥患者的影響研究較少，本研究將5－HTTLPR基因多態(tài)性，應(yīng)激事件與抑郁癥相結(jié)合探討抑郁癥發(fā)病與兩者之間的關(guān)系。

1 對(duì)象與方法

1．1 對(duì)象研究組來(lái)自于2012年12月～2014年1月徐州市東方人民醫(yī)院門診及住院的抑郁癥患者。入組標(biāo)準(zhǔn):(1)符合國(guó)際疾病分類第十版(ICD－10)中對(duì)抑郁發(fā)作的診斷標(biāo)準(zhǔn);(2)17項(xiàng)漢密爾頓抑郁量表(HAMD)評(píng)分≥17分;(3)入組前至少兩周內(nèi)未服藥;(4)右利手。排除標(biāo)準(zhǔn):排除由器質(zhì)性疾病或其他精神疾病引起的繼發(fā)性抑郁狀態(tài);排除其他精神障礙，頭部外傷史及神經(jīng)系統(tǒng)疾病，精神活性物質(zhì)及各種非成癮性物質(zhì)濫用者，近1個(gè)月使用過(guò)電抽搐治療或經(jīng)顱磁刺激治療者。對(duì)照組來(lái)自于徐州市東方人民醫(yī)院的醫(yī)護(hù)人員、實(shí)習(xí)同學(xué)、保潔人員、來(lái)院體檢的健康人群。排除有抑郁癥和其他精神疾病家族史者，并排除神經(jīng)系統(tǒng)疾病、明確的軀體疾病、藥物或其他精神活性物質(zhì)依賴史。以上兩組均知情同意本研究，并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)的同意。

1．2 方法

1．2．1 樣本采集和儲(chǔ)存每名患者清晨空腹采血，取空腹血時(shí)間為早上8點(diǎn)，一次抽取肘靜脈血5 ml，用EDTA抗凝的真空采血管采血1管，采血后1 h內(nèi)將血標(biāo)本4℃離心(3000rpm)15 min，分離血漿后放入－70℃冰箱內(nèi)儲(chǔ)存整批待檢;對(duì)照組以同樣方法采血并保存。

1．2．2 基因型檢測(cè)(1)DNA的提取:采用DNA提取試劑盒，嚴(yán)格按說(shuō)明進(jìn)行。所采用的引物為:正向5'－ATGCCAGCACCTAACCCCTAATGT－3'，反向5'－GGA CCGCAAGGTGGGCGGGA－3'，由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成，為凍干粉，使用前加雙蒸水，使其濃度為20 mol/L，－20℃保存。(2)PCR反應(yīng)體系:容量為20 μl，反應(yīng)體系含50 ng基因組DNA，10 pmol引物，1U TaqDNA酶，2 μl 10xBuffer緩沖液，200 mol/L dNTPs。(3)PCR反應(yīng)條件:即94℃預(yù)變性2 min，繼94℃變性60 s，60℃退火2 min，72℃延伸2 min，共35個(gè)循環(huán)，72℃延伸4 min，然后降至4℃，4℃冰箱保存待檢。(4)PCR產(chǎn)物基因型鑒定:運(yùn)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)和限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。將PCR產(chǎn)物于3%瓊脂糖中電泳分離30 min，在紫外光下檢視各條帶，以100 bp DNA ladder marker為標(biāo)準(zhǔn)物檢查各個(gè)片段大小。

1．2．3 量表評(píng)定(1)一般狀況調(diào)查:采用自制的一般狀況調(diào)查量表收集入組者的相關(guān)資料，內(nèi)容包括:年齡、性別、受教育程度、家族史、病前性格等。(2) HAMD:抑郁癥嚴(yán)重程度使用17項(xiàng)HAMD評(píng)定，由兩名經(jīng)過(guò)嚴(yán)格評(píng)定操作培訓(xùn)精神科主治醫(yī)師評(píng)定，一致性監(jiān)測(cè)的Kappa=0．83。HAMD量表中第4、5、6項(xiàng)條目均為睡眠障礙相關(guān)條目，分別為入睡困難、睡眠不深和早醒。1、7、8、14條目為遲滯因子，由抑郁情緒、工作和興趣、阻滯和性癥狀等4項(xiàng)組成;l、2、7、8、9、10項(xiàng)為Maier癥狀條目，由抑郁情緒、有罪感、工作和興趣、阻滯、激越、精神性焦慮等6項(xiàng)組成;10、11、12、13、15、17為焦慮/軀體化條目，由精神性焦慮、軀體性焦慮、胃腸道癥狀、全身癥狀、疑病和自知力等5項(xiàng)組成;l、2、3、4、7為核心條目，由抑郁情緒、有罪感、自殺、入睡困難、工作和興趣等5項(xiàng)組成。(3)生活事件量表(Life Event Scale，LES):評(píng)定應(yīng)激事件，采用了我國(guó)常見(jiàn)的48條應(yīng)激事件，量表由患者自行答題完成，包括家庭生活問(wèn)題(28條)，工作學(xué)習(xí)問(wèn)題(13條)，社交問(wèn)題及其他方面的相關(guān)問(wèn)題(7條)。LES分值越高說(shuō)明受試者的壓力越大。量表由患者按指導(dǎo)語(yǔ)自行答題完成，評(píng)定人員要記錄應(yīng)激事件發(fā)生的次數(shù)及影響程度。

1．2．4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS13．0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，兩組以上比較參用單因素方差分析，組間相互比較采用q檢驗(yàn)，多元回歸分析分析影響抑郁癥的相關(guān)因素，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0．05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 HTTLPR基因多態(tài)性Hardy－Weinberg遺傳平衡性檢驗(yàn)研究組和對(duì)照組中LL、LS、SS基因型分布頻率與期望頻率的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2．32，P= 0．31;χ2=5．74，P=0．06)。見(jiàn)表1。符合H－W平衡定律，HTTLPR群體基因遺傳平衡。

表15 －HTTLPR基因多態(tài)性遺傳平衡檢測(cè)［n(%)］

2．25 －HTTLPR基因多態(tài)性檢測(cè)比較兩組5－HTTLPR基因型頻率和等位基因頻率的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)。見(jiàn)表2。

2．3 HAMD總分及各因子分與基因型的關(guān)系利用方差分析對(duì)兩組所有受試者的HAMD總分與每位受試者的基因型進(jìn)行分析，結(jié)果表明3組基因型HAMD總分比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=6．238，P=0．002)，其中SS型患者在睡眠、核心因子和焦慮/軀體化評(píng)分顯著高于LS及LL型患者(F=3．365，P=0．016;F= 5．371，P=0．001;F=6．452，P=0．001)。見(jiàn)表3。

表3 HAMD總分及因子分與5－HTTLPR基因型的關(guān)系()

表3 HAMD總分及因子分與5－HTTLPR基因型的關(guān)系()

HAMDLLLSSSF值P值總分25．98±5．2228．53±4．6832．05±5．716．2380．002核心因子10．43±2．6711．50±2．4812．45±2．195．3710．001遲滯8．09±1．719．05±1．599．56±1．460．8300．410睡眠3．52±1．044．01±1．075．22±1．583．3650．016焦慮/軀體化6．85±2．047．57±2．539．24±2．156．4520．001

2．4 應(yīng)激事件與5－HTTLPR基因型的交互作用對(duì)抑郁程度的影響采用逐步回歸方程分析5－HTTLPR基因型、應(yīng)激事件及兩者相互作用對(duì)抑郁癥嚴(yán)重程度的影響，結(jié)果表明5－HTTLPR基因型與應(yīng)激事件的交互作用對(duì)抑郁癥嚴(yán)重程度存在影響，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(R2=0．645，F(xiàn)=19．23，P=0．002)。見(jiàn)表4。

表4 應(yīng)激事件、基因型及其交互作用與抑郁癥的相關(guān)性

3 討論

5－HTTLPR是抑郁癥歷年來(lái)涉及次數(shù)最多的候選基因位點(diǎn)。國(guó)內(nèi)外大量的研究提示:S/S等位基因和抑郁癥發(fā)病相關(guān)［2，3］也有很多研究顯示5－HTTLPR與抑郁癥不相關(guān)［4，5］。結(jié)果有很多矛盾之處，本研究結(jié)果顯示，研究組和對(duì)照組的5－HTTLPR基因型頻率和等位基因頻率都無(wú)顯著性差異，說(shuō)明5－HTTLPR基因多態(tài)性與抑郁癥的發(fā)病不存在直接的相關(guān)性。不同基因型患者的HAMD評(píng)分不同，其中SS基因型評(píng)分最高，LS次之，LL最低，表明5－HTTLPR基因多態(tài)性與抑郁癥的嚴(yán)重程度相關(guān)。

本研究顯示SS基因型不但影響抑郁癥患者的嚴(yán)重程度，還與抑郁患者的核心癥狀、睡眠和焦慮/軀體化癥狀有關(guān)，而對(duì)Maire因子及遲滯因子的影響相對(duì)較小。這一結(jié)果與國(guó)內(nèi)部分研究結(jié)果一致，部分研究結(jié)果不一致，宋亞靜等［6］的研究表明S等位基因可能是抑郁癥患者自殺的危險(xiǎn)基因，SS基因型人群可能是抑郁癥患者自殺的危險(xiǎn)人群，特別是攜帶S等位基因的重度抑郁癥患者更易自殺。張莉等［7］研究5－HTTLPR基因多態(tài)性等位基因和基因型分別與抑郁癥患者HAMD睡眠障礙的3個(gè)條目(入睡困難、睡眠不深、早醒)評(píng)分及總因子分均相關(guān)。考慮不一致的因素可能有:抑郁癥及對(duì)照組入組評(píng)估是否嚴(yán)格、抑郁癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)和診斷準(zhǔn)確程度、基因檢測(cè)結(jié)果是否可靠、統(tǒng)計(jì)方法是否正確使用等。關(guān)于抑郁癥與應(yīng)激因素的相關(guān)性，也有很多讓人無(wú)法解釋的地方，比如說(shuō):為什么不同的兩個(gè)人，即使受到相同的刺激，有的人會(huì)發(fā)病，有的人不會(huì)發(fā)病，也就引起人們對(duì)遺傳與應(yīng)激交互作用的研究，2009年，Risch N等［8］在分析了14項(xiàng)相關(guān)研究的一項(xiàng)Meta分析后報(bào)道:無(wú)論是5－HTTLPR單獨(dú)作用，還是其他應(yīng)激事件交互作用，均不能影響抑郁癥的發(fā)病。國(guó)內(nèi)，李忻蓉［9］在研究中發(fā)現(xiàn)，納入抑郁癥和正常對(duì)照各239例，5－HTT基因多態(tài)性與人格、應(yīng)激事件、應(yīng)對(duì)方式和社會(huì)支持間均存在交互作用。本研究結(jié)果亦證實(shí)5－HTTLPR基因型及其與應(yīng)激事件的交互作用可影響抑郁癥的嚴(yán)重程度。Caspi A等［10］研究發(fā)現(xiàn)5－HTTLPR基因多態(tài)性在有童年應(yīng)激事件的交互作用下才會(huì)增加患抑郁癥的危險(xiǎn)。本研究發(fā)現(xiàn):5－HTTLPR基因多態(tài)性與應(yīng)激事件的交互作用影響抑郁癥的嚴(yán)重程度。

綜上所述，抑郁癥發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜。大多數(shù)的研究只涉及一種基因型，而未深入考慮到多個(gè)基因之間和基因與應(yīng)激事件，人格特征交互作用對(duì)抑郁癥的影響，而這些因素綜合作用將是解釋抑郁癥發(fā)病機(jī)制的新趨勢(shì)。本研究將繼續(xù)擴(kuò)大樣本量，開(kāi)展多中心、多個(gè)基因型的研究，期望能夠?qū)σ钟舭Y的遺傳學(xué)研究提供理論依據(jù)。

［1］Scott J，Eecleston D，Boys R．Can we predict the persistence of depression［J］．Br J Psychiatry，1992，161:633－637

［2］張?zhí)m，宋亞靜，殷宏，等．5－羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體基因多態(tài)性和抑郁癥的相關(guān)性研究［J］．臨床薈萃，2008，23:1300－1302

［3］曹美群，胡隨瑜，張春虎，等．5－羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體、G蛋白B3亞單位基岡多態(tài)性與抑郁癥的相關(guān)性研究［J］．中國(guó)臨床心理學(xué)雜志，2007，15:318－320，317

［4］范娟，乇立偉，禹順英，等．5－羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體基因多態(tài)性與青少年抑郁癥的關(guān)聯(lián)研究［J］．上海精神醫(yī)學(xué)，2007，19: 88－91

［5］Chan F，Lanctst KL，F(xiàn)einstein A，et al．The serotonin transporter polymorphisms and major depression following traumatic brain injury［J］．Brain Inj，2008，22(6):47l－479

［6］宋亞靜，張?zhí)m，殷宏，等．5－羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體基因多態(tài)性和抑郁癥的發(fā)病、性別、嚴(yán)重程度及自殺行為的相關(guān)性［J］．西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，29(6):674－678

［7］張莉，徐勇，孫燕，等．5－羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體基因多態(tài)性與抑郁癥睡眠障礙數(shù)量性狀的相關(guān)研究［J］．中國(guó)神經(jīng)精神疾病雜志，2009，35(4):234－237

［8］Risch N，Herrell R，Lehner T，et al．Interaction between the serotonin transporter gene(5－HTTLPR)，stressful life events，and risk of depression:a meta－analysis［J］．JAMA，2009，301 (23):2462－2471

［9］李忻蓉．5－HT基因，社會(huì)心理因素及其交互作用與重性抑郁癥的關(guān)聯(lián)研究［D］．太原:山西醫(yī)科大學(xué)，2007

［10］Caspi A，Sugden K，Moffitt TE，et al．Influence of life stress on depression:moderation by a polymorphism in the 5－HTT gene［J］．Science，2003，301(5631):386－389

Correlation of polymorphism of 5-HT transporter gene-linked promoter region，stress events with depression．

JIN Zibin，ZHAO Houfeng，ZHU Xianghua，et al．Dongfang Hospital，Xuzhou Medical College，Xuzhou 221004，China

ObjectiveTo explore the relationship between polymorphism of 5－HT transporter gene－linked promoter region (5－HTTLPR)and depression，to explore the effect of genotype and stress events on depression．MethodsThe distribution of 5－HTTLPR polymorphism was detected by polymerase chain reaction－restriction fragment length polymorphism(PCR－RFLP)in100 patients with depression and 100 healthy controls．Hamilton depression rating scale(HAMD)was used to evaluate the severity of depression and the life events scale(LES)was used to assess the stress events．ResultsThere were no significant differences in 5－HTTLPR genotype frequency and allele frequency between depression group and control group(P＞0．05)．Score of HAMD in depressive patients with SS genotype was significantly higher than those with LL and LS genotype(P＜0．05)．Factor scores of anxiety/somatization，core factor and sleep factor in depressive patients with SS genotype were significantly higher than those with SL and LL genotype(P＜0．05)．The interaction between 5－HTTLPR polymorphism and life events affected the severity of depression significantly(P=0．002)．ConclusionThe polymorphism of 5－HTTLPR may not be associated with the pathogenesis of depression，but the interaction of 5－HTTLPR gene polymorphism with stress events may influence the severity of depression．And the genotypes of 5－HTTLPR are associated with different depressive symptoms．

Depression5－h(huán)ydroxytrypamine transporterGene polymorphismStress event

R749．4

A

1009－7201(2014)－06－0434－03

10．3969/j．issn．1009－7201．2014．06．011

2014－10－20)

江蘇省徐州市科技指導(dǎo)性計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào):XZZD1267)

1．221004江蘇徐州，徐州醫(yī)學(xué)院附屬東方人民醫(yī)院2．江蘇省徐州市東方人民醫(yī)院心研所3．徐州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院

喬娟，E－mail:xzdfqj@163．com