朱艷華等

摘要：采用水蒸氣蒸餾法提取一年蓬（Erigeron annus）葉的揮發(fā)油，以DPPH自由基（DPPH·）、亞硝酸鈉清除作用和金屬離子螯合作用為指標(biāo)評價揮發(fā)油的體外抗氧化活性。結(jié)果表明，一年蓬葉20%揮發(fā)油對DPPH·、亞硝酸鈉的清除作用和金屬離子螯合作用的效果明顯，其IC50分別為71.99、148.46、75.22 μL。一年蓬葉揮發(fā)油具有良好的體外抗氧化活性，且樣品量與抗氧化活性存在量效關(guān)系。

關(guān)鍵詞：一年蓬（Erigeron annus）葉；揮發(fā)油；抗氧化活性

中圖分類號：R962 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）06-1382-02

Antioxidant Activities in Vitro of Volatile Oil from Leaves of Erigeron annus

ZHU Yan-hua，REN Dong，DING Xiu-ping，MIAO Hua-biao，LI Xiao-yu，BI Shu-feng

（College of Life and Environment Science， Huangshan University， Huangshan 245041， Anhui， China）

Abstract： The volatile oil from leaves of Eigeron annus was extracted by steam distillation and its antioxidant activities were evaluated by scavenging capacity against DPPH·and sodium nitrite， and metal chelating ability. The results showed that 20% volatile oil had significant scavenging capacity against DPPH· and sodium nitrite. Metal chelating ability with IC50 value was 71.99， 148.46 and 75.22 μL， respectively. The volatile oil from leaves of Eigeron annus had significant antioxidant activity in vitro and showed dose-effect relationship between the number of sample and antioxidant activity.

Key words： leaves of Eigeron annus； volatile oil； antioxidant activity

一年蓬（Erigeron annus）為菊科（Asterales）飛蓬屬（Erigeron）植物，為外來入侵種，廣泛分布于全國各地。一年蓬性平、味淡，具有清熱解毒、助消化的作用，主治消化不良、傳染性肝炎、急性腸胃炎、淋巴結(jié)炎、瘧疾、血尿，其根搗爛可敷牙齦腫[1，2]。一年蓬揮發(fā)油的化學(xué)成分及其抑菌作用已有文獻報道[3-6]，但其抗氧化活性研究鮮見報道。本研究以其對DPPH·、金屬離子螯合作用、亞硝酸鈉清除作用為指標(biāo)評價一年蓬葉揮發(fā)油的體外抗氧化活性，為一年蓬資源的開發(fā)利用及其藥理研究提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1 材料

一年蓬葉采自黃山學(xué)院校園，真空干燥后粉碎、過50目篩、裝瓶、備用；UV754N型紫外可見分光光度計購自上海精密科學(xué)儀器有限公司；揮發(fā)油提取器；1，1-二苯基苦基苯肼[DPPH，梯希愛（上海）化成工業(yè)發(fā)展有限公司]；無水乙醚、EDTA、 2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚（BHT）、過硫酸鉀等均為國產(chǎn)分析純。

1.2 方法

1.2.1 揮發(fā)油的提取 稱取20.0 g樣品置于揮發(fā)油提取器燒瓶中，加300 mL去離子水，用揮發(fā)油提取器按水蒸氣蒸餾法提取6 h，得到具有濃郁香味的淡黃色透明油狀物，共提取8次，用丙酮稀釋成體積分?jǐn)?shù)20%，備用。

1.2.2 揮發(fā)油對DPPH·清除作用的測定[7，8] 取20～100 μL 20%揮發(fā)油置于5只試管，樣品體積少于100 μL的試管，以丙酮補至100 μL。分別加4 mL 24 mg/L的DPPH乙醇（95%）溶液混合，避光2 h，在波長517 nm處測吸光度（Ai），以不加樣品的DPPH乙醇液為空白對照，測定吸光度（A0）。以0.1 mg/mL 維生素C替代揮發(fā)油為陽性對照。清除率=（1-Ai/A0）×100%。

1.2.3 揮發(fā)油對金屬離子螯合作用的測定[9] 取不同體積（20～100 μL）20%揮發(fā)油，用丙酮將體積補至100 μL，形成不同濃度梯度樣品。加入2.8 mL蒸餾水、50 μL 2 mmol/L的FeCl2·4H2O和50 μL 5 mmol/L的Ferrozine，10 min后在562 nm處測吸光度（At），以100 μL丙酮代替揮發(fā)油樣品為空白對照，測其吸光度（A0）。以0.5 mg/mL EDTA代替2%揮發(fā)油為陽性對照。螯合率=（1-At/A0）×100%。

1.2.4 揮發(fā)油對亞硝酸鈉清除作用的測定[10] 將0.5 mol/L的檸檬酸鈉-鹽酸緩沖液（pH 3.0） 5.0 mL置于10 mL容量瓶中，加入1 mL 0.1 g/L的NaNO2溶液和20～100 μL揮發(fā)油，用蒸餾水定容至刻度， 37 ℃下反應(yīng)1 h。取1 mL反應(yīng)液，加入4 g/L對氨基苯磺酸溶液2 mL和2 g/L N-1-萘乙二胺鹽酸鹽1 mL，搖勻放置15 min，在540 nm處測吸光度（Ax）；同時做對照試驗測其吸光度（A0）。以1 mg/mL BHT代替20%揮發(fā)油為陽性對照。清除率=[（A0-Ax）/A0]×100%。

2 結(jié)果與分析

2.1 揮發(fā)油對DPPH·的清除作用

由圖1可知，一年蓬葉20%揮發(fā)油對DPPH·有較好的清除作用，優(yōu)于0.1 mg/mL 維生素C，體積為100 μL時，清除率為59.09%。揮發(fā)油體積與清除率呈正相關(guān)，清除率隨著樣品體積的增加而逐步增大，但增幅隨著樣品體積的增大而減??；揮發(fā)油樣品體積（X）與清除率（Y）間的回歸方程為Y=0.455 1 x+17.236 1，R2=0.931 9。20%揮發(fā)油和0.1 mg/mL 維生素C的IC50（清除率為50%時樣品的體積）分別為71.99、166.32 μL，維生素C的體積是揮發(fā)油體積的2.31倍，揮發(fā)油對DPPH·的清除能力明顯優(yōu)于0.1 mg/mL 維生素C。

2.2 揮發(fā)油對金屬離子的螯合作用

由圖2可知，一年蓬葉20%揮發(fā)油對金屬離子具有一定螯合作用，但螯合能力低于0.5 mg/mL EDTA。樣品體積20～40 μL時，20%揮發(fā)油和0.5 mg/mL EDTA對金屬離子的螯合效果相近，樣品體積40～100 μL時，EDTA的螯合效果優(yōu)于揮發(fā)油。揮發(fā)油樣品量與金屬離子的螯合率存在量效關(guān)系，揮發(fā)油樣品體積（X）與清除率（Y）間的回歸方程為Y = 0.508 1X+11.778 2，R2=0.985 7。20%揮發(fā)油、0.5 mg/mL EDTA 的IC50分別為75.22、51.75 μL。

2.3 揮發(fā)油對亞硝酸鈉的清除作用

由圖3可知，一年蓬葉20%揮發(fā)油對亞硝酸鈉具有一定清除作用，其清除效果優(yōu)于1 mg/mL BHT，隨著樣品體積的增加，兩者清除率的差別逐步增加。揮發(fā)油體積（X）與清除率（Y）存在良好的線性相關(guān)，回歸方程為Y=0.280 2X+8.400 9，R2=0.970 2。20%揮發(fā)油、1 mg/mL BHT的IC50分別為148.46、195.61 μL。

3 小結(jié)與討論

20%一年蓬葉揮發(fā)油具有良好的體外抗氧化活性，對DPPH·清除作用、亞硝酸鈉的清除作用和金屬離子螯合作用的IC50分別為71.99、148.46、75.22 μL，對DPPH·和亞硝酸鈉的清除作用分別優(yōu)于0.1 mg/mL 維生素C和1 mg/mL BHT的陽性對照，對金屬離子螯合作用弱于0.5 mg/mL EDTA。天然產(chǎn)物的抗氧化活性是其在醫(yī)藥、保健品、抗氧化劑應(yīng)用的基礎(chǔ)，一年蓬葉在醫(yī)藥、食品、保健品等行業(yè)具有應(yīng)用前景。一年蓬作為一種外來入侵種，繁殖力強、分布廣，其資源豐富，將其開發(fā)利用是有效的防治途徑和方法。以綜合開發(fā)利用為防治模式比單純、機械地鏟除和使用除草劑去除更加環(huán)保、經(jīng)濟。

參考文獻：

[1] 方建新.野生一年蓬的開發(fā)利用[J].資源開發(fā)與市場，2006， 22（5）：474.

[2] 江蘇新醫(yī)學(xué)院. 中藥大詞典（上冊）[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1986.

[3] 楊再波，龍成梅，郭治友，等. 微波輔助頂空固相微萃取法快速分析黔產(chǎn)一年蓬不同部位揮發(fā)油化學(xué)成分[J].精細化工，2011，28（3）：242-246.

[4] 徐 瑯，賈元超，龔祝南. 一年蓬揮發(fā)油的氣相色譜——質(zhì)譜分析及體外抑菌活性研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2009，20（5）：1171-1172.

[5] 趙昱瑋，南敏倫，呂雪峰，等.一年蓬超臨界提取物的GC-MS測定[J].中國醫(yī)藥指南，2010，8（34）：221-223.

[6] RUDONKO V P，TYMCHUK S M，MEDVEDOVSKAYA O V， et al. Fatty acid composition of Eriferon species[J]. Khim Prir Sodein，1993，2（2）：294-295.

[7] 賈紅麗，張丕鴻，計巧靈，等.新疆阿勒泰百里香揮發(fā)油化學(xué)成分 GC-MS分析及抗氧化活性測定[J].食品科學(xué)，2009，30（4）：224-229.

[8] 趙金偉，李范洙，張 先.蘋果梨酚類物質(zhì)抗氧化活性研究[J].食品科學(xué)，2010，31（17）：170-172.

[9] 楊少輝，宋英今，王潔華，等.雪蓮果體外抗氧化和自由基清除能力[J]. 食品科學(xué)，2010，31（17）：166-169.

[10] 陸占國，李 偉，封 丹.蒔蘿籽精油成分及清除亞硝酸鈉研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2010（22）：479-482.

2 結(jié)果與分析

2.1 揮發(fā)油對DPPH·的清除作用

由圖1可知，一年蓬葉20%揮發(fā)油對DPPH·有較好的清除作用，優(yōu)于0.1 mg/mL 維生素C，體積為100 μL時，清除率為59.09%。揮發(fā)油體積與清除率呈正相關(guān)，清除率隨著樣品體積的增加而逐步增大，但增幅隨著樣品體積的增大而減??；揮發(fā)油樣品體積（X）與清除率（Y）間的回歸方程為Y=0.455 1 x+17.236 1，R2=0.931 9。20%揮發(fā)油和0.1 mg/mL 維生素C的IC50（清除率為50%時樣品的體積）分別為71.99、166.32 μL，維生素C的體積是揮發(fā)油體積的2.31倍，揮發(fā)油對DPPH·的清除能力明顯優(yōu)于0.1 mg/mL 維生素C。

2.2 揮發(fā)油對金屬離子的螯合作用

由圖2可知，一年蓬葉20%揮發(fā)油對金屬離子具有一定螯合作用，但螯合能力低于0.5 mg/mL EDTA。樣品體積20～40 μL時，20%揮發(fā)油和0.5 mg/mL EDTA對金屬離子的螯合效果相近，樣品體積40～100 μL時，EDTA的螯合效果優(yōu)于揮發(fā)油。揮發(fā)油樣品量與金屬離子的螯合率存在量效關(guān)系，揮發(fā)油樣品體積（X）與清除率（Y）間的回歸方程為Y = 0.508 1X+11.778 2，R2=0.985 7。20%揮發(fā)油、0.5 mg/mL EDTA 的IC50分別為75.22、51.75 μL。

2.3 揮發(fā)油對亞硝酸鈉的清除作用

由圖3可知，一年蓬葉20%揮發(fā)油對亞硝酸鈉具有一定清除作用，其清除效果優(yōu)于1 mg/mL BHT，隨著樣品體積的增加，兩者清除率的差別逐步增加。揮發(fā)油體積（X）與清除率（Y）存在良好的線性相關(guān)，回歸方程為Y=0.280 2X+8.400 9，R2=0.970 2。20%揮發(fā)油、1 mg/mL BHT的IC50分別為148.46、195.61 μL。

3 小結(jié)與討論

20%一年蓬葉揮發(fā)油具有良好的體外抗氧化活性，對DPPH·清除作用、亞硝酸鈉的清除作用和金屬離子螯合作用的IC50分別為71.99、148.46、75.22 μL，對DPPH·和亞硝酸鈉的清除作用分別優(yōu)于0.1 mg/mL 維生素C和1 mg/mL BHT的陽性對照，對金屬離子螯合作用弱于0.5 mg/mL EDTA。天然產(chǎn)物的抗氧化活性是其在醫(yī)藥、保健品、抗氧化劑應(yīng)用的基礎(chǔ)，一年蓬葉在醫(yī)藥、食品、保健品等行業(yè)具有應(yīng)用前景。一年蓬作為一種外來入侵種，繁殖力強、分布廣，其資源豐富，將其開發(fā)利用是有效的防治途徑和方法。以綜合開發(fā)利用為防治模式比單純、機械地鏟除和使用除草劑去除更加環(huán)保、經(jīng)濟。

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[7] 賈紅麗，張丕鴻，計巧靈，等.新疆阿勒泰百里香揮發(fā)油化學(xué)成分 GC-MS分析及抗氧化活性測定[J].食品科學(xué)，2009，30（4）：224-229.

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[10] 陸占國，李 偉，封 丹.蒔蘿籽精油成分及清除亞硝酸鈉研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2010（22）：479-482.

2 結(jié)果與分析

2.1 揮發(fā)油對DPPH·的清除作用

由圖1可知，一年蓬葉20%揮發(fā)油對DPPH·有較好的清除作用，優(yōu)于0.1 mg/mL 維生素C，體積為100 μL時，清除率為59.09%。揮發(fā)油體積與清除率呈正相關(guān)，清除率隨著樣品體積的增加而逐步增大，但增幅隨著樣品體積的增大而減??；揮發(fā)油樣品體積（X）與清除率（Y）間的回歸方程為Y=0.455 1 x+17.236 1，R2=0.931 9。20%揮發(fā)油和0.1 mg/mL 維生素C的IC50（清除率為50%時樣品的體積）分別為71.99、166.32 μL，維生素C的體積是揮發(fā)油體積的2.31倍，揮發(fā)油對DPPH·的清除能力明顯優(yōu)于0.1 mg/mL 維生素C。

2.2 揮發(fā)油對金屬離子的螯合作用

由圖2可知，一年蓬葉20%揮發(fā)油對金屬離子具有一定螯合作用，但螯合能力低于0.5 mg/mL EDTA。樣品體積20～40 μL時，20%揮發(fā)油和0.5 mg/mL EDTA對金屬離子的螯合效果相近，樣品體積40～100 μL時，EDTA的螯合效果優(yōu)于揮發(fā)油。揮發(fā)油樣品量與金屬離子的螯合率存在量效關(guān)系，揮發(fā)油樣品體積（X）與清除率（Y）間的回歸方程為Y = 0.508 1X+11.778 2，R2=0.985 7。20%揮發(fā)油、0.5 mg/mL EDTA 的IC50分別為75.22、51.75 μL。

2.3 揮發(fā)油對亞硝酸鈉的清除作用

由圖3可知，一年蓬葉20%揮發(fā)油對亞硝酸鈉具有一定清除作用，其清除效果優(yōu)于1 mg/mL BHT，隨著樣品體積的增加，兩者清除率的差別逐步增加。揮發(fā)油體積（X）與清除率（Y）存在良好的線性相關(guān)，回歸方程為Y=0.280 2X+8.400 9，R2=0.970 2。20%揮發(fā)油、1 mg/mL BHT的IC50分別為148.46、195.61 μL。

3 小結(jié)與討論

20%一年蓬葉揮發(fā)油具有良好的體外抗氧化活性，對DPPH·清除作用、亞硝酸鈉的清除作用和金屬離子螯合作用的IC50分別為71.99、148.46、75.22 μL，對DPPH·和亞硝酸鈉的清除作用分別優(yōu)于0.1 mg/mL 維生素C和1 mg/mL BHT的陽性對照，對金屬離子螯合作用弱于0.5 mg/mL EDTA。天然產(chǎn)物的抗氧化活性是其在醫(yī)藥、保健品、抗氧化劑應(yīng)用的基礎(chǔ)，一年蓬葉在醫(yī)藥、食品、保健品等行業(yè)具有應(yīng)用前景。一年蓬作為一種外來入侵種，繁殖力強、分布廣，其資源豐富，將其開發(fā)利用是有效的防治途徑和方法。以綜合開發(fā)利用為防治模式比單純、機械地鏟除和使用除草劑去除更加環(huán)保、經(jīng)濟。

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[5] 趙昱瑋，南敏倫，呂雪峰，等.一年蓬超臨界提取物的GC-MS測定[J].中國醫(yī)藥指南，2010，8（34）：221-223.

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[9] 楊少輝，宋英今，王潔華，等.雪蓮果體外抗氧化和自由基清除能力[J]. 食品科學(xué)，2010，31（17）：166-169.

[10] 陸占國，李 偉，封 丹.蒔蘿籽精油成分及清除亞硝酸鈉研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2010（22）：479-482.