閆景彬閆秀梅陳 斌孫宏偉

1浙江省溫州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院超聲科 溫州 325000 2溫州醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院兒科

3溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院

肝惡性腫瘤射頻消融術(shù)后患者細(xì)胞免疫功能觀察

閆景彬1閆秀梅2陳 斌3孫宏偉3

1浙江省溫州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院超聲科 溫州 325000 2溫州醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院兒科

3溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院

肝惡性腫瘤；射頻消融；細(xì)胞免疫；超聲

肝癌是嚴(yán)重威脅人類健康的最常見的惡性腫瘤之一，當(dāng)前對(duì)肝癌臨床治療的研究已從單純物理、化學(xué)抗腫瘤研究提升到注重機(jī)體免疫機(jī)能狀態(tài)改變的綜合抗腫瘤機(jī)制方面的研究。射頻消融術(shù)（radiofrequency ablation，RFA）治療肝癌在抗腫瘤治療領(lǐng)域內(nèi)占有越來(lái)越重要的地位。研究表明[1]，射頻消融術(shù)能有效減緩腫瘤生長(zhǎng)，改善患者局部或全身的免疫功能。T淋巴細(xì)胞是機(jī)體免疫系統(tǒng)內(nèi)功能最重要的一大細(xì)胞群[2]，對(duì)患者的預(yù)后有重要的意義。

1 資料與方法

1.1臨床資料 2012年1月—2013年5月，選取我院RFA治療肝癌患者25例，男19例，女6例；年齡37～75歲，中位年齡48歲?；颊呔?jīng)影像學(xué)檢查、血清腫瘤標(biāo)志物和經(jīng)肝穿刺活檢確診。其中原發(fā)性肝癌17例，轉(zhuǎn)移性肝癌8例；單發(fā)病灶19例，2個(gè)5例，3個(gè)1例，共計(jì)32個(gè)；病灶直徑＜3cm27處，3～5cm 5處；其中AFP升高的原發(fā)性肝癌患者15例；肝功能Child分級(jí)：A級(jí)21例，B級(jí)4例。入選條件：患者一般情況尚可，均無(wú)明顯心臟、肺、腎等主要臟器損傷，所有病例未經(jīng)放療或化療，治療期間未使用影響免疫功能的藥物?；颊咦栽附邮躌FA治療，并保證在接受射頻消融術(shù)治療后30天內(nèi)不接受其它方式的治療，術(shù)前簽署知情同意書。排除門靜脈內(nèi)有癌栓，或肝內(nèi)腫瘤總數(shù)超過4個(gè)，或凝血功能有嚴(yán)重障礙者。同時(shí)選擇25名健康獻(xiàn)血者作為對(duì)照組，男20名，女5名，年齡22～55歲，中位年齡41歲。兩組性別、年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2儀 器 德國(guó)西門子公司Acuson Sequoia 512超聲診斷儀，探頭頻率2～10MHz；配備探頭穿刺架。epics-xl流式細(xì)胞儀（美國(guó)COULTER公司）；抗CD3—FITC/CD8-PE，抗CD3—FITC/CD4-PE（法國(guó)IM公司）。美國(guó)RITA公司RITA1500型射頻治療儀。

1.3射頻消融步驟 完善術(shù)前準(zhǔn)備，治療前應(yīng)用彩色多普勒超聲觀察腫瘤及周邊臟器關(guān)系，術(shù)前建立靜脈通路，肌注度冷丁、安定，并且確定穿刺部位。消毒、鋪巾，用無(wú)菌袖套包扎穿刺探頭及連接線，尋找最合適的進(jìn)針線路，超聲引導(dǎo)下取三份不同位置的腫瘤組織，送病理檢查。操作方法：14G套管針經(jīng)皮穿刺到腫瘤內(nèi)并明確針尖位置，消融范圍≥R+1.5cm（R為腫塊直徑），放置入射頻針。選擇時(shí)間12～20min，功率60～80W，對(duì)直徑＜5cm的靶腫瘤，要求使其微波治療的靶腫瘤全部被強(qiáng)回聲掩蓋，＞3～5cm的腫瘤重點(diǎn)對(duì)靶腫瘤及其周邊血管處行微波硬化處理。術(shù)后碳化針道，拔針，并觀察引導(dǎo)套管內(nèi)是否有膽汁或血液溢出現(xiàn)象，如有則填塞明膠海綿。

1.4外周血CD3+CD4+、CD8+、NK檢測(cè) 25例患者分別于RFA前1天，RFA后10、20、30天抽取外周靜脈血5mL，肝素鈉抗凝，送檢CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+表達(dá)水平。并與25名體檢志愿者的外周血液T細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（） 表示，各指標(biāo)處理前、后的結(jié)果比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，兩組比較采用成組t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1臨床療效 25例經(jīng)過RFA后無(wú)死亡病例，無(wú)射頻消融相關(guān)手術(shù)并發(fā)癥，均于術(shù)后1個(gè)月內(nèi)完成隨訪并且完成檢查。11例治療后腫瘤直徑縮?。?/2，其余患者治療前后腫瘤大小無(wú)明顯改變；彩色多普勒超聲檢查發(fā)現(xiàn)，17例腫瘤區(qū)域血流消失，8例血流阻力指數(shù)較治療前有不同程度下降。術(shù)后增強(qiáng)MR、CT造影顯示治療病灶內(nèi)未見明顯動(dòng)脈期增強(qiáng)。

7例術(shù)前AFP指標(biāo)正常者，術(shù)后未見明顯變化。另18例術(shù)后AFP指標(biāo)均較術(shù)前明顯下降，其中7例完全降至正常范圍。

2.2外周血T淋巴細(xì)胞亞群比較 對(duì)照組與射頻組術(shù)前比較，CD3+、NK細(xì)胞差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；射頻組術(shù)前CD4+及CD4+/CD8+比值明顯低于對(duì)照組，CD8+水平明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)性意義（P＜0.01）。RFA術(shù)后第10天、第20天及第30天CD4+細(xì)胞及CD4+/CD8+比值均比術(shù)前增高（P＜0.05），CD8+細(xì)胞降低（P＜0.05）。術(shù)后第30天時(shí)NK細(xì)胞水平明顯高于術(shù)前（P＜0.05）。術(shù)后血CD3+細(xì)胞與術(shù)前比較無(wú)明顯變化。見表1。

表1 對(duì)照組與射頻組術(shù)前、術(shù)后T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果（） %

表1 對(duì)照組與射頻組術(shù)前、術(shù)后T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果（） %

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.01；與術(shù)前比較，△P＜0.05

組別對(duì)照組射頻組術(shù)前1天術(shù)后10天術(shù)后20天術(shù)后30天n/例25 25 25 25 25 CD3+ 69.98±7.94 65.98±11.13 67.21±11.75 69.01±11.43 68.37±12.98 CD4+ 42.86±8.57 28.98±10.11* 37.89±9.34△36.47±10.43△37.21±10.04△CD8+ 21.98±5.87 31.54±13.26* 25.24±9.20△24.52±9.89△23.94±9.76△CD4+/CD8+ 2.14±0.87 1.27±0.85* 1.75±0.87△1.83±1.24△1.94±1.21△NK 7.54±6.59 8.74±5.12 11.45±6.78 17.78±8.25△17.11±8.10△

3 討論

隨著RFA技術(shù)的發(fā)展及臨床療效的不斷提高，RFA已經(jīng)成為肝癌綜合治療中重要的治療手段之一，特別是小肝癌的RFA治療達(dá)到了與手術(shù)切除相似的效果[3-5]。RFA不僅可使直徑≤5cm的小肝癌一次性完全滅活，還可激活機(jī)體的免疫力，為新興的腫瘤治療手段之一[6]。具有簡(jiǎn)便、微創(chuàng)、并發(fā)癥少、可多次重復(fù)的特點(diǎn)。

研究證實(shí)[7-9]，惡性腫瘤患者常常合并有免疫功能下降。原發(fā)性肝惡性腫瘤患者體內(nèi)T淋巴細(xì)胞亞群存在不同程度的紊亂，本組腫瘤患者術(shù)前CD4+、CD4+/ CD8+均低于正常對(duì)照組，CD8+較正常對(duì)照組高；同時(shí)肝惡性腫瘤誘導(dǎo)產(chǎn)生的血清免疫抑制因子在腫瘤的發(fā)生過程中所發(fā)揮的免疫抑制作用，進(jìn)一步加重外周血T淋巴細(xì)胞功能紊亂。

本組結(jié)果顯示，射頻組的外周血T淋巴細(xì)胞亞群相比對(duì)照組變化更為明顯，手術(shù)前后CD8+、CD4+及CD4+/CD8+差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；患者T細(xì)胞免疫功能從術(shù)后10天開始逐漸升高，NK細(xì)胞水平未見下降，術(shù)后30天NK細(xì)胞水平則有明顯提升，表明患者的外周血免疫功能得到了改善甚至加強(qiáng)。本研究表明，超聲引導(dǎo)射頻消融治療肝惡性腫瘤短期內(nèi)療效顯著，患者細(xì)胞免疫功能得到顯著改善，對(duì)肝惡性腫瘤患者的預(yù)后產(chǎn)生積極影響[10]。

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2013-08-20