尹雪峰 杭州市紅十字會醫(yī)院普外二科 杭州 310003

兔機(jī)械性腸梗阻模型的建立

尹雪峰 杭州市紅十字會醫(yī)院普外二科 杭州 310003

目的建立可用于研究機(jī)械性腸梗阻的家兔動物模型。方法選取54只家兔，隨機(jī)分為正常對照組、低位小腸梗阻組（實(shí)驗(yàn)1組）、結(jié)腸梗阻組（實(shí)驗(yàn)組），每組18只，以頭皮針及絲線結(jié)扎回腸末端及乙狀結(jié)腸方法建立完全性單純機(jī)械性腸梗阻模型，術(shù)后24、48、72h，測量腹圍、梗阻腸管周徑、腸道內(nèi)壓及腹腔內(nèi)壓。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組與對照組比較，術(shù)后24、48h腹圍無明顯增大（P＞0.05），術(shù)后72h腹圍增大（P＜0.05）；實(shí)驗(yàn)組梗阻腸道周徑、腸道內(nèi)壓、腹腔內(nèi)壓術(shù)后24h無明顯增加（P＞0.05），術(shù)后48h增加明顯（P＜0.05），術(shù)后72h增加顯著（P＜0.05）。結(jié)論該動物模型符合機(jī)械性腸梗阻的臨床表現(xiàn)及腸道變化，可以用于研究機(jī)械性腸梗阻。

家兔；動物模型；機(jī)械性腸梗阻

腸梗阻是外科常見的急腹癥之一，發(fā)病率僅次于急性闌尾炎。近年來雖然其總發(fā)病率（根據(jù)部分醫(yī)院統(tǒng)計）略有降低，但其病死率仍為10%左右，尤其絞窄性腸梗阻的病死率依然高達(dá)4.5%～30%[1]。國內(nèi)外對于機(jī)械性腸梗阻的研究缺乏有效的實(shí)驗(yàn)動物模型。筆者通過結(jié)扎法建立兔梗阻模型實(shí)驗(yàn)如下。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動物和分組 健康、清潔級大白兔54只，4月齡，雌雄不限，體質(zhì)量2.0～2.5kg，哈爾濱醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供（實(shí)驗(yàn)動物合格證號：SCXK（黑）20020002）。實(shí)驗(yàn)前24h禁食，自由飲水。54只健康大白兔不分雌雄，無體質(zhì)量限制，隨機(jī)分為正常對照組、低位小腸梗阻組（實(shí)驗(yàn)1組）、結(jié)腸梗阻組（實(shí)驗(yàn)2組），每組18只。

1.2結(jié)扎帶制作 取頭皮針的塑膠管，長度約2cm，將7號絲線穿過塑膠管，制作完畢后，結(jié)扎帶備用。

1.3腸梗阻模型建立方法 家兔稱重，固定，3%異戊巴比妥鈉（30mg/kg）耳緣靜脈麻醉，麻醉滿意后，固定于手術(shù)臺，備皮，碘伏消毒后鋪無菌巾，取腹正中切口入腹。實(shí)驗(yàn)1組無菌條件下將回盲部牽出體外，距回盲瓣10cm處將結(jié)扎帶自腸系膜穿過，將腸道結(jié)扎固定；實(shí)驗(yàn)2組將直乙交界處牽出，將結(jié)扎帶自腸系膜穿過，進(jìn)行腸道結(jié)扎。實(shí)驗(yàn)組的結(jié)扎力量以完全阻斷腸管為準(zhǔn)，即完全性腸梗阻，正常對照組僅做腸道探查。

1.4觀察指標(biāo) ①測量腹圍。②腸道內(nèi)壓測定：封閉梗阻腸段以上10cm后采用測定中心靜脈壓的方法，即懸掛輸液器，連接鹽水后，將頭皮針刺入腸道內(nèi)，觀察液面，下降停止后，液柱的高度即為腸道內(nèi)壓力[2]。③腸道周徑測量：選擇梗阻處以上3cm的腸管，將一段絲線從腸系膜穿過后，圍繞腸腔一周，首尾相接，此絲線的長度即為腸道的周徑。④腹腔內(nèi)壓測定：采用導(dǎo)尿管測定膀胱內(nèi)壓間接獲得腹腔內(nèi)壓。將去除針頭的頭皮針經(jīng)尿道插入兔子膀胱中，先注入鹽水約50mL，然后連接輸液器并打開調(diào)節(jié)閥，觀察液面，下降停止后測量液柱高度，即為膀胱內(nèi)壓，腹腔內(nèi)壓與膀胱內(nèi)壓之間的關(guān)系為膀胱內(nèi)壓：腹腔內(nèi)壓=0.77cm H2O[3]。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以（） 表示，應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

三組手術(shù)均順利完成，術(shù)后72h兔存活52只，實(shí)驗(yàn)1組與實(shí)驗(yàn)2組各死亡1只，死亡率為3.7%。術(shù)后24h探查：正常對照組未見腸管擴(kuò)張，腸道顏色正常，血運(yùn)豐富，蠕動活躍；實(shí)驗(yàn)1組梗阻腸管略有擴(kuò)張，血運(yùn)良好，蠕動稍增強(qiáng)，近端可見食物殘?jiān)?；?shí)驗(yàn)2組梗阻腸管略有擴(kuò)張，蠕動增強(qiáng)，近端可見食物殘?jiān)\(yùn)較好。術(shù)后48h探查：對照組結(jié)果同24h；實(shí)驗(yàn)1組腸管擴(kuò)張明顯，顏色略粉紅，血運(yùn)良好，蠕動增強(qiáng)，近端可見較多食物殘?jiān)骨宦杂袧B出；實(shí)驗(yàn)2組腸管擴(kuò)張較為明顯，腸道顏色略淡紅，蠕動增強(qiáng)，近端可見較多食物殘?jiān)?，腹腔有輕微滲出。術(shù)后72h探查：對照組，腹腔略有滲出，無明顯粘連；實(shí)驗(yàn)1組小腸梗阻近端腸道擴(kuò)張顯著，顏色淡紅，蠕動減弱，血運(yùn)尚可，腹腔有較輕粘連；實(shí)驗(yàn)2組結(jié)腸梗阻近端擴(kuò)張顯著，動脈搏動減弱，蠕動明顯減弱，腹腔滲出較多，粘連比實(shí)驗(yàn)1組嚴(yán)重，未形成粘連性腸梗阻。

術(shù)后24h，實(shí)驗(yàn)組與正常對照組比較，腹圍、腹腔內(nèi)壓、腸道周徑、腸道壓力均無顯著增加（P＞0.05），見表1；術(shù)后48h，實(shí)驗(yàn)組與正常對照組比較，腹圍無顯著增加（P＞0.05），腹腔內(nèi)壓、腸道周徑、腸道壓力顯著增加（P＜0.05），見表2；術(shù)后72h時，實(shí)驗(yàn)組與正常對照組比較，腹圍、腹腔內(nèi)壓、腸道周徑、腸道壓力均顯著增加（P＜0.05），見表3。

3 討 論

腸梗阻，即腸道內(nèi)容物不能正常運(yùn)行、順利通過腸管，是外科常見的急腹癥之一。機(jī)械性腸梗阻是腸梗阻中最為普遍的梗阻方式，發(fā)病原因有如腸管堵塞（寄生蟲、大膽石、糞塊、異物等）、腸管受壓（粘連帶壓迫、腸管扭轉(zhuǎn)、腫瘤壓迫）、腸壁病變（先天性腸閉鎖、炎癥狹窄、腸道腫瘤）等[4]，文獻(xiàn)報道單純機(jī)械性小腸梗阻病死率為1%～6%[5]。目前用于腸梗阻研究的動物模型制作方法多樣，大致分為腹腔粘連模型、不完全梗阻模型、單純性完全梗阻和絞窄性梗阻模型。腹腔粘連模型的制作是對腸管的漿膜面和/或壁層腹膜造成機(jī)械性損傷，由于損傷修復(fù)過程中纖維組織的增生而導(dǎo)致腸管和腸管、腸管和腹腔內(nèi)其他臟器以及腸管和壁層腹膜之間的粘連。不完全性腸梗阻模型制作可采用腸管半周縫扎法[6]和腸套疊法[7]。單純性完全性腸梗阻模型多采用絲線單純結(jié)扎腸管的方法。國內(nèi)外建立的動物模型大多數(shù)為回腸梗阻模型，對于結(jié)腸梗阻模型的建立甚為少見。

表1 術(shù)后24h各組腸梗阻觀察指標(biāo)比較（）

表1 術(shù)后24h各組腸梗阻觀察指標(biāo)比較（）

組別正常對照組實(shí)驗(yàn)1組實(shí)驗(yàn)2組P值n6 6 6腹圍/cm 28.723±0.370 29.257±0.303 29.368±0.244 P＞0.05腹腔內(nèi)壓/cmH2O 11.360±0.037 13.374±0.019 15.593±0.126 P＞0.05小腸周徑/cm 2.459±0.049 2.677±0.067 2.587±0.055 P＞0.05結(jié)腸周徑/cm 3.243±0.086 3.808±0.038 4.108±0.092 P＞0.05小腸壓力/cmH2O 10.190±0.014 11.198±0.015 11.325±0.029 P＞0.05結(jié)腸壓力/cmH2O 11.175±0.044 12.910±0.035 13.305±0.019 P＞0.05

表2 術(shù)后48h各組腸梗阻觀察指標(biāo)比較（）

表2 術(shù)后48h各組腸梗阻觀察指標(biāo)比較（）

組別正常對照組實(shí)驗(yàn)1組實(shí)驗(yàn)2組P值n6 6 6腹圍/cm 28.320±0.121 30.348±0.241 30.528±0.178 P＞0.05腹腔內(nèi)壓/cmH2O 11.407±0.012 16.383±0.250 17.070±0.505 P＜0.05結(jié)腸壓力/cmH2O 11.163±0.038 12.953±0.027 15.537±0.017 P＜0.05小腸周徑/cm 2.471±0.033 3.032±0.047 2.913±0.018 P＜0.05結(jié)腸周徑/cm 3.391±0.064 4.371±0.033 4.937±0.055 P＜0.05小腸壓力/cmH2O 10.210±0.013 13.277±0.046 11.539±0.017 P＜0.05

表3 術(shù)后72h各組腸梗阻觀察指標(biāo)比較（）

表3 術(shù)后72h各組腸梗阻觀察指標(biāo)比較（）

組別正常對照組實(shí)驗(yàn)1組實(shí)驗(yàn)2組P值n6 6 6腹圍/cm 29.177±0.139 34.598±0.179 36.707±0.402 P＜0.05腹腔內(nèi)壓/cmH2O 10.998±0.015 19.240±0.250 20.087±0.393 P＜0.05小腸周徑/cm 2.516±0.031 4.330±0.051 2.854±0.030 P＜0.05結(jié)腸周徑/cm 3.510±0.099 4.253±0.076 5.852±0.113 P＜0.05小腸壓力/cmH2O 10.201±0.014 15.320±0.037 11.315±0.028 P＜0.05結(jié)腸壓力/cmH2O 11.201±0.042 12.836±0.058 17.480±0.019 P＜0.05

我們應(yīng)用自制的結(jié)扎帶，建立單純性機(jī)械性腸梗阻的家兔模型。建模所需的結(jié)扎帶材料易得，且效果確切，長度為2cm左右，小于正常腸管的周徑，以此來造成腸腔的完全閉塞。此外，由于結(jié)扎帶塑膠條的彈性作用，即使在完全性腸梗阻模型中，也不會因?yàn)榻Y(jié)扎過緊而導(dǎo)致結(jié)扎處腸壁缺血壞死，也不會因?yàn)榻z線的切割作用而引起腸壁的受損，甚至導(dǎo)致穿孔。對建模過程中死亡的兔子進(jìn)行解剖發(fā)現(xiàn)：實(shí)驗(yàn)1組的兔子死于腹腔感染，在其腹腔內(nèi)發(fā)現(xiàn)多處散在小膿腔，在膿腔中發(fā)現(xiàn)兔毛，可能是備皮過程中殘留的兔毛，經(jīng)切口落入腹腔內(nèi)未取出，造成感染；實(shí)驗(yàn)2組的兔子死于腸瘺造成的腹腔感染，在其結(jié)扎腸管以上5cm處，發(fā)現(xiàn)腸道破損處，可能是在手術(shù)過程中找尋目標(biāo)腸道時，手術(shù)操作不規(guī)范，也可能在提出腸道進(jìn)行結(jié)扎過程中，未察覺對腸道造成的小損傷。因此，在建模過程中，完成備皮后，應(yīng)將散落的兔毛清理干凈，手術(shù)過程中應(yīng)嚴(yán)格遵循無菌原則及規(guī)范的手術(shù)操作，游離腸道時動作應(yīng)輕柔，結(jié)扎腸道完成后可以對腸道進(jìn)行探查，避免未察覺的小損傷致使建模失敗，也可以進(jìn)行適當(dāng)?shù)母骨粵_洗，既能有效防止腸道粘連，亦能降低感染。手術(shù)完成后，如有條件可以對兔子預(yù)防性應(yīng)用抗生素。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組梗阻24h時因腸道有一定的順應(yīng)性，故腸管的擴(kuò)張不明顯，腹圍無明顯增大，腸道的周徑及腸道內(nèi)壓無明顯增加，腹腔內(nèi)壓亦無明顯增加；梗阻48h時，盡管腹圍增加不顯著，但腸道的周徑、腸道內(nèi)壓較正常對照組增加顯著，腹腔內(nèi)壓亦明顯增加（P＜0.05）；梗阻72h時，實(shí)驗(yàn)組腹圍增加顯著，腸道擴(kuò)張明顯，腸道內(nèi)壓增加顯著，腹腔內(nèi)壓亦有明顯增加（P＜0.05）。隨著梗阻的進(jìn)展，梗阻后食物在腸管中的潴留增多，大量的消化液未被腸道吸收，使得腸管擴(kuò)張，致使腸腔壓力增高，腸道內(nèi)壓力的增高，引起腹腔壓力的增加，臨床表現(xiàn)為腹脹、嘔吐。

綜上所述，我們建立的動物模型能模擬機(jī)械性腸梗阻后腸道自然的病理生理變化，可以用于機(jī)械性腸梗阻的研究。

［1］陳衛(wèi)國，劉玉村.腸梗阻的手術(shù)適應(yīng)證［J］.中國實(shí)用外科雜志，2003，23（7）：398.

［2］趙衛(wèi)川，崔乃強(qiáng)，白景文，等.腸內(nèi)壓對腸道內(nèi)毒素轉(zhuǎn)運(yùn)影響的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合外科雜志，1997，3（5）：329-332.

［3］陳瑋.腹內(nèi)壓力及其監(jiān)測［J］.國外醫(yī)學(xué)護(hù)理學(xué)分冊，1999，18（6）：266.

［4］吳在德，吳肇漢，鄭樹，等.外科學(xué)［M］.第6版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1984，475.

［5］張志明，張才全.不同類型腸梗阻內(nèi)毒素移位時段變化的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國普通外科，2007，16（4）：389-390.

［6］閏瑾.大承氣顆粒對大鼠不完全性腸梗阻小腸上皮細(xì)胞保護(hù)作用的研究［D］.天津：天津醫(yī)科大學(xué)，2005.

［7］Kawaguehi AL，Dunn JC，et al.Glucose up take in dilated small intestine［J］.J Pediatr Surg，1998，33（11）：1670-1673.

Establishment of Rabbit Model of Mechanical Intestinal Obstruction

YIN Xuefeng. Department of Surgery，Hang zhou Red Cross Hospital，Hangzhou（310003），China

ObjectiveTo establish a rabbit model of mechanical intestinal obstruction（MIO）.MethodsFiftyfour rabbits were randomly divided into control group（n=18），small bowel obstruction group（n=18），and large bowel obstruction group（n=18）.Ligation of the ileum（terminal part）and sigmoid was achieved by using scalp needle and 7-0 thread to establish simple MIO model，respectively.At 24h，48h，72h after modeling,abdominal circumference, perimeter of obstructed intestine，intestinal pressure and intra-abdominal pressure were measured.ResultsCompared with control group,the abdominal circumference in small bowel obstruction group and large bowel obstruction group was not significantly different（P＞0.05）at 24 and 48 h after modeling，but increased at 72h（P＜0.05）；the perimeter of obstructed intestine，intestinal pressure and intra-abdominal pressure in small bowel obstruction group and large bowel obstruction group did not increase at 24h after modeling，but increased at 48 and 72h（P＜0.05）.ConclusionThe animal model is in accordance with clinical manifestations and intestinal changes of MIO.It can be used for MIO studies.

rabbit；animal model；mechanical intestinal obstruction

2013-05-31

修回日期：2014-02-10

黎介壽院士腸道屏障專項(xiàng)研究基金（No.LJS-2009023）

尹雪峰，E-mail：smallyxf@126.com