鄧玉紅袁 靜徐六妹

（1 深圳市第三人民醫(yī)院預(yù)防保健科，廣東 深圳 518112；2 深圳市第三人民醫(yī)院感染科，廣東 深圳 518112）

注射HBsAg-SCT質(zhì)粒的HBV轉(zhuǎn)基因小鼠血清轉(zhuǎn)氨酶的檢測分析

鄧玉紅1袁 靜2徐六妹2

（1 深圳市第三人民醫(yī)院預(yù)防保健科，廣東 深圳 518112；2 深圳市第三人民醫(yī)院感染科，廣東 深圳 518112）

目的研究注射HBsAg-SCT質(zhì)粒的HBV轉(zhuǎn)基因小鼠血清中轉(zhuǎn)氨酶水平的變化。方法選取遺傳背景相同的HBsAg陰性正常鼠30只作為正常對照組，HBV轉(zhuǎn)基因鼠30只為實驗1組，注射HBsAg-SCT質(zhì)粒的HBV轉(zhuǎn)基因小鼠30只為實驗2組。采集各組小鼠在8周齡時的血液，用全自動的生化分析儀檢測小鼠血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶水平。結(jié)果實驗1組（HBV轉(zhuǎn)基因小鼠未注射HBsAg-SCT質(zhì)粒組）和實驗2組（HBV轉(zhuǎn)基因小鼠注射HBsAg-SCT質(zhì)粒組）小鼠的血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶與正常對照組比較，均顯著升高（P＜0.01）；實驗1組小鼠的血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶與實驗2組比較，無明顯差異（P＞0.05）。結(jié)論注射HBsAg-SCT質(zhì)粒的HBV轉(zhuǎn)基因小鼠血清轉(zhuǎn)氨酶水平明顯高于正常小鼠；但與未注射HBsAg-SCT質(zhì)粒HBV轉(zhuǎn)基因小鼠無明顯差異。

HBV轉(zhuǎn)基因小鼠；HBsAg-SCT質(zhì)粒；丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶；天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶

主要組織相容性復(fù)合體基因（major histocompatibility complex，MHC）編碼許多與T細胞的抗原識別密切相關(guān)的組織相容抗原。MHC是人類的第6對染色體的一組連鎖的基因群，包括MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ，人的MHC稱為人白細胞抗原（HLA）?？乖仨毐┞对诩毎ど喜⑴cHLA的特異性的糖蛋白結(jié)合，T細胞才能將其識別并清除。對疾病易感性的個體差異在很大程度上是由遺傳因素所決定，以MHC表達的免疫遺傳學(xué)基礎(chǔ)是限定HBV感染發(fā)展的重要因素[1，2]。本研究通過檢測注射HBsAg-SCT質(zhì)粒的HBV轉(zhuǎn)基因小鼠的血清轉(zhuǎn)氨酶水平，為該HBV轉(zhuǎn)基因動物的生理、病理、藥理和毒理的實驗研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

①含有H-2IJd的真核表達載體（pIRES-Ld）由Lybarger Lonnie實驗室保存，編碼HBV抗原表位肽S28-39（IPQSLDSWWTSL）寡核苷酸由亞利桑那大學(xué)合成。按文獻報道[3]的方法，人工合成兩端分別帶一小段DNA接頭的HBV表面抗原CTL表位肽（S29-38）的寡核苷酸片段，與兩端帶接頭的β2m寡核苷酸片段混合變性后自然冷卻到室溫使其發(fā)生退火，其后將混合物與pIRES-Ld進行連接，形成HbsAg-S28-39·β2m·Ld單鏈復(fù)合物（HBsAg-SCT），并命名為HbsAg-SCT[4]。②選取遺傳背景相同的HBsAg陰性正常鼠30只（正常對照組），HBV轉(zhuǎn)基因鼠30只（實驗1組）和注射HBsAg-SCT質(zhì)粒的HBV轉(zhuǎn)基因小鼠30只（實驗2組）。各為6～10周齡，雌雄各半，本部飼育，生產(chǎn)許可證號為SCXK 2005-010。

1.2 試劑和儀器

丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶指標的檢測儀器是奧林巴斯AU400，試劑由申能公司提供。

1.3 方法

各組小鼠均眼眶內(nèi)眥采血，采血時周齡均為8周，采血后室溫放置2 h后3000 r/min離心5 min提取血清。用全自動奧林巴斯AU400生化儀檢測血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶水平。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié) 果

實驗1組（HBV轉(zhuǎn)基因小鼠未注射HBsAg-SCT質(zhì)粒組）和實驗2組（HBV轉(zhuǎn)基因小鼠注射HBsAg-SCT質(zhì)粒組）小鼠的血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶與正常對照組比較，顯著升高（P＜0.01）；實驗1組小鼠的血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶與實驗2組比較，無明顯差異（P＞0.05）。見表1和表2。

表1 各組小鼠的血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶的檢測結(jié)果

表2 各組小鼠的血清天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶的檢測結(jié)果

實驗1組與對照組比較有明顯差異（t=18.5455；P＜0.01）；實驗1組與對照組比較有明顯差異（t=20.6692；P＜0.01）；而實驗1組與實驗2比較無明顯差異（t=1.2624；P值＞0.05）。

3 討 論

HBV轉(zhuǎn)基因小鼠是國內(nèi)進行乙肝發(fā)病機制、藥物研發(fā)和疫苗研發(fā)的首選動物模型，由小鼠的生殖特性可知[5]，雌性小鼠的性成熟期是5～7周；雄性小鼠的性成熟期是6～8周，本研究的采血時小鼠的周齡均為10周，此時期小鼠均已以育完全，其性激素水平和血液生理生化指標也基本趨于穩(wěn)定，但動物的血液生理生化指標受動物的品系、年齡、性別、營養(yǎng)代謝等情況，及測定方法與儀器設(shè)備和樣品量大小的影響，其正常范圍的差異很大[6]。

本研究是將自構(gòu)建的pIRES-HBsAg質(zhì)粒分次注射到被HBV感染的轉(zhuǎn)基因小鼠中，研究HBsAg-SCT質(zhì)粒質(zhì)粒對轉(zhuǎn)基因小鼠感染HBV后免疫應(yīng)答，本研究結(jié)果顯示：HBV轉(zhuǎn)基因小鼠和注射HBsAg-SCT質(zhì)粒的HBV轉(zhuǎn)基因小鼠的血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶均顯著高于正常對照組（P＜0.01）；與國外文獻報道一致[7]；而實驗1組小鼠的血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶與實驗2組比較，無明顯差異（P＞0.05），但本實驗指標較少，對注射HBsAg-SCT質(zhì)粒的HBV轉(zhuǎn)基因小鼠的血液生理生化全面分析有一定的影響，今后應(yīng)增加其正常的生理生化指標監(jiān)測，以便全面了解注射HBsAg-SCT質(zhì)粒的HBV轉(zhuǎn)基因小鼠模型，為該HBV轉(zhuǎn)基因動物的生理、病理、藥理和毒理的實驗研究提供參考。

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R512.6+<2 文獻標識碼：B class="emphasis_bold">2 文獻標識碼：B 文章編號：1671-8194（2014）27-0066-022 文獻標識碼：B

1671-8194（2014）27-0066-02

B 文章編號：1671-8194（2014）27-0066-02

2005年廣東省深圳市科技社會公益科研項目（JH200507120847A）