甄惠娉韓秀奇郝 虹李書淵*

（1 廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006；2 河南新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，河南 衛(wèi)輝 453100）

水翁皮化學(xué)成分研究（Ⅰ）

甄惠娉1韓秀奇2郝 虹1李書淵1*

（1 廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006；2 河南新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，河南 衛(wèi)輝 453100）

目的研究水翁皮Cleistocalyx operculatus （Roxb.）Merr.et Perry的化學(xué)成分，為尋找水翁皮抗菌的物質(zhì)基礎(chǔ)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高提供依據(jù)。方法運(yùn)用多種層析方法進(jìn)行分離純化，通過波譜數(shù)據(jù)確定化合物的結(jié)構(gòu)。結(jié)果分離得到2個化合物，分別為β-谷甾醇和3，3'-O-二甲基鞣花酸（3，3'-di-O-methylellagic acid）。結(jié)論兩種成分均為首次從該植物中分離得到。

水翁皮；化學(xué)成分；分離；鑒定

水翁皮為桃金娘科植物水翁Cleistocalyx operculatus（Roxb.）Merr.et Perry的干燥樹皮。氣無，味苦澀。辛，溫。行氣，殺蟲，止癢。外用治陰囊瘙癢，腳癬，香港腳，皮膚瘙癢[1，2]。對水翁皮的化學(xué)成分鮮有研究，僅有人報(bào)道了從水翁莖皮中分離出一種抗皮膚真菌性成分—齊墩果烷型三萜，并使用光譜法鑒定為2α，3β，23-三羥基齊墩果烷-12-烯-28油酸[3]。本文對水翁皮進(jìn)行系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，從中分離得到2個化合物，分別為β-谷甾醇和3，3'-O-二甲基鞣花酸，均為首次從該植物中獲得。

圖1 3，3'-O-二甲基鞣花酸的結(jié)構(gòu)圖

1 材料與儀器

薄層色譜硅膠G（青島海洋化工有限公司），CMC-Na（天津市福晨化學(xué)試劑廠），自制薄層板10 cm×10 cm，厚度0.5 mm。柱層析硅膠（上海五四化學(xué)試劑有限公司），粒度為80～100目。水為蒸餾水，三氯甲烷，甲醇為分析純，乙醇為化學(xué)純，核磁共振譜測試試劑為：氚代DMSO。

水翁皮藥材1 kg，經(jīng)廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院李書淵教授鑒定桃金娘科植物水翁的干燥樹皮。3，3'-O-二甲基鞣花酸對照品（批號：20101013）購自購自深圳市美荷生物科技有限公司。

SK250HP超聲波清潔器（超聲功率為100W，上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司）、DYG-9143B-2電烘箱（上海福瑪實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）、AVANCE III 500 MHz 全數(shù)字化超導(dǎo)核磁共振譜儀（瑞士Bruker 公司）、Micro MS四級桿飛行時間高分辨質(zhì)譜儀配備電噴霧離子化（ESI）接口（美國Waters公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取與分離

取水翁皮藥材1 kg，用95%乙醇5倍量浸漬3次，每次24 h，合并浸漬液，減壓回收乙醇并濃縮至浸膏，得浸膏41.5 g。浸膏加少量水分散后依次以石油醚（60～90 ℃）、乙酸乙酯、正丁醇萃取，各萃取液分別揮去溶劑，除石油醚部位得到油狀物外，其余部位濃縮至浸膏。

將乙酸乙酯部位浸膏（31 g）用乙酸乙酯溶解后拌入一定量硅膠（80～100目）并揮干溶劑，上硅膠柱層析，用三氯甲烷-甲醇（100∶0～10∶1）進(jìn)行梯度洗脫，每份收集100 mL，共收集203份，TLC檢識，合并相同組分。

將收集到的各部分流份，分別以三氯甲烷-甲醇（不同比例）展開劑展開，10%硫酸乙醇顯色，斑點(diǎn)Rf值相近的組分合并，濃縮，放置析晶。

其中第55～63流份合并為F1，經(jīng)薄層鑒別為β-谷甾醇；第98～195流份合并為F2，經(jīng)甲醇重結(jié)晶后析出淺黃色小針晶。

2.2 3，3'-O-二甲基鞣花酸的結(jié)構(gòu)鑒定

F2為淺黃色針晶，難溶于甲醇。溶于氚代DMSO、吡啶、三氯甲烷-甲醇混合溶液。薄層板日光下呈黃色斑點(diǎn)，紫外光下顯藍(lán)色熒光。三氯化鐵反應(yīng)陽性。

ESI-MS給出分子離子峰m/z329[M-H]-，得出分子量為330。二級質(zhì)譜m/z298可能是失去官能團(tuán)CH2O-的離子峰，m/z270可能是失去官能團(tuán)CH2O-和CO的離子峰。

圖2 3，3'-O-二甲基鞣花酸的薄層鑒定結(jié)果

1H-NMR（500MHz，DMSO-d6）δ（ppm）：δ7.52（2H，s，H-5，5'），4.04（6H，s，2×OCH3，3，3'-OCH3）。圖譜中可見有一個甲氧基和芳?xì)?，推斷為對稱結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)中可能有兩個甲氧基和芳?xì)洹?/p>

13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ（ppm）：δ159.1（C-7，7'），152.7（C-4，4'），141.9（C-2，2'），140.8（C-3，3'），112.8（C-6，6'），112.3（C-1，1'），112.0（C-5，5'），61.6（3，3'-OCH3）。圖譜中可見在δ100至δ160之間有7個碳信號，說明可能為對稱的鞣花酸類結(jié)構(gòu)，δ61.6為甲氧基取代信號，說明可能是3和3'位取代。

綜上所述，推測這化合物結(jié)構(gòu)式為C16H10O8，為3，3'-O-二甲基鞣花酸，以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]基本一致。結(jié)構(gòu)式見圖1。

2.3 3，3'-O-二甲基鞣花酸薄層色譜鑒定

取上述F2結(jié)晶加吡啶制成飽和溶液，作為供試樣品溶液。另取3，3'-O-二甲基鞣花酸對照品及自制對照品，加吡啶制成飽和溶液，作為對照品。照薄層色譜法，《中國藥典》（2010版）試驗(yàn)，分別吸取上述三種溶劑各為1μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇（10∶1）為展開劑，展開，取出，風(fēng)筒吹干，供試樣品溶液色譜在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下呈黃色斑點(diǎn)，紫外光下顯藍(lán)色熒光（圖2）。

T=21 ℃，RH=90%；1～2：供試樣品溶液，3：3，3'-O-二甲基鞣花酸對照品，4：自制3，3'-O-二甲基鞣花酸對照品

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)首次從水翁皮中分離鑒定了β-谷甾醇和3，3'-O-二甲基鞣花酸。其中3，3'-O-二甲基鞣花酸含量較大，在大多數(shù)植物中不常見，可以作為水翁皮質(zhì)量評價的指標(biāo)成分。鞣花酸類化合物具有抗腫瘤、抗病毒、抗氧化、抗菌及增強(qiáng)免疫作用等多種生物活性，有很大的發(fā)展前景和研究價值[5]。由于水翁皮的化學(xué)成分研究還有很多空白，進(jìn)一步的成分研究正在進(jìn)行。

[1] 《中藥商品知識》編寫組.中藥商品知識[M].廣州:廣東科技出版社,1989:100.

[2] 曾頌,韓秀奇,李書淵*.木槿皮、土荊皮、水翁皮本草考證及現(xiàn)代研究[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào),2011,27(2):1-4.

[3] 水翁莖皮抗皮膚真菌成分∥生藥學(xué)雜志,1993,47(4):408-410.

[4] 趙超,陳華國.杠板歸的化學(xué)成分研究(Ⅱ)[J].中草藥,2010,41(3): 365-367.

[5] 郭增軍*,譚林.鞣花酸類化合物在植物界的分布及其生物活性[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2010,22(3):519-524,540.

Study on Chemical Constituents of Cleistocalyx Operculatus

ZHEN Hui-ping1, HAN Xiu-qi2, HAO Hong1, LI Shu-yuan1*
(1 School of Traditional Chinese Medicine, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China; 2 The First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical University, Weihui 453100, China)

ObjectiveThe chemical constituents of Cleistocalyx operculatus are studied to provide the antibacterial material base and improve its quality standards.MethodsColumn chromatography was used in the isolation and purification.The structures of compounds were elucidated by spectrum data.ResultsTwo compounds were isolated and identified as β-sitosterol and 3,3'-di-O-methylellagic acid.ConclusionTwo compounds are isolated from this plant for the first time

Cleistocalyx operculatus; Constituents; Separate; Identify

R282.710.3

B

1671-8194（2014）27-0033-02

*通訊作者