李秀富，朱鋒釗，高俊波，梁世巖，鄧書(shū)湛

（貴州省銅仁職業(yè)技術(shù)學(xué)院，貴州 銅仁 554300）

肥大細(xì)胞（MC）是體內(nèi)一種重要的免疫細(xì)胞，在人類及動(dòng)物某些速發(fā)變態(tài)反應(yīng)性疾病、腫瘤性疾病中發(fā)揮著重要作用。MC被激活后通過(guò)脫顆粒或轉(zhuǎn)顆粒作用釋放肝素、組胺、白三烯、五羥色胺等生物活性物質(zhì)。白三烯、組胺和五羥色胺具有擴(kuò)張毛細(xì)血管、增強(qiáng)通透性和收縮平滑肌等作用，肝素具有抗凝血作用。精氨酸（Arg）具有重要的營(yíng)養(yǎng)、代謝和免疫功能，能在一氧化氮合成酶和鳥(niǎo)氨酸解旋酶作用下分別生成NO和多胺。大量研究表明，Arg在改善胎盤血液循環(huán)，緩解宮內(nèi)發(fā)育遲緩方面有良好的效果。本試驗(yàn)通過(guò)在日糧中添加不同劑量的Arg，分析其對(duì)胎鼠數(shù)和子宮肥大細(xì)胞（MC）數(shù)量的影響，為科研和生產(chǎn)提供基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及飼料。昆明系小白鼠scxk（黔）2002-0001和飼料，均購(gòu)自貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

精氨酸（Arg），純度≥99.8%，購(gòu)自北京某生物技術(shù)有限公司。

1.1.2 主要試劑及藥品。甲苯胺藍(lán)（TB），Sigma T3260；鹽酸、乙醇、氯仿、氫氧化鈉、二甲苯、檸檬酸鈉、檸檬酸三鈉等常規(guī)試劑。

1.1.3 主要儀器。TP1020自動(dòng)組織脫水處理機(jī)，德國(guó)產(chǎn)；Mias圖像采集系統(tǒng)，四川大學(xué)計(jì)算機(jī)系圖像圖形研究所研發(fā)；RM2125旋轉(zhuǎn)式切片機(jī)，德國(guó)產(chǎn)。

1.2 試驗(yàn)方法 將40只雌小白鼠（體重為35.0±3.0 g）隨機(jī)分為4組：對(duì)照組（飼喂基礎(chǔ)日糧），0.25%Arg組、0.5%Arg組和1.0%Arg組（基礎(chǔ)日糧中分別加入 2.50、5、10 g·kg-1Arg，拌飼），每組 10 只，分籠飼養(yǎng)，飼養(yǎng)環(huán)境一致，食物和水自由攝取。預(yù)飼1周后，按雌雄比例2∶1配種。當(dāng)晚將雄鼠放進(jìn)雌鼠籠內(nèi)，次日早晨檢查雌鼠，若有陰道栓的判定為懷孕第1d。妊娠到第15 d時(shí)禁食24h，然后處死妊娠小鼠，計(jì)數(shù)胎鼠，再取孕鼠子宮組織經(jīng)Carnoy′s液固定，甲苯胺藍(lán)染色鏡檢，觀察并計(jì)數(shù)MC。

1.3 數(shù)據(jù)處理 各組試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤（MEAN±SEM）表示，用SPSS13.0軟件中One-way ANOVA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 精氨酸對(duì)胎鼠宮內(nèi)生長(zhǎng)的影響 由表1可見(jiàn)，0.5%Arg組的胎鼠數(shù)極顯著高于對(duì)照組、0.25%Arg組和 1.0%Arg組（P<0.01），對(duì)照組、0.25%Arg、1.0%Arg組間的胎鼠數(shù)差異不顯著（P>0.05)。

2.2 精氨酸對(duì)孕鼠子宮MC數(shù)量的影響 孕鼠子宮組織經(jīng)Carnoy′s液固定，TB染色后鏡檢，發(fā)現(xiàn)MC主要分布于肌層近血管處，外膜中較少，內(nèi)膜內(nèi)極少，胞體大小、形態(tài)不一，著染紫紅色，胞質(zhì)顆粒清晰（詳見(jiàn)圖 1～圖4）。由表2可見(jiàn)，0.25%Arg和0.5%Arg組的子宮MC數(shù)量較對(duì)照組顯著減少（P<0.05）；1.0%Arg組的子宮MC數(shù)量較對(duì)照組極顯著減少（P<0.01）。1.0%Arg組的子宮MC數(shù)量比0.25%Arg和0.5%Arg組顯著減少（P<0.05)。

表1 精氨酸對(duì)小白鼠胎鼠數(shù)的影響

圖1 對(duì)照組子宮MC鏡檢結(jié)果，10×10

圖2 0.25%Arg組子宮MC鏡檢結(jié)果，10×10

圖3 0.50%Arg組子宮MC鏡檢結(jié)果，10×10

圖4 1.0%Arg組子宮MC鏡檢結(jié)果，10×10

表2 精氨酸對(duì)妊娠小白鼠子宮MC數(shù)量的影響

3 討論

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，0.5%Arg組的胎鼠數(shù)極顯著高于對(duì)照組、0.25%Arg組和1.0%Arg組，而且0.25%Arg組較對(duì)照組和1.0%Arg組都偏高。說(shuō)明Arg在不同動(dòng)物日糧中的添加量必須適中，在生產(chǎn)上使用時(shí)必須找準(zhǔn)最佳添加劑量，這與王喜波（2007）等、謝小利（2008）等的報(bào)道一致。大量研究表明，子宮MC在性周期中呈規(guī)律性波動(dòng)，嚙齒類動(dòng)物在胚胎著床前MC數(shù)量達(dá)到一個(gè)高峰，在著床期內(nèi)數(shù)目減少。Nakaura等報(bào)道MC還可能與卵泡的破裂即排卵有關(guān)。本試驗(yàn)中，子宮中MC主要分布在肌層近血管處，小血管和微血管周圍分布較多，漿膜和黏膜層很少，細(xì)胞形態(tài)、大小不一，胞漿內(nèi)充滿紫紅色的粗大顆粒，緊密地圍繞在細(xì)胞核周圍；在MC數(shù)量上，0.25%Arg和0.5%Arg組較對(duì)照組顯著減少（P<0.05）；1.0%Arg組較對(duì)照組極顯著減少（P<0.01）；1.0%Arg組比0.25%Arg和0.5%Arg組顯著減少（P<0.05）。這說(shuō)明在妊娠期間添加適量Arg可能對(duì)妊娠小鼠調(diào)節(jié)子宮組織MC脫顆粒反應(yīng)，減少M(fèi)C在子宮中的分布，維持子宮內(nèi)環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定等有重要作用。

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