田華等

摘 要：目的：旨在探討葛根素注射液對血管性癡呆小鼠皮層、海馬神經(jīng)元的保護作用。方法：通過采用改良的雙側頸總動脈持久性結扎法制作血管性癡呆模型，從形態(tài)學上觀察葛根素對血管性癡呆小鼠皮層、海馬神經(jīng)元的保護作用。結果：（1）跳臺試驗結果提示，葛根素注射液組小鼠的反應時間明顯縮短，潛伏期顯著延長，錯誤次數(shù)減少。（2）HE染色結果顯示，與假手術組相比，模型組小鼠皮層、海馬神經(jīng)元細胞排列紊亂，數(shù)目減少，周圍有小膠質細胞和星形膠質細胞增生，形態(tài)異常，許多細胞出現(xiàn)體積縮小，出現(xiàn)核溶解、固縮、破裂等。與模型組相比，葛根素注射液組小鼠海馬、皮層神經(jīng)元細胞形態(tài)異常、損傷的情況明顯減輕。結論：葛根素注射液對血管性癡呆小鼠皮層、海馬神經(jīng)元發(fā)揮一定的神經(jīng)保護作用。

關鍵詞：葛根素 血管性癡呆 皮層神經(jīng)元

中圖分類號：R285 文獻標識碼：A 文章編號：1674-098X（2014）02（a）-0221-02

血管性癡呆（vascular dementia，VD）是繼阿爾茨海默病之后第二位最常見的癡呆癥，是指大腦功能衰退，特別是與智能有關的功能全面衰退，致其發(fā)生的主要原因是腦血流量減少，引起腦組織生化代謝障礙[1]。葛根素（Puerarin，Pur）化學名為4，7一二羥基-8-D葡萄糖基異黃酮，近年來被廣泛用于心腦血管疾病等急性期的治療，包括心絞痛、心肌梗塞，心律失常、腦缺血等[2]。本實驗從行為學、形態(tài)學角度，觀察葛根素注射液對血管性癡呆小鼠皮層、海馬神經(jīng)元的保護作用。

1 材料和方法

1.1 血管性癡呆模型建立

成年昆明小鼠，18～22 g，雌雄不限，購自齊齊哈爾醫(yī)學院動物研究中心。采用雙側頸總動脈持久性結扎法，并對該方法進行改良。用0.5%戊巴比妥鈉麻醉并固定小鼠，鈍性分離暴露右側頸總動脈，結扎右側頸總動脈，術后給予青霉素2萬U/天，4d；于術后7 d進行第二次手術，同法結扎另一側頸總動脈，腹腔注射青霉素2萬U/天，4d，于二次手術后7 d采用跳臺試驗鑒別血管性癡呆動物模型是否成功建立。

1.2 動物分組

模型建立后小鼠隨機分為（1）假手術組；（2）模型組；（3）葛根素組。各組立即給予相應藥物。正常組和模型組：腹腔注射生理鹽水，1次/日，注射14d。葛根素組：腹腔注射葛根素注射液（1 mg/mL），0.1 mL/10 g，1次/日，注射14d。

1.3 HE染色

在末次給藥后1h后取材，各組小鼠腦組織在4%多聚甲醛固定液中固定12 h后，室溫梯度酒精脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，常規(guī)切片，將組織附于用防脫劑處理過的載玻片上，60 ℃恒溫烘箱烘片12 h，備用于HE染色。石蠟切片經(jīng)二甲苯逐級脫蠟水化后，入蘇木素染色液中10 min，鹽酸酒精分化數(shù)秒后入伊紅染色1 min，梯度酒精脫水，二甲苯透明，樹脂封片。光鏡下觀察皮層、海馬組織結構變化。

2 結果

2.1 行為學觀察

本實驗采用跳臺試驗鑒別血管性癡呆動物模型是否成功建立，跳臺實驗結果提示，模型組小鼠存在著明顯的學習記憶障礙，模型建立成功。與模型組比較，葛根素注射液組小鼠的反應時間明顯縮短，潛伏期顯著延長，錯誤次數(shù)減少，改善了血管性癡呆小鼠學習記憶能力。

2.2 HE染色

光鏡下，假手術組小鼠皮層、海馬神經(jīng)元染色清晰，排列規(guī)則整齊，形態(tài)完整，多呈錐形、星形，核大而圓，著色較淺，位于細胞中央，偶爾可見嗜酸性核仁。模型組皮層、海馬神經(jīng)細胞排列紊亂，數(shù)目減少，周圍有三角形或扁圓形小膠質細胞和星形膠質細胞增生，染成紅色，形態(tài)異常，許多細胞出現(xiàn)體積縮小，核濃染，出現(xiàn)核溶解、固縮、破裂等。葛根素注射液治療組與模型組相比較，海馬、皮層神經(jīng)元細胞形態(tài)異常、損傷的情況明顯減輕。見圖1。

3 結語

建立理想的VD動物模型對于探明VD的發(fā)病機制，開發(fā)防治血管性癡呆的新藥有著重要意義。雙側頸總動脈永久性結扎模型是血管性癡呆研究中常用的模型之一。傳統(tǒng)方法因同時永久性結扎雙側頸總動脈，對動物打擊過大，導致動物死亡率高，標本獲取困難，實驗周期延長。有文獻報道報道，傳統(tǒng)2VO法動物存活率僅為12.5%，本實驗對傳統(tǒng)方法進行改良，先后分次結扎雙側頸總動脈，分次結扎，有利于腦部血流重新分配，腦部血供重新建立，機體逐漸代償適應。同時，更接近臨床上常見的腦部慢性缺血的病理過程。實際觀察也發(fā)現(xiàn)，改良模型組小鼠術后蘇醒較快，死亡率也明顯減少。

葛根素注射液是由從豆科植物野葛以及甘葛藤的干燥根中提取的有效成分而制成的注射液。臨床應用，發(fā)現(xiàn)葛根素能明顯降低腦梗死患者的梗死灶面積，降低急性腦梗死患者的血流變和提高神經(jīng)功能學評分，明顯改善紅細胞變形能力，降低血液粘滯度，改善微循環(huán)，增加腦灌注，從而改善VD患者的認知功能[3]。許多腦結構都參與學習和記憶，無論是大腦皮層的不同區(qū)，還是海馬，都不是獨特的學習中樞或記憶中樞，對于不同模式的學習記憶過程發(fā)揮關鍵作用的腦結構不同。海馬在簡單空間定向和分辨學習與記憶中起著重要作用；前額葉皮層在復雜精細的時間、空間因素的綜合學習和記憶過程中最為重要。本研究采用HE染色方法，在光鏡下觀察到VD模型小鼠皮層、海馬區(qū)神經(jīng)數(shù)目明顯減少，排列紊亂，周圍有三角形或扁圓形小膠質細胞和星形膠質細胞增生，染成紅色，形態(tài)異常。提示永久性腦缺血VD模型小鼠皮層、海馬區(qū)錐體細胞減少，而幸存的錐體細胞結構破壞不足以代償其病理損傷而出現(xiàn)功能障礙，可能是其智能障礙的機制之一。葛根素注射液組小鼠跳臺試驗數(shù)據(jù)以及皮層、海馬區(qū)錐體細胞的形態(tài)及損傷情況均得到了一定程度的改善，提示葛根素注射液對血管性癡呆小鼠的皮層、海馬神經(jīng)元存在一定的保護作用，但具體保護機制尚有待進一步研究。

參考文獻

[1] 李梨，周岐新，石京山.血管性癡呆研究概況[J].中國老年學雜志，2005，25（10）：1269-1271.

[2] 趙坤英，解恒革.葛根總黃酮及葛根素對神經(jīng)系統(tǒng)保護作用的研究進展[J].中國醫(yī)藥科學，2011，1（1）：65-67.

[3] 常明則，王新來，吳海琴，等.葛根素對血管性癡呆大鼠行為學及額葉細胞凋亡的影響[J].卒中與神經(jīng)疾病，2009，16（3）：151-154.endprint

摘 要：目的：旨在探討葛根素注射液對血管性癡呆小鼠皮層、海馬神經(jīng)元的保護作用。方法：通過采用改良的雙側頸總動脈持久性結扎法制作血管性癡呆模型，從形態(tài)學上觀察葛根素對血管性癡呆小鼠皮層、海馬神經(jīng)元的保護作用。結果：（1）跳臺試驗結果提示，葛根素注射液組小鼠的反應時間明顯縮短，潛伏期顯著延長，錯誤次數(shù)減少。（2）HE染色結果顯示，與假手術組相比，模型組小鼠皮層、海馬神經(jīng)元細胞排列紊亂，數(shù)目減少，周圍有小膠質細胞和星形膠質細胞增生，形態(tài)異常，許多細胞出現(xiàn)體積縮小，出現(xiàn)核溶解、固縮、破裂等。與模型組相比，葛根素注射液組小鼠海馬、皮層神經(jīng)元細胞形態(tài)異常、損傷的情況明顯減輕。結論：葛根素注射液對血管性癡呆小鼠皮層、海馬神經(jīng)元發(fā)揮一定的神經(jīng)保護作用。

關鍵詞：葛根素 血管性癡呆 皮層神經(jīng)元

中圖分類號：R285 文獻標識碼：A 文章編號：1674-098X（2014）02（a）-0221-02

血管性癡呆（vascular dementia，VD）是繼阿爾茨海默病之后第二位最常見的癡呆癥，是指大腦功能衰退，特別是與智能有關的功能全面衰退，致其發(fā)生的主要原因是腦血流量減少，引起腦組織生化代謝障礙[1]。葛根素（Puerarin，Pur）化學名為4，7一二羥基-8-D葡萄糖基異黃酮，近年來被廣泛用于心腦血管疾病等急性期的治療，包括心絞痛、心肌梗塞，心律失常、腦缺血等[2]。本實驗從行為學、形態(tài)學角度，觀察葛根素注射液對血管性癡呆小鼠皮層、海馬神經(jīng)元的保護作用。

1 材料和方法

1.1 血管性癡呆模型建立

成年昆明小鼠，18～22 g，雌雄不限，購自齊齊哈爾醫(yī)學院動物研究中心。采用雙側頸總動脈持久性結扎法，并對該方法進行改良。用0.5%戊巴比妥鈉麻醉并固定小鼠，鈍性分離暴露右側頸總動脈，結扎右側頸總動脈，術后給予青霉素2萬U/天，4d；于術后7 d進行第二次手術，同法結扎另一側頸總動脈，腹腔注射青霉素2萬U/天，4d，于二次手術后7 d采用跳臺試驗鑒別血管性癡呆動物模型是否成功建立。

1.2 動物分組

模型建立后小鼠隨機分為（1）假手術組；（2）模型組；（3）葛根素組。各組立即給予相應藥物。正常組和模型組：腹腔注射生理鹽水，1次/日，注射14d。葛根素組：腹腔注射葛根素注射液（1 mg/mL），0.1 mL/10 g，1次/日，注射14d。

1.3 HE染色

在末次給藥后1h后取材，各組小鼠腦組織在4%多聚甲醛固定液中固定12 h后，室溫梯度酒精脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，常規(guī)切片，將組織附于用防脫劑處理過的載玻片上，60 ℃恒溫烘箱烘片12 h，備用于HE染色。石蠟切片經(jīng)二甲苯逐級脫蠟水化后，入蘇木素染色液中10 min，鹽酸酒精分化數(shù)秒后入伊紅染色1 min，梯度酒精脫水，二甲苯透明，樹脂封片。光鏡下觀察皮層、海馬組織結構變化。

2 結果

2.1 行為學觀察

本實驗采用跳臺試驗鑒別血管性癡呆動物模型是否成功建立，跳臺實驗結果提示，模型組小鼠存在著明顯的學習記憶障礙，模型建立成功。與模型組比較，葛根素注射液組小鼠的反應時間明顯縮短，潛伏期顯著延長，錯誤次數(shù)減少，改善了血管性癡呆小鼠學習記憶能力。

2.2 HE染色

光鏡下，假手術組小鼠皮層、海馬神經(jīng)元染色清晰，排列規(guī)則整齊，形態(tài)完整，多呈錐形、星形，核大而圓，著色較淺，位于細胞中央，偶爾可見嗜酸性核仁。模型組皮層、海馬神經(jīng)細胞排列紊亂，數(shù)目減少，周圍有三角形或扁圓形小膠質細胞和星形膠質細胞增生，染成紅色，形態(tài)異常，許多細胞出現(xiàn)體積縮小，核濃染，出現(xiàn)核溶解、固縮、破裂等。葛根素注射液治療組與模型組相比較，海馬、皮層神經(jīng)元細胞形態(tài)異常、損傷的情況明顯減輕。見圖1。

3 結語

建立理想的VD動物模型對于探明VD的發(fā)病機制，開發(fā)防治血管性癡呆的新藥有著重要意義。雙側頸總動脈永久性結扎模型是血管性癡呆研究中常用的模型之一。傳統(tǒng)方法因同時永久性結扎雙側頸總動脈，對動物打擊過大，導致動物死亡率高，標本獲取困難，實驗周期延長。有文獻報道報道，傳統(tǒng)2VO法動物存活率僅為12.5%，本實驗對傳統(tǒng)方法進行改良，先后分次結扎雙側頸總動脈，分次結扎，有利于腦部血流重新分配，腦部血供重新建立，機體逐漸代償適應。同時，更接近臨床上常見的腦部慢性缺血的病理過程。實際觀察也發(fā)現(xiàn)，改良模型組小鼠術后蘇醒較快，死亡率也明顯減少。

葛根素注射液是由從豆科植物野葛以及甘葛藤的干燥根中提取的有效成分而制成的注射液。臨床應用，發(fā)現(xiàn)葛根素能明顯降低腦梗死患者的梗死灶面積，降低急性腦梗死患者的血流變和提高神經(jīng)功能學評分，明顯改善紅細胞變形能力，降低血液粘滯度，改善微循環(huán)，增加腦灌注，從而改善VD患者的認知功能[3]。許多腦結構都參與學習和記憶，無論是大腦皮層的不同區(qū)，還是海馬，都不是獨特的學習中樞或記憶中樞，對于不同模式的學習記憶過程發(fā)揮關鍵作用的腦結構不同。海馬在簡單空間定向和分辨學習與記憶中起著重要作用；前額葉皮層在復雜精細的時間、空間因素的綜合學習和記憶過程中最為重要。本研究采用HE染色方法，在光鏡下觀察到VD模型小鼠皮層、海馬區(qū)神經(jīng)數(shù)目明顯減少，排列紊亂，周圍有三角形或扁圓形小膠質細胞和星形膠質細胞增生，染成紅色，形態(tài)異常。提示永久性腦缺血VD模型小鼠皮層、海馬區(qū)錐體細胞減少，而幸存的錐體細胞結構破壞不足以代償其病理損傷而出現(xiàn)功能障礙，可能是其智能障礙的機制之一。葛根素注射液組小鼠跳臺試驗數(shù)據(jù)以及皮層、海馬區(qū)錐體細胞的形態(tài)及損傷情況均得到了一定程度的改善，提示葛根素注射液對血管性癡呆小鼠的皮層、海馬神經(jīng)元存在一定的保護作用，但具體保護機制尚有待進一步研究。

參考文獻

[1] 李梨，周岐新，石京山.血管性癡呆研究概況[J].中國老年學雜志，2005，25（10）：1269-1271.

[2] 趙坤英，解恒革.葛根總黃酮及葛根素對神經(jīng)系統(tǒng)保護作用的研究進展[J].中國醫(yī)藥科學，2011，1（1）：65-67.

[3] 常明則，王新來，吳海琴，等.葛根素對血管性癡呆大鼠行為學及額葉細胞凋亡的影響[J].卒中與神經(jīng)疾病，2009，16（3）：151-154.endprint

摘 要：目的：旨在探討葛根素注射液對血管性癡呆小鼠皮層、海馬神經(jīng)元的保護作用。方法：通過采用改良的雙側頸總動脈持久性結扎法制作血管性癡呆模型，從形態(tài)學上觀察葛根素對血管性癡呆小鼠皮層、海馬神經(jīng)元的保護作用。結果：（1）跳臺試驗結果提示，葛根素注射液組小鼠的反應時間明顯縮短，潛伏期顯著延長，錯誤次數(shù)減少。（2）HE染色結果顯示，與假手術組相比，模型組小鼠皮層、海馬神經(jīng)元細胞排列紊亂，數(shù)目減少，周圍有小膠質細胞和星形膠質細胞增生，形態(tài)異常，許多細胞出現(xiàn)體積縮小，出現(xiàn)核溶解、固縮、破裂等。與模型組相比，葛根素注射液組小鼠海馬、皮層神經(jīng)元細胞形態(tài)異常、損傷的情況明顯減輕。結論：葛根素注射液對血管性癡呆小鼠皮層、海馬神經(jīng)元發(fā)揮一定的神經(jīng)保護作用。

關鍵詞：葛根素 血管性癡呆 皮層神經(jīng)元

中圖分類號：R285 文獻標識碼：A 文章編號：1674-098X（2014）02（a）-0221-02

血管性癡呆（vascular dementia，VD）是繼阿爾茨海默病之后第二位最常見的癡呆癥，是指大腦功能衰退，特別是與智能有關的功能全面衰退，致其發(fā)生的主要原因是腦血流量減少，引起腦組織生化代謝障礙[1]。葛根素（Puerarin，Pur）化學名為4，7一二羥基-8-D葡萄糖基異黃酮，近年來被廣泛用于心腦血管疾病等急性期的治療，包括心絞痛、心肌梗塞，心律失常、腦缺血等[2]。本實驗從行為學、形態(tài)學角度，觀察葛根素注射液對血管性癡呆小鼠皮層、海馬神經(jīng)元的保護作用。

1 材料和方法

1.1 血管性癡呆模型建立

成年昆明小鼠，18～22 g，雌雄不限，購自齊齊哈爾醫(yī)學院動物研究中心。采用雙側頸總動脈持久性結扎法，并對該方法進行改良。用0.5%戊巴比妥鈉麻醉并固定小鼠，鈍性分離暴露右側頸總動脈，結扎右側頸總動脈，術后給予青霉素2萬U/天，4d；于術后7 d進行第二次手術，同法結扎另一側頸總動脈，腹腔注射青霉素2萬U/天，4d，于二次手術后7 d采用跳臺試驗鑒別血管性癡呆動物模型是否成功建立。

1.2 動物分組

模型建立后小鼠隨機分為（1）假手術組；（2）模型組；（3）葛根素組。各組立即給予相應藥物。正常組和模型組：腹腔注射生理鹽水，1次/日，注射14d。葛根素組：腹腔注射葛根素注射液（1 mg/mL），0.1 mL/10 g，1次/日，注射14d。

1.3 HE染色

在末次給藥后1h后取材，各組小鼠腦組織在4%多聚甲醛固定液中固定12 h后，室溫梯度酒精脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，常規(guī)切片，將組織附于用防脫劑處理過的載玻片上，60 ℃恒溫烘箱烘片12 h，備用于HE染色。石蠟切片經(jīng)二甲苯逐級脫蠟水化后，入蘇木素染色液中10 min，鹽酸酒精分化數(shù)秒后入伊紅染色1 min，梯度酒精脫水，二甲苯透明，樹脂封片。光鏡下觀察皮層、海馬組織結構變化。

2 結果

2.1 行為學觀察

本實驗采用跳臺試驗鑒別血管性癡呆動物模型是否成功建立，跳臺實驗結果提示，模型組小鼠存在著明顯的學習記憶障礙，模型建立成功。與模型組比較，葛根素注射液組小鼠的反應時間明顯縮短，潛伏期顯著延長，錯誤次數(shù)減少，改善了血管性癡呆小鼠學習記憶能力。

2.2 HE染色

光鏡下，假手術組小鼠皮層、海馬神經(jīng)元染色清晰，排列規(guī)則整齊，形態(tài)完整，多呈錐形、星形，核大而圓，著色較淺，位于細胞中央，偶爾可見嗜酸性核仁。模型組皮層、海馬神經(jīng)細胞排列紊亂，數(shù)目減少，周圍有三角形或扁圓形小膠質細胞和星形膠質細胞增生，染成紅色，形態(tài)異常，許多細胞出現(xiàn)體積縮小，核濃染，出現(xiàn)核溶解、固縮、破裂等。葛根素注射液治療組與模型組相比較，海馬、皮層神經(jīng)元細胞形態(tài)異常、損傷的情況明顯減輕。見圖1。

3 結語

建立理想的VD動物模型對于探明VD的發(fā)病機制，開發(fā)防治血管性癡呆的新藥有著重要意義。雙側頸總動脈永久性結扎模型是血管性癡呆研究中常用的模型之一。傳統(tǒng)方法因同時永久性結扎雙側頸總動脈，對動物打擊過大，導致動物死亡率高，標本獲取困難，實驗周期延長。有文獻報道報道，傳統(tǒng)2VO法動物存活率僅為12.5%，本實驗對傳統(tǒng)方法進行改良，先后分次結扎雙側頸總動脈，分次結扎，有利于腦部血流重新分配，腦部血供重新建立，機體逐漸代償適應。同時，更接近臨床上常見的腦部慢性缺血的病理過程。實際觀察也發(fā)現(xiàn)，改良模型組小鼠術后蘇醒較快，死亡率也明顯減少。

葛根素注射液是由從豆科植物野葛以及甘葛藤的干燥根中提取的有效成分而制成的注射液。臨床應用，發(fā)現(xiàn)葛根素能明顯降低腦梗死患者的梗死灶面積，降低急性腦梗死患者的血流變和提高神經(jīng)功能學評分，明顯改善紅細胞變形能力，降低血液粘滯度，改善微循環(huán)，增加腦灌注，從而改善VD患者的認知功能[3]。許多腦結構都參與學習和記憶，無論是大腦皮層的不同區(qū)，還是海馬，都不是獨特的學習中樞或記憶中樞，對于不同模式的學習記憶過程發(fā)揮關鍵作用的腦結構不同。海馬在簡單空間定向和分辨學習與記憶中起著重要作用；前額葉皮層在復雜精細的時間、空間因素的綜合學習和記憶過程中最為重要。本研究采用HE染色方法，在光鏡下觀察到VD模型小鼠皮層、海馬區(qū)神經(jīng)數(shù)目明顯減少，排列紊亂，周圍有三角形或扁圓形小膠質細胞和星形膠質細胞增生，染成紅色，形態(tài)異常。提示永久性腦缺血VD模型小鼠皮層、海馬區(qū)錐體細胞減少，而幸存的錐體細胞結構破壞不足以代償其病理損傷而出現(xiàn)功能障礙，可能是其智能障礙的機制之一。葛根素注射液組小鼠跳臺試驗數(shù)據(jù)以及皮層、海馬區(qū)錐體細胞的形態(tài)及損傷情況均得到了一定程度的改善，提示葛根素注射液對血管性癡呆小鼠的皮層、海馬神經(jīng)元存在一定的保護作用，但具體保護機制尚有待進一步研究。

參考文獻

[1] 李梨，周岐新，石京山.血管性癡呆研究概況[J].中國老年學雜志，2005，25（10）：1269-1271.

[2] 趙坤英，解恒革.葛根總黃酮及葛根素對神經(jīng)系統(tǒng)保護作用的研究進展[J].中國醫(yī)藥科學，2011，1（1）：65-67.

[3] 常明則，王新來，吳海琴，等.葛根素對血管性癡呆大鼠行為學及額葉細胞凋亡的影響[J].卒中與神經(jīng)疾病，2009，16（3）：151-154.endprint