郭 琦 陳秀芹 郭尚云 付建紅 翟旭華 楊曉輝 孟 芳

sTn在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及臨床意義*

郭 琦 陳秀芹△郭尚云 付建紅 翟旭華 楊曉輝 孟 芳

目的 研究腫瘤相關(guān)糖抗原sTn在子宮內(nèi)膜癌、子宮內(nèi)膜非典型增生、良性子宮病變患者子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)情況，分析其與子宮內(nèi)膜癌患者手術(shù)病理分期、病理分級(jí)等的關(guān)系及臨床意義。方法采用免疫組化方法檢測(cè)sTn在子宮內(nèi)膜癌組（93例，包括子宮內(nèi)膜樣癌80例，漿液性乳頭狀癌10例，透明細(xì)胞癌3例）、子宮內(nèi)膜非典型增生組（50例）、子宮良性病變組（50例）子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)。結(jié)果sTn在子宮內(nèi)膜癌組的陽(yáng)性率為73.1%，與子宮內(nèi)膜非典型增生組（32%）和良性子宮病變組（14%）差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.017）；sTn在子宮內(nèi)膜樣癌組織中表達(dá)率為78.8%，明顯高于在其他組子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)（P＜0.008）；sTn在低分化的子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)率顯著高于高分化的子宮內(nèi)膜癌（P＜0.017）；在腫瘤浸潤(rùn)深度＞1/2肌層組的子宮內(nèi)膜癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率高于≤1/2肌層組（P＜0.05）；在有、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的子宮內(nèi)膜癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論sTn的表達(dá)可能在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展中起一定的作用。

子宮內(nèi)膜腫瘤；免疫組織化學(xué)；抗原,腫瘤；sTn

Tn抗原是最簡(jiǎn)單的黏蛋白型O-聚糖,Sialyl-Tn（sTn）抗原是唾液酸化的Tn抗原，是O-連接黏蛋白糖基化過(guò)程中糖鏈合成不完全出現(xiàn)的二糖結(jié)構(gòu)，也是腫瘤相關(guān)糖抗原的一種。它在正常組織中分布相當(dāng)局限，而在上皮來(lái)源惡性腫瘤，尤其是腺癌組織中分布廣泛[1]。子宮內(nèi)膜癌是婦科腫瘤中常見(jiàn)的腫瘤之一，發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。但是關(guān)于sTn在子宮內(nèi)膜癌中的研究卻很少。本研究通過(guò)應(yīng)用抗sTn單克隆抗體3P9[2-3]檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌患者子宮內(nèi)膜組織中sTn的表達(dá)，旨在探討sTn與子宮內(nèi)膜癌患者的腫瘤臨床分期及病理分級(jí)等的關(guān)系，分析其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 所有標(biāo)本均為2007年1月—2012年12月在鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院經(jīng)手術(shù)切除或診刮送檢標(biāo)本，其中子宮內(nèi)膜癌93例（包括子宮內(nèi)膜樣癌80例，漿液性乳頭狀癌10例，透明細(xì)胞癌3例），子宮內(nèi)膜非典型增生50例，子宮良性病變50例（25例子宮肌瘤和25例子宮內(nèi)膜息肉）。子宮內(nèi)膜癌組患者平均年齡（56.57±7.91）歲，初潮年齡（13.98±3.13）歲，平均孕（3.61±2.01）次，平均分娩（2.08±1.02）次，平均體質(zhì)量（67.35±10.67）kg；子宮內(nèi)膜非典型增生及子宮良性病變組患者平均年齡（49.57±9.62）歲，初潮年齡（14.56±2.97）歲，平均孕（3.28±2.52）次，平均分娩（2.47±0.98）次，平均體質(zhì)量（60.35±9.73）kg。兩組患者在年齡、初潮年齡、孕次、產(chǎn)次、體質(zhì)量差別均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t分別為1.251、1.024、0.653、0.594、1.086，均P＞0.05）。入組子宮內(nèi)膜癌患者，術(shù)前均經(jīng)診刮送病理明確診斷，且術(shù)前均未進(jìn)行過(guò)化療、放療及生物治療。對(duì)Ⅰ期患者，行筋膜外全子宮切除+雙側(cè)附件切除+盆腔淋巴結(jié)清掃術(shù)。對(duì)Ⅱ期患者，行子宮廣泛切除+雙附件切除+盆腔淋巴結(jié)清掃+腹主動(dòng)脈旁淋巴結(jié)清掃術(shù)。部分Ⅲ期或Ⅳ期患者行腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)。子宮內(nèi)膜非典型增生標(biāo)本及子宮良性病變標(biāo)本則來(lái)自于門診診刮或因上述病變手術(shù)切除子宮患者。

1.2 方法 利用抗sTn單克隆抗體3P9（試劑盒由中國(guó)科學(xué)院生物物理研究所提供）檢測(cè)sTn在子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)。所有標(biāo)本均經(jīng)4%甲醛液固定、石蠟包埋，用Leica石蠟切片機(jī)將石蠟包埋組織切成5 μm切片，在載玻片上42℃展片，自然干燥后50℃烤片6 h。取出片子，入二甲苯溶液脫蠟3次，每次5 min。再依次入無(wú)水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇和蒸餾水中水化。0.3%過(guò)氧化氫處理30 min，消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性，PBS洗3次。0.01 mmol/L pH 6.0檸檬酸緩沖液100℃水浴30 min抗原修復(fù)。體積分?jǐn)?shù)5%的正常血清封閉1 h。加入PBS稀釋的抗sTn單克隆抗體3P9于4℃過(guò)夜。HRP標(biāo)記的二抗37℃孵育1 h，PBS洗3次。DAB顯色2～7 min，蘇木素復(fù)染。各級(jí)乙醇（70%、80%、90%、無(wú)水乙醇Ⅰ、無(wú)水乙醇Ⅱ）脫水，每級(jí)3 min，取出切片置入二甲苯5 min，3次。晾干，中性樹(shù)脂封片；顯微成像系統(tǒng)拍片。對(duì)照：采用陜西超英生物科技有限公司提供的已知陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照，結(jié)果陽(yáng)性。用PBS代替一抗作陰性對(duì)照，結(jié)果陰性。子宮內(nèi)膜組織中sTn表達(dá)的判定標(biāo)準(zhǔn)：每張切片均取5個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞百分率＜5%為（-）；5%～9%為（+）；10%～24%為（++）；25%～49%為（+++）；50%～100%為（++++）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)資料進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用例或率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 sTn在子宮內(nèi)膜組織中的染色分布情況 在少數(shù)表達(dá)的正常組織和非典型增生組織中，染色主要集中在細(xì)胞膜上；而在子宮內(nèi)膜癌組織中sTn的陽(yáng)性著色廣泛分布在細(xì)胞膜和細(xì)胞漿，并且在sTn強(qiáng)表達(dá)（3+/4+）的組織中，sTn有向管腔彌散表達(dá)的現(xiàn)象，見(jiàn)圖1。

2.2 sTn陽(yáng)性表達(dá)與子宮內(nèi)膜病理類型的關(guān)系 sTn在子宮內(nèi)膜癌、子宮內(nèi)膜非典型增生、良性子宮病變患者子宮內(nèi)膜組織中的陽(yáng)性率分別為73.1%、32%、14%，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=51.823，P＜0.05）；sTn在子宮內(nèi)膜癌患者子宮內(nèi)膜組織中的陽(yáng)性表達(dá)率高于其他2組患者（均P＜0.017），見(jiàn)表1。

Table 1 Relationship between sTn expression and pathological type of the endometrium表1 sTn陽(yáng)性表達(dá)與子宮內(nèi)膜病理類型的關(guān)系 （例）

2.3 sTn陽(yáng)性表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌病理類型的關(guān)系 將漿液性乳頭狀癌組與透明細(xì)胞癌組合并為Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌組，將子宮內(nèi)膜樣癌列為Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌組。各組患者子宮內(nèi)膜組織中sTn陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=59.107，P＜0.05）；sTn在Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌組子宮內(nèi)膜組織中的陽(yáng)性表達(dá)率均高于在其他各組中的表達(dá)率（均P＜0.008），見(jiàn)表2。

Table 2 Relationship between sTn expression and pathological type of the endometrial carcinoma表2 sTn陽(yáng)性表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌病理類型的關(guān)系例

2.4 sTn陽(yáng)性表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌患者病理特征的關(guān)系 93例子宮內(nèi)膜癌患者中，sTn陽(yáng)性率在手術(shù)病理分期較早組與手術(shù)病理分期較晚組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。sTn在低、中、高分化子宮內(nèi)膜癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，sTn在低分化組織中的陽(yáng)性表達(dá)率高于高分化組織（χ2=7.299，P＜0.017），低分化與中分化比較，中分化與高分化組織比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2分別為2.590、1.487，均P＞0.017）。sTn在腫瘤浸潤(rùn)深度＞1/2肌層組的子宮內(nèi)膜癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率高于≤1/2肌層組。sTn在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的子宮內(nèi)膜癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；見(jiàn)表3。

Table 3 Relationship between sTn expression and pathologic staged of the endometrial carcinoma表3 sTn陽(yáng)性表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌患者病理特征的關(guān)系例（%）

3 討論

3.1 sTn的研究現(xiàn)狀及其與子宮內(nèi)膜組織的關(guān)系 sTn是近年來(lái)倍受矚目的一種腫瘤相關(guān)糖抗原，在多種上皮性腺癌中高表達(dá)，如結(jié)直腸癌[4]、乳腺癌[5]、卵巢癌[6]、膀胱癌[7]等，但在各自相對(duì)應(yīng)的正常組織中不表達(dá)。另外，其表達(dá)情況與腫瘤的侵襲性和不良預(yù)后高度相關(guān)；sTn在某些腺癌患者血清和組織中的高表達(dá)，甚至被認(rèn)為是腫瘤不良預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子，如結(jié)直腸癌[4]、胃癌[8]、乳腺癌[9]。

子宮內(nèi)膜癌目前尚無(wú)特異的早期篩查方法及腫瘤標(biāo)志物。雖然sTn與各種腫瘤的研究起始已久，但其在子宮內(nèi)膜癌中的研究卻很少，僅有的幾篇報(bào)道結(jié)果也不盡相同。Numa等[10]報(bào)道稱sTn在子宮內(nèi)膜癌組織中不表達(dá)。而Semczuk等[11]報(bào)道sTn在大多數(shù)子宮內(nèi)膜癌組織中廣泛表達(dá)，在正常和增生的子宮內(nèi)膜中表達(dá)有限。Ohno等[12]應(yīng)用單克隆抗體MLS132對(duì)子宮內(nèi)膜癌組織中的sTn進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)sTn在44.3%的患者中表現(xiàn)為廣泛陽(yáng)性，在17.1%的患者中為局灶陽(yáng)性，而38.6%為陰性。本研究結(jié)果顯示sTn在子宮內(nèi)膜癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于子宮內(nèi)膜非典型增生、良性子宮病變，與以上研究結(jié)果相似，進(jìn)一步證實(shí)了sTn的腫瘤相關(guān)性，且sTn在子宮內(nèi)膜癌組織中呈高表達(dá)，提示sTn可能成為子宮內(nèi)膜癌組織學(xué)診斷的一個(gè)新的輔助分子。

3.2 sTn與子宮內(nèi)膜癌病理類型的關(guān)系 Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌為雌激素依賴型，病理學(xué)類型表現(xiàn)為子宮內(nèi)膜樣癌。Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌為非雌激素依賴型，病理學(xué)類型多為漿液性癌、透明細(xì)胞癌或分化較差的未分化癌等類型。國(guó)內(nèi)安云鶴等[3]研究指出sTn特異性與Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌相關(guān)。本研究也顯示sTn在Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌組的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于子宮良性病變組、非典型增生內(nèi)膜組及Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌組，與安云鶴等的研究結(jié)果相似。另外，本研究顯示sTn在Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌組中的陽(yáng)性表達(dá)率與其在子宮良性病變組、非典型增生內(nèi)膜組中的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，從而說(shuō)明sTn在Ⅰ型及Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)模式不同，提示sTn在Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌組的發(fā)生、發(fā)展中起著更重要的作用。由于標(biāo)本的限制，對(duì)于一些其他類型的子宮內(nèi)膜癌，如黏液性腺癌、鱗狀細(xì)胞癌等未列入研究范圍，尚有待于進(jìn)一步的研究。

3.3 sTn與子宮內(nèi)膜癌預(yù)后的關(guān)系 sTn在高、中分化的腫瘤組織中表達(dá)率明顯高于低分化的腫瘤組織，并認(rèn)為這預(yù)示著sTn可能與子宮內(nèi)膜癌的良好預(yù)后相關(guān)[3]。但是Ohno等[12]在對(duì)70例子宮內(nèi)膜癌患者進(jìn)行隨訪及分析后，認(rèn)為sTn的強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)是影響子宮內(nèi)膜癌患者無(wú)復(fù)發(fā)生存率的危險(xiǎn)因素，預(yù)示著子宮內(nèi)膜癌患者的較差預(yù)后。Ohno等[12]還指出sTn在子宮內(nèi)膜癌組織的過(guò)表達(dá)與環(huán)氧酶-2（COX-2）的過(guò)表達(dá)呈正相關(guān)，與CD8+T淋巴細(xì)胞的數(shù)量呈負(fù)相關(guān)，從而認(rèn)為sTn可能與COX-2協(xié)同作用，抑制宿主的免疫監(jiān)督，最終導(dǎo)致子宮內(nèi)膜癌患者無(wú)復(fù)發(fā)生存率的降低。

本研究顯示，不同手術(shù)病理分期及不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移子宮內(nèi)膜癌患者sTn陽(yáng)性表達(dá)率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但sTn在低分化的子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)率顯著高于高分化的子宮內(nèi)膜癌，sTn在腫瘤浸潤(rùn)深度＞1/2肌層組的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于≤1/2肌層組，因此認(rèn)為sTn高表達(dá)者可能預(yù)后更差。

另一方面，本研究同時(shí)顯示sTn在Ⅱ型內(nèi)膜癌中的表達(dá)低于Ⅰ型；而臨床上Ⅱ型內(nèi)膜癌預(yù)后更差，似乎與前述結(jié)果矛盾。分析其原因，可能與研究對(duì)象的構(gòu)成有關(guān)，即入組的Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌患者中手術(shù)病理分期較晚、低分化、腫瘤浸潤(rùn)深度較深及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者所占比例較Ⅱ型高。本研究中sTn在低、高分化的子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)率與中分化者差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能也與此有關(guān)。

Figure 1 Staining of sTn in endometrial tissues（immunohistochemistry,×100）圖1 sTn在子宮內(nèi)膜組織中的分布（免疫組化,×100）

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（2013-09-09收稿 2014-02-10修回）

（本文編輯 李鵬）

The Expression and Clinical Significance of sTn in Endometrial Carcinoma

GUO Qi，CHEN Xiuqin，GUO Shangyun，F(xiàn)U Jianhong，ZHAI Xuhua，YANG Xiaohui，MENG Fang
The Fifth Affiliated Hospital of Zhengzhou University，Zhengzhou 450052，China

ObjectiveTo investigate the expression and clinical significance of tumor-associated carbohydrate antigen sTn in endometrium from patients with atypical hyperplasia of endometrium,endometrial carcinoma and benign the uterine lesion.And to analyze the association between sTn and the pathologic stage and grade of endometrial carcinoma.Meth?ods sTn was detected by immunohistochemistry in 193 patient samples,including 93 subjects with endometrial carcinoma, 50 subjects with atypical hyperplasia of endometrium and 50 subjects with benign uterine lesions.ResultsThe positive sTn rate in endometrial carcinoma group was 73.1%，which was significantly different from that in atypical hyperplasia endometrium group(32%)and that in benign uterine lesion group(14%),(P＜0.017).sTn positive rate in patients with endometrial carcinoma was 78.8%which is higher than that in patients with other diseases(P＜0.008).The positive rate of sTn in patients with poorly differentiated endometrial carcinoma was significantly higher than that in patients with highly differentiated endometrial carcinoma(P＜0.017).The positive rate of sTn in tissues of tumor infiltration with depth of more than half of myometrial was significantly higher than in tissues of tumor infiltration with depth of equal or less than half of myometrial (P＜0.05).But there was no significant difference in sTn positive rate between the endometrial carcinoma groups with and without lymph node metastasis(P＞0.05).ConclusionsTn may play a role in the tumorigenesis and development of endometrial carcinoma.

endometrial neoplasms；immunohistochemistry；antigens,neoplasm；sTn

R737.33

A

10.3969/j.issn.0253-9896.2014.06.020

*河南省衛(wèi)生廳醫(yī)學(xué)科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：2011020069）

鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院（郵編450052）

△通訊作者 E-mail：zdwfy@sohu.com