酈秀芳，呂艷婷，張海勇，趙飛行，胡孟鈞

（諸暨市人民醫(yī)院 病理科，浙江 紹興 311800）

甲狀腺癌是最常見(jiàn)的內(nèi)分泌系統(tǒng)惡性腫瘤，其中，乳頭狀癌是甲狀腺癌最常見(jiàn)的組織學(xué)類(lèi)型。實(shí)際工作中，大部分典型的甲狀腺乳頭狀癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）診斷并無(wú)困難，針對(duì)組織病理學(xué)改變不明顯的病例，多采用免疫組織化學(xué)法輔助診斷。為了提高診斷的準(zhǔn)確性，常規(guī)選擇多種抗體聯(lián)合檢測(cè)。研究顯示CK19、TPO、CD56及p63四種抗體聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，PTC的診斷敏感性與特異性均得到顯著提高[1]，但是，關(guān)于這四種抗體與PTC臨床因素（如：年齡、性別、病灶數(shù)目、病灶大小及組織學(xué)亞型等）之間的關(guān)系，鮮有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)針對(duì)這一問(wèn)題進(jìn)一步分析CD56、TPO、p63及CK19與PTC的臨床病理相關(guān)性。

1 材料和方法

1.1 標(biāo)本 選取我院病理科2009年1月-2012年12月PTC手術(shù)切除標(biāo)本100例，其中男19例，女81例，年齡≤40歲的31例，＞40歲的69例，所有手術(shù)切除標(biāo)本均經(jīng)組織病理學(xué)確診，相關(guān)臨床、病理資料完整。

1.2 方法 所有手術(shù)切除標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛溶液固定，常規(guī)組織處理，石蠟包埋，切片厚2μm。采用免疫組織化學(xué)SP法，每例均選用CD56、TPO、p63及CK19抗體進(jìn)行染色（均為鼠抗人單克隆抗體，稀釋度分別為1:100、1:50、1:200、1:100，購(gòu)自北京中杉金橋公司），按試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，DAB顯色，蘇木精復(fù)染。每組均設(shè)陰性及陽(yáng)性對(duì)照，其中PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照，CD56、TPO、p63及CK19陽(yáng)性對(duì)照依次為肺小細(xì)胞肺癌、正常甲狀腺、正常前列腺、正常結(jié)腸組織。

1.3 結(jié)果判定 采用雙盲法，由2位病理診斷醫(yī)師分別獨(dú)立閱片，觀察10個(gè)高倍視野（40×）計(jì)數(shù)1000個(gè)細(xì)胞，對(duì)免疫組織化學(xué)結(jié)果進(jìn)行評(píng)估，兩者取均值后作為樣本的最終結(jié)果，其中結(jié)果完全不一致的片子不計(jì)入統(tǒng)計(jì)范圍。四種抗體陽(yáng)性產(chǎn)物均為棕黃色，CD56定位于胞膜和/或胞質(zhì)，TPO定位于胞質(zhì)和胞膜，p63定位于胞核，CK19定位于胞質(zhì)。按陽(yáng)性細(xì)胞所占腫瘤細(xì)胞百分比分為：陰性（-）：陽(yáng)性細(xì)胞≤10%；弱陽(yáng)性（+）：陽(yáng)性細(xì)胞11%～25%；中陽(yáng)性（++）：陽(yáng)性細(xì)胞26%～50%；強(qiáng)陽(yáng)性（+++）：陽(yáng)性細(xì)胞＞50%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。陽(yáng)性率比較采用x2檢驗(yàn)，當(dāng)T≥5時(shí)，進(jìn)行基本x2檢驗(yàn)；當(dāng)1≤T＜5時(shí)，進(jìn)行校正x2檢驗(yàn)，當(dāng)T＜1時(shí)進(jìn)行Fisher確切概率計(jì)算。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CK19、p63、TPO及CD56在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá) 在100例PTC中CK19表達(dá)陽(yáng)性85例，陽(yáng)性率為85%；p63表達(dá)陽(yáng)性16例，陽(yáng)性率為16%；TPO表達(dá)陽(yáng)性5例，陽(yáng)性率為5%；CD56表達(dá)陽(yáng)性10例，陽(yáng)性率為10%。其中CK19表達(dá)為強(qiáng)陽(yáng)性的有69例，而后三種抗體均表達(dá)為弱陽(yáng)性。見(jiàn)表1及圖1-4。

表1 CK19、p63、TPO及CD56在PTC中的表達(dá)情況

圖1 PTC中CK19表達(dá)為胞膜陽(yáng)性（SP法，×100）

圖2 PTC中TPO表達(dá)為陰性，周?chē)?duì)照組織可見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)（SP法，×100）

圖3 PTC中CD56表達(dá)為陰性（SP法，×100）

圖4 PTC中p63表達(dá)為陰性（SP法，×100）

2.2 CK19、p63、TPO及CD56在PTC中的表達(dá)與臨床病理因素間的關(guān)系 四種抗體在100例PTC中的表達(dá)與性別、年齡、病灶數(shù)目、病灶大小、病灶部位、有否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)亞型無(wú)關(guān)，其中CD56的表達(dá)與是否有被膜侵犯有關(guān)，有被膜侵犯時(shí)陽(yáng)性率顯著低于無(wú)被膜侵犯時(shí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。其他三種抗體的表達(dá)與是否有被膜侵犯無(wú)關(guān)。見(jiàn)表2。

3 討論

CD56正常表達(dá)于NK細(xì)胞，活化的T細(xì)胞，大顆粒淋巴細(xì)胞，特定的內(nèi)分泌腺和腦組織[2-3]?？烧{(diào)節(jié)細(xì)胞的遷移能力，參與神經(jīng)元間的結(jié)合，刺激神經(jīng)突的生長(zhǎng)，其基因的表達(dá)可減低特定腫瘤的浸潤(rùn)。同時(shí)，CD56也可表達(dá)于正常甲狀腺濾泡上皮，可用于PTC濾泡亞型與濾泡腺瘤的鑒別。黃悅等[4]也認(rèn)為CD56失表達(dá)有助于PTC的診斷。Scarpino等[5]研究提示，CD56的表達(dá)水平和PTC中腫瘤相關(guān)淋巴管的形成之間可能存在某種聯(lián)系，調(diào)節(jié)CD56的表達(dá)可進(jìn)一步改變腫瘤細(xì)胞的黏附和遷移能力，CD56失表達(dá)與腫瘤惡性潛能的提高和預(yù)后差有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)中CD56陽(yáng)性率為11%，全部為弱陽(yáng)性表達(dá)，其表達(dá)與性別、年齡、病灶數(shù)目、病灶大小、病灶部位、有否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及組織學(xué)亞型無(wú)關(guān)，但與是否有被膜侵犯有關(guān)。研究證實(shí)，被膜型PTC預(yù)后好，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率較經(jīng)典型PTC低，同時(shí)，PTC的局部侵犯和被膜的防御作用與預(yù)后有明顯相關(guān)性[6-7]。程文元等[8]進(jìn)行了749例PTC致死因素分析，顯示有被膜侵犯的PTC病死率顯著低于無(wú)被膜侵犯的病例。本資料中有被膜侵犯組的CD56陽(yáng)性率顯著低于無(wú)被膜侵犯組的CD56陽(yáng)性率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），不僅證實(shí)了CD56表達(dá)與被膜侵犯這一臨床參數(shù)之間的關(guān)系，同時(shí)再次證實(shí)了CD56表達(dá)降低與腫瘤預(yù)后差密切相關(guān)。

表2 CK19、p63、TPO及CD56在PTC組織中的表達(dá)與臨床因素間的關(guān)系

TPO是一種糖基化血紅蛋白，主要位于甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞頂端膜和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，催化甲狀腺激素的生物合成。其表達(dá)與濾泡上皮細(xì)胞的組織分化和功能相關(guān)，甲狀腺腫瘤中的表達(dá)低于正常甲狀腺組織與良性病變[9]。國(guó)內(nèi)外研究顯示，惡性甲狀腺結(jié)節(jié)中TPO陽(yáng)性率不足20%，而良性甲狀腺結(jié)節(jié)中TPO的陽(yáng)性率高達(dá)80%以上[10]。本資料中其陽(yáng)性率為5%，與國(guó)內(nèi)外報(bào)道相符，但是，TPO的表達(dá)與與性別、年齡、病灶數(shù)目、病灶大小、病灶部位、有否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)亞型及有無(wú)被膜侵犯無(wú)關(guān)。CK19是一種低分子量角蛋白，正常表達(dá)于單層和復(fù)層上皮，是一種經(jīng)常應(yīng)用于甲狀腺病理的免疫組織化學(xué)標(biāo)志物。PTC時(shí)，CK19多為彌漫強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，而其他甲狀腺腫瘤多為局灶或弱陽(yáng)性表達(dá)，有助于鑒別。同時(shí)，研究顯示，CK19的表達(dá)與PTC的甲狀腺外侵犯和較高的pTNM分級(jí)顯著相關(guān)，是一種預(yù)測(cè)PTC預(yù)后較差的標(biāo)志物[11]。本資料中CK19陽(yáng)性率為87%，其中表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性69例，其他三種抗體多為陰性表達(dá)，極少數(shù)為弱陽(yáng)性表達(dá)。但是，CK19的表達(dá)與性別、年齡、病灶數(shù)目、病灶大小、病灶部位、有否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、被膜侵犯及組織學(xué)亞型無(wú)關(guān)，同時(shí)，不能預(yù)測(cè)PTC的預(yù)后。

P63是P53同源核轉(zhuǎn)錄因子，位于3q27，編碼6種不同的異構(gòu)體。主要表達(dá)于具有鱗狀上皮分化潛能的基底層及基底旁層細(xì)胞，鱗狀細(xì)胞和肌上皮細(xì)胞等[12]。同時(shí)，P63基因能夠反映細(xì)胞的分化狀態(tài)，在不成熟的基底層起源細(xì)胞中表達(dá)水平明顯增高，對(duì)于胚胎外胚層的發(fā)育，上皮干細(xì)胞的增生、生長(zhǎng)起著重要作用，被認(rèn)為是外胚層干細(xì)胞的良好標(biāo)志物。目前，研究發(fā)現(xiàn)甲狀腺惡性腫瘤可能是干細(xì)胞轉(zhuǎn)化而來(lái)，PTC的癌基因RET/PTC不能導(dǎo)致成熟的甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞癌變，但能使甲狀腺胚胎細(xì)胞向惡性轉(zhuǎn)化，從而導(dǎo)致PTC的發(fā)生。Burstein等[13]研究顯示甲狀腺實(shí)質(zhì)性細(xì)胞巢中p63呈強(qiáng)表達(dá)，認(rèn)為實(shí)質(zhì)細(xì)胞巢可能就是胚胎干細(xì)胞的殘留。Takano等[14]也證實(shí)了甲狀腺癌中干細(xì)胞的存在。國(guó)內(nèi)研究顯示，p63熒光吸收度與腫瘤患者的性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小及有無(wú)轉(zhuǎn)移之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本實(shí)驗(yàn)用免疫組織化學(xué)法也證實(shí)了p63的表達(dá)與上述臨床因素間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），同時(shí)，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步顯示p63的表達(dá)與病灶數(shù)目、有無(wú)被膜侵犯和組織學(xué)亞型間差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。錢(qián)敏飛等[15]研究6例甲狀腺微小癌中均見(jiàn)p63的陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性率為100%，認(rèn)為微小癌中可能存在較多p63陽(yáng)性的殘留干細(xì)胞，微小癌中的癌細(xì)胞具有進(jìn)一步分化的能力，而本實(shí)驗(yàn)中47例微小癌中p63陽(yáng)性率僅為19%，因此，p63在微小癌中的確切表達(dá)還需更多大樣本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步分析。

總之，CD56、TPO、p63及CK19四種抗體聯(lián)合檢測(cè)，可以提高PTC診斷的準(zhǔn)確性，其中CD56的表達(dá)與有否被膜侵犯有關(guān)，有被膜侵犯時(shí)CD56的表達(dá)顯著低于無(wú)被膜侵犯時(shí)，同時(shí)，CD56低表達(dá)預(yù)示PTC預(yù)后較差。

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