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        復(fù)方參花搽劑的體外抑菌試驗及初步臨床觀察*

        2014-06-12 09:40:08周慶秋
        關(guān)鍵詞:參花銅綠金黃色

        高 云 周慶秋

        (泰山醫(yī)學(xué)院附屬泰山醫(yī)院,山東 泰安 271000)

        復(fù)方參花搽劑是泰安市中心醫(yī)院在原制劑參花搽劑基礎(chǔ)上改進(jìn)處方及工藝而成的新制劑,主要有苦參、金銀花、黃柏、白鮮皮、蛇床子、白芷、地膚子、龍膽草等八味藥材組成,有清熱燥濕、抗菌止癢之功效,臨床上可用于治療蕁麻疹、濕疹、滲出性皮炎、皮膚瘙癢癥、皮癬等多種皮膚病。本文通過體外抑菌試驗及臨床療效觀察兩個方面進(jìn)行初步研究,比較兩種制劑的藥效。

        1 體外抑菌試驗

        1.1儀器與試劑 標(biāo)準(zhǔn)菌株金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸桿菌ATCC25922、銅綠假單胞菌ATCC27853各6株,山東省臨床檢驗中心提供。試驗菌株變形桿菌6株由泰安市中心醫(yī)院院臨床標(biāo)本分離,鑒定按照NCCLS文件方法進(jìn)行。游標(biāo)卡尺,規(guī)格(0~150 mm)×0.02 mm:安徽桐城量具廠。恒溫培養(yǎng)箱,規(guī)格GI6-2,美國SHELLAB。LB培養(yǎng)基粉,上海紀(jì)寧實業(yè)有限公司。LB營養(yǎng)瓊脂, 上海紀(jì)寧實業(yè)有限公司。恒溫氣浴搖床,規(guī)格THZ-82B,金壇市國旺實驗儀器廠。復(fù)方參花搽劑(自制,批號20130805)。參花搽劑(泰安市中心醫(yī)院提供,批號20130709)。

        1.2方法與結(jié)果

        1.2.1菌種保存 將取得的金黃色葡萄球菌、變形桿菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌分別進(jìn)行菌種的保存。在超凈臺下,用經(jīng)過酒精燈反復(fù)灼燒的取菌環(huán),選取一個生長良好的菌落,輕輕刮取菌落表面,再將取菌環(huán)在培養(yǎng)液中輕輕震蕩,使刮取的細(xì)菌充分散落在3 ml LB培養(yǎng)液中,置于37 ℃恒溫?fù)u床,170 r/min培養(yǎng)6小時。取出后用移液器反復(fù)吹打混勻,取700 μl菌液,加入高壓過的甘油200 μl,放置于-20℃冰箱中封存。

        1.2.2細(xì)菌培養(yǎng) 在超凈臺下,進(jìn)行接種培養(yǎng)。用無菌接種環(huán),挑取菌種冰晶,在3 ml LB培養(yǎng)液中輕輕震蕩,使菌種均勻分布于培養(yǎng)液中,37℃恒溫?fù)u床170 r/min過夜培養(yǎng)16小時。隔日早晨進(jìn)行轉(zhuǎn)種,無菌條件下,取過夜培養(yǎng)16 h后的細(xì)菌,以1∶100的比例加入新鮮LB培養(yǎng)液中次代培養(yǎng),置轉(zhuǎn)速為170 r/min,37℃恒溫?fù)u床培養(yǎng)2.5~3 h,使細(xì)菌達(dá)到對數(shù)生長期。

        1.2.3抑菌活性測定 采用K-B紙片擴(kuò)散法[1-3],用移液器輕輕吹打混勻菌液,無菌涂抹棒沾取菌液,均勻涂抹在LB 瓊脂培養(yǎng)基表面,再分別將經(jīng)過浸泡的含復(fù)方參花搽劑、參花搽劑藥液的濾紙片(直徑0.4 cm),輕輕放置在培養(yǎng)基表面。將培養(yǎng)皿放置于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)48 h,觀察并測量抑菌環(huán)直徑(d/mm)。用0.9%的生理鹽水浸泡的濾紙片作為陽性對照,用空白細(xì)菌培養(yǎng)皿作陰性對照。重復(fù)5次,取平均值(d/mm)。

        1.2.5試驗結(jié)果 由表1結(jié)果可見,復(fù)方參花搽劑對金黃色葡萄球菌、變形桿菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌有明顯的抑制作用。金黃色葡萄球菌對復(fù)方參花搽劑有較強的敏感性,抑菌圈大于19 mm, 變形桿菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌對復(fù)方參花搽劑中度敏感。

        參花搽劑對金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑處于13~19 mm之間,屬于中度敏感,對變形桿菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌的抑菌圈直徑處于8~13 mm之間,屬低度敏感。

        復(fù)方參花搽劑組F=106.580,P≤0.01,表明復(fù)方參花搽劑對四種細(xì)菌的抑菌作用差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義;參花搽劑組F=5.914,P≤0.01,表明參花搽劑對四種細(xì)菌的抑菌作用差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。兩種藥液間對每種細(xì)菌的比較采用t檢驗,組間金黃色葡萄球菌t=14.93,P<0.01,說明復(fù)方參花搽劑與參花搽劑對金黃色葡萄球菌的抑菌作用差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義;組間變形桿菌t=5.946,P<0.01,說明復(fù)方參花搽劑與參花搽劑對變形桿菌的抑菌作用差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義;組間大腸桿菌t=9.334,P<0.01,說明復(fù)方參花搽劑與參花搽劑對大腸桿菌的抑菌作用差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義;組間銅綠假單胞菌t=4.306,P<0.01,說明復(fù)方參花搽劑與參花搽劑對銅綠假單胞菌的抑菌作用差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。

        表1 抑菌試驗結(jié)果

        注:-表示無抑菌作用

        1.3討論

        復(fù)方參花搽劑對金黃色葡萄球菌、變形桿菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌有明顯的抑制作用,且對金黃色葡萄球菌的抑菌作用較強于對變形桿菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌的抑菌作用。說明復(fù)方參花搽劑對革蘭氏陽性菌(G+)有抑菌活性,對革蘭氏陰性菌(G-)亦有抑菌活性,且對G+菌的活性強于對G-菌的活性。臨床實踐表明,苦參具有清熱燥濕、祛風(fēng)、殺蟲、止癢,用于濕疹、濕瘡、皮膚瘙癢等癥。金銀花清熱解毒[4],所含綠原酸及黃酮類化合物同樣具有天然抗菌活性,對金黃色葡萄球菌及變形桿菌也有較強的抑制作用[5],為瘡瘍要藥;黃柏、蛇床子、地膚子、龍膽草、白芷等可以加強主藥清熱燥濕、祛風(fēng)殺蟲之功,共為輔藥;全方為伍可用于蕁麻疹、濕疹、滲出性皮炎、濕疹、手足癬的治療。

        參花搽劑中主藥同為苦參,制劑同樣具有以上功效,但抑菌效果比復(fù)方參花搽劑弱。中藥制劑的抑菌作用原理比較復(fù)雜,但究其原因應(yīng)與有效成分的濃度有著正相關(guān)性。2種藥液對比試驗結(jié)果表現(xiàn)出差異性較大,主要與處方改進(jìn)及制劑工藝優(yōu)選有關(guān),傳統(tǒng)意義上的經(jīng)驗煎煮法不考慮吸水率及加水倍量、提取次數(shù)、提取時間的科學(xué)設(shè)計等因素導(dǎo)致苦參堿、綠原酸等成分提取率較低,而復(fù)方參花搽劑系經(jīng)過正交試驗設(shè)計優(yōu)選的最佳工藝進(jìn)行提取,有效成分提取率高,隨著有效成分濃度的增大細(xì)菌敏感度提高,抑菌效果明顯增強,為下一步的臨床應(yīng)用提供了依據(jù)。

        2 臨床療效觀察

        濕疹與皮炎是臨床上皮膚科非常常見的疾病,發(fā)病初期病人皮膚紅腫,出現(xiàn)皮疹、丘疹,病程持續(xù)進(jìn)展的病人皮膚表面通常會出現(xiàn)糜爛、水皰、血痂等癥狀,同時伴劇烈腫痛,極劇瘙癢,病人難以克制反復(fù)抓撓,進(jìn)而加速病情進(jìn)展,影響了患者的正常生活質(zhì)量,甚至影響到患者的心理。

        2.1資料與方法

        2.1.1一般資料 選擇2013年8月中旬至2013年11月之間的在泰安市中心醫(yī)院皮膚科就診的患濕疹的58例病患志愿者,診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《臨床皮膚病學(xué)》[6]判定。病程3天~3個月。病例資料年齡2歲~63歲,男30例,女28例,每組29例。治療組,男14例,女15例,平均年齡38.5歲;對照組,男15例,女14例,平均年齡40.3歲。兩組間性別、癥狀、年齡、病情均無明顯差異,具有可比性。

        2.1.2方法

        2.1.2.1治療方法 用藥前將患處用生理鹽水清洗干凈,晾干后搽用藥液。治療組使用復(fù)方參花搽劑,批號20130805,對照組使用參花搽劑,批號20130709。用藥方法為用棉簽蘸取藥液輕搽濕疹部位,每日2次,早晚各用藥1次。連續(xù)使用5天為1個療程,根據(jù)病人恢復(fù)情況使用1~3個療程,2個療程間隔1~2天。注意事項為禁忌辛辣刺激飲食,禁忌用熱水清潔患處。

        2.1.2.1療效標(biāo)準(zhǔn) 痊愈:全部皮疹消失, 病人無瘙癢感。顯效:80%的皮疹消退, 病人瘙癢癥狀明顯減輕。有效:50%的皮疹消退, 病人瘙癢感覺稍減輕。無效:用藥后濕疹未發(fā)生變化或病情進(jìn)一步進(jìn)展。復(fù)發(fā):痊愈病人4周內(nèi)又出現(xiàn)皮疹、瘙癢感現(xiàn)象。有效率以痊愈+顯效+有效計。

        2.2結(jié)果

        2.1.1治療結(jié)果 治療組與對照組各觀察了3個療程,療程期間兩組均無明顯不良反應(yīng)。治療組總有效率為96.4%,對照組總有效率為86.2%,治療組的總有效率比對照組的總有效率高10.2%。見表2。

        表2 兩組療效比較

        2.1.2隨訪結(jié)果 以上兩組病例治療結(jié)束后,對痊愈者41人進(jìn)行了4周以內(nèi)的隨訪。治療組痊愈志愿者22人中,1~4周內(nèi)復(fù)發(fā)病人5人,復(fù)發(fā)率22.7%。對照組痊愈病人19人中,1~4周內(nèi)復(fù)發(fā)病人8人,復(fù)發(fā)率42.1%。治療組的復(fù)發(fā)率比對照組的復(fù)發(fā)率低20%。

        2.3討論

        臨床對照觀察結(jié)果表明,復(fù)方參花搽劑作為純中藥制劑對濕疹總有效率近100%,療效確切,且無明顯不良反應(yīng);改進(jìn)后的復(fù)方參花搽劑與原制劑參花搽劑相比,具有有效率高尤其是治愈率高、復(fù)發(fā)率低的優(yōu)點,這與苦參堿等藥理成分的綜合提取率增加有直接關(guān)系。臨床觀察結(jié)果與體外抑菌試驗結(jié)果一致,驗證了經(jīng)處方及工藝優(yōu)化之后的復(fù)方參花搽劑提取工藝合理、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)穩(wěn)定、治療作用確切,病人使用簡單便捷,無局部刺激,可以在臨床推廣應(yīng)用。

        濕疹屬于變態(tài)反應(yīng)性疾病,隨著環(huán)境的改變及工作生活壓力的增加,臨床上此類疾病呈現(xiàn)出日趨增長的趨勢,且無年齡、性別選擇性,復(fù)發(fā)率極高。濕疹皮炎發(fā)病原因非常復(fù)雜,簡單來分有內(nèi)在因素和外在因素,兩因素間互相聯(lián)系,作用協(xié)同。外因如化學(xué)制劑、動物毒素、魚蝦、花粉、化妝品、日曬、塵埃等,內(nèi)因包括遺傳因素、免疫因素、代謝因素、精神因素等,心理因素對此類皮膚病的影響越來越受到重視。建議此類病人除藥物治療外,要保持飲食生活規(guī)律,調(diào)整良好的精神心理狀態(tài)及適應(yīng)能力。中藥制劑可以減少病人因藥物過敏引起的不良反應(yīng),在治療過程中優(yōu)勢明顯。

        本研究從體外抑菌試驗到臨床試用觀察,從基礎(chǔ)研究與臨床研究兩個方面入手,兩方面結(jié)果一致,證實了經(jīng)處方及工藝改進(jìn)后的新制劑復(fù)方參花搽劑對金黃色葡萄球菌、變形桿菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌有明顯的抑菌效果,對濕疹皮炎的治療有效率高、復(fù)發(fā)率低,使用效果優(yōu)良。因時間等原因,臨床采集病例樣本較少,下一步將繼續(xù)觀察復(fù)方參花搽劑的長期臨床效果。

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