陳金圖

福建省泉州市第一醫(yī)院檢驗(yàn)科 福建 泉州 362000

ELISA檢測(cè)乙肝兩對(duì)半的影響因素

陳金圖

福建省泉州市第一醫(yī)院檢驗(yàn)科 福建 泉州 362000

目的:對(duì)Elisa法對(duì)乙肝兩對(duì)半的檢測(cè)產(chǎn)生的影響，做有關(guān)的分析。方法:分析了我院自2013年9月到2014年9月接收的乙肝兩對(duì)半檢測(cè)患者124例，根據(jù)其相關(guān)的資料分析Elisa對(duì)乙肝兩對(duì)半檢測(cè)產(chǎn)生的影響。結(jié)果:得出Elisa法檢測(cè)乙肝兩對(duì)半的影響因素有試劑盒對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響、檢測(cè)人員和采集的標(biāo)本對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響、加樣過程中的影響、藥物的影響等。結(jié)論:對(duì)于乙肝兩對(duì)半的檢測(cè)，采用Elisa法檢測(cè)需要根據(jù)其具體的影響因素，排出對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。

Elisa法乙肝兩對(duì)半影響因素處理方法

Elisa法由于其檢測(cè)方法的特異性比較強(qiáng)，較高的靈敏性，在操作時(shí)世紀(jì)較穩(wěn)定等特點(diǎn)被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)中對(duì)乙肝兩對(duì)半的檢測(cè)當(dāng)中，在現(xiàn)在醫(yī)學(xué)水平發(fā)展比較先進(jìn)的時(shí)代，Elisa法檢測(cè)乙肝兩對(duì)半仍存在許多影響因素，比如實(shí)驗(yàn)環(huán)境的差異，檢測(cè)操作人員的熟練程度以及所用試劑盒的質(zhì)量不同等等，這些因素的存在都對(duì)乙肝兩對(duì)半的檢測(cè)產(chǎn)生了影響，使得得到的檢測(cè)結(jié)果難以分辨出是否是假陽性的可能［1］，以下就對(duì)Elisa法對(duì)乙肝兩對(duì)半檢測(cè)的影響做有關(guān)分析。

1.資料和方法

1.1 一般資料

對(duì)我院2013年9月到2014年9月接收的124例體檢患者進(jìn)行分析，其中男性患者占60例，女性患者占64例，其年齡在22歲到85歲之間，其平均年齡為45.6±11.7歲。

1.2 方法

對(duì)于要檢測(cè)乙肝兩對(duì)半的患者要求需要10小時(shí)的空腹，抽取其肘正中靜脈血3.0毫升，自行凝固后，于專用抗凝管混勻，1h內(nèi)以3000r/min離心10min分離血漿，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)乙肝免疫學(xué)標(biāo)志物，包括表面抗原(HbsAg)、表面抗體(Hb－sAb)、e抗原(HbeAg)、e抗體(HbeAb)、核心抗體(HbcAb)。

2.結(jié)果

該組124例體檢患者當(dāng)中傳染性大三陽占3.4%，雙陽的人數(shù)占9.6%，小三陽的占10.5%，其檢測(cè)結(jié)果如下:

項(xiàng)目 HBsAg(+) HBsAb(+) HBeAg(+) HBeAb(+) HBcAb(+)例數(shù)647 3 2 2陽性率3.5 37.6 2.6 0.9 1.2

采用軟件SPSS 12.0建立數(shù)據(jù)庫進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，通過X2檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)分析，P＜0.05，表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3.討論

對(duì)檢測(cè)結(jié)果分析，使用Elisa法檢測(cè)乙肝兩對(duì)半結(jié)果的因素主要有以下幾種［2－3］:

(1)試劑盒對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響和如何處理。ELISA方法檢測(cè)乙肝兩對(duì)半中，試劑盒質(zhì)量是基本保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，由于商家試劑盒的特異性，靈敏度、穩(wěn)定性和精度等，存在一定的差異，因此，為了避免對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，應(yīng)采取下列方法的影響:工具包應(yīng)該實(shí)驗(yàn)中使用的國家相關(guān)部門檢查產(chǎn)品，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都可以根據(jù)自己的實(shí)際情況，盡量選擇好的靈敏度，特異性強(qiáng)，操作簡單的裝備，和符合質(zhì)量要求的有關(guān)部門，同時(shí)，設(shè)備保存在2℃－8℃的環(huán)境中，并使溫度記錄，測(cè)試時(shí)，應(yīng)該把包放在室溫下，平衡0.5h，以確保一致性和準(zhǔn)確性的反應(yīng)時(shí)間。

(2)檢測(cè)人員和次啊及的標(biāo)本對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響和處理方法。避免檢驗(yàn)人員的影響，提高實(shí)驗(yàn)?zāi)芰?，可以采取以下措?檢查人員做好培訓(xùn)，使檢驗(yàn)人員能掌握ELISA方法，實(shí)驗(yàn)原理的設(shè)備性能，正確應(yīng)用測(cè)量儀器和操作方法，熟悉質(zhì)量控制方法和控制的原則處理。紅細(xì)胞的樣品壞了，并且可以釋放產(chǎn)生的酶活性氧化物干擾物質(zhì)，和一定的顏色反應(yīng)顯色劑，使結(jié)果出現(xiàn)假陰性或假陽性，與此同時(shí)，ELISA方法，管的重復(fù)應(yīng)用，很容易造成交叉污染，產(chǎn)生假陽性結(jié)果。因此，為了避免實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的影響，可以采用以下方法:樣本收集，盡量避免溶血，不要應(yīng)用抗凝劑，特別是肝素抗凝不可用時(shí)，體外是最好的應(yīng)用抗凝一次性真空管，標(biāo)本集后，離心機(jī)，避免纖維蛋白不能完全凍結(jié)，影響結(jié)果。未能實(shí)現(xiàn)相關(guān)的檢驗(yàn)樣本，血液標(biāo)本存儲(chǔ)時(shí)，應(yīng)該盡量保持在8℃溫度2℃的環(huán)境中，時(shí)間不超過1周，1周內(nèi)如果無法檢測(cè)血清分離，它可以存儲(chǔ)在一個(gè)溫度20℃，環(huán)境，節(jié)省時(shí)間1年，冷凍標(biāo)本不能反復(fù)凍融的操作發(fā)生。

(3)加樣過程中的影響和處理方法。精度測(cè)試實(shí)驗(yàn)，吸收數(shù)量和吸嘴清潔與否將直接影響測(cè)試結(jié)果，為了避免樣品的影響過程中，可以采用以下方法:添加使用吸管，嚴(yán)格按照相關(guān)程序來實(shí)現(xiàn)，當(dāng)添加標(biāo)本反應(yīng)孔應(yīng)該吸點(diǎn)與孔壁的反應(yīng)達(dá)到了第三的位置，其他的反應(yīng)孔，不污染放入溫育箱之前，應(yīng)該使用振蕩器加上樣品混合超過0.5分鐘。

(4)藥物的影響和處理方法。乙肝兩對(duì)半試劑的敏感性和特異性，不同的廠商生產(chǎn)有一定差異，數(shù)據(jù)顯示，不同制造商試劑的特異性和敏感性分別為89.4% ～99.3%，78% ～89%存在較大差異。一些制造商酶標(biāo)板孔之間的差異值大于15%;標(biāo)志酶活性和穩(wěn)定性的顏色液體是不好的。使用的試劑不可避免地導(dǎo)致假陽性或假陰性，選擇高質(zhì)量的試劑的關(guān)鍵之一是保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。不同方法的檢測(cè)試劑，可以使兩對(duì)半一些不同的結(jié)果。例如:在ELISA檢測(cè)表面抗原陰性結(jié)果用于實(shí)際工作，和電化學(xué)測(cè)試呈陽性。除了靈敏度的方法，使用單一或多克隆抗體試劑阻力的差異。薄層電阻突變亞型抗原或乙型肝炎標(biāo)志物檢測(cè)的差異，顯示制造商的代理準(zhǔn)備亞型的類型和濃度應(yīng)考慮的問題。

(5)檢測(cè)結(jié)果讀取的影響和處理。測(cè)試結(jié)果判斷通常是在終止液添加10分鐘完成，防止洞結(jié)晶現(xiàn)象，從而影響酶標(biāo)準(zhǔn)儀器進(jìn)行測(cè)試。同時(shí)，為了保證測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確性，操作員應(yīng)該高責(zé)任、試劑的有效性并確保質(zhì)量，如果審查后，異常的結(jié)果，處理樣本集合，然后給評(píng)論，整個(gè)實(shí)驗(yàn)，應(yīng)該添加到外部質(zhì)量控制血清，嚴(yán)格控制質(zhì)量，為所有記錄的詳細(xì)審查。

［1］陳宏安，門自起，汪盈，蔣文娟.用ELISA評(píng)價(jià)膠體金測(cè)試卡檢測(cè)乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物兩對(duì)半的性能［J］.西南軍醫(yī).2009(05)

［2］解殿清，瞿靜.ELISA法乙肝兩對(duì)半定性檢測(cè)影響因素探討［J］.中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用.2010(11)

［3］吳麗娟.溶血標(biāo)本對(duì)ELISA檢測(cè)乙肝表面抗原的影響［J］.赤峰學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版).2012(06)

R446.1

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1009－6019(2014)11－0064－01