王紫燕 張永樂 周強

1蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院檢驗科 江蘇蘇州 215003

2杭州第六人民醫(yī)院檢驗科 浙江杭州 310014

生殖道解脲支原體檢測方法的比較及應(yīng)用

王紫燕1張永樂2周強2

1蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院檢驗科 江蘇蘇州 215003

2杭州第六人民醫(yī)院檢驗科 浙江杭州 310014

目的:分析熒光定量PCR法與液體培養(yǎng)法對生殖道解脲支原體的檢出率及臨床應(yīng)用。方法:收集1299例患者生殖道分泌物標(biāo)本，其中302例標(biāo)本同時采用熒光定量PCR法和液體培養(yǎng)法檢測Uu，997例標(biāo)本僅采用熒光定量PCR法檢測Uu。結(jié)果:熒光定量PCR法和液體培養(yǎng)法同時檢測302例標(biāo)本，PCR法檢出Uu 116例，陽性率為38.41%，液體培養(yǎng)法檢出Uu 81例，陽性率為26.82%，PCR法陽性率顯著高于培養(yǎng)法(X2=9.23，P＜0.05)。結(jié)論:女性感染Uu陽性率較男性要高。Q－PCR法Uu檢出率高于液體培養(yǎng)法，臨床應(yīng)二種方法結(jié)合使用。

生殖道;解脲支原體;熒光定量PCR

解脲支原體(Ureaplasm urealyticum，Uu)是泌尿生殖道非淋菌性炎癥中常見的病原體，在男性易引起非細菌性前列腺炎、非淋菌性尿道炎、男性不育等，在女性易引起尿道及生殖器官感染、不明原因的流產(chǎn)、宮外孕等，也是導(dǎo)致女性不孕不育的病原體之一［1］。目前臨床應(yīng)用最廣泛的檢測方法有熒光定量PCR法(fluorescence quantitative PCR，Q－PCR)和支原體培養(yǎng)法，現(xiàn)就兩種方法學(xué)對Uu的檢出率及臨床應(yīng)用作一分析。

1 資料與方法

1.1 研究對象收集2009年1－10月在杭州第六人民醫(yī)院性保門診就診的1299例患者生殖道分泌物標(biāo)本，其中男801例，平均年齡(27.5± 6.6)歲，女498例，平均年齡(28.4±4.5)歲。

1.2 標(biāo)本采集用無菌棉拭子取男性前尿道1－2cm處分泌物，采集女性分泌物時，在陰道或?qū)m頸內(nèi)旋轉(zhuǎn)并至少停留20秒，以獲得較多細胞。

1.3 方法

1.3.1 熒光定量PCR檢測向無菌棉拭子的標(biāo)本中加1 ml生理鹽水，震蕩混勻數(shù)秒，轉(zhuǎn)入1.5 ml的離心管中，12000 r/min離心5 min，棄上清，在沉淀中加入50 ulDNA裂解液，100℃10min，轉(zhuǎn)入4℃冷卻30min，12000 r/min離心5 min，上清即為PCR反應(yīng)模版。

1.3.2 液體培養(yǎng)法支原體液體培養(yǎng)檢測卡第一排第一孔為陰性對照。將采集的標(biāo)本拭子插入培養(yǎng)瓶擠壓旋轉(zhuǎn)數(shù)次，使拭子中的分泌物混勻在培養(yǎng)液中，在除陰性孔的檢測卡其他孔加入100 ul含標(biāo)本的培養(yǎng)液，再加兩滴石蠟油，蓋上蓋子放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)24－48小時，在48小時后觀察結(jié)果，反應(yīng)孔呈清晰透明紅色為Uu陽性，混濁紅色為污染，黃色或橙黃色為陰性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理采用統(tǒng)計分析用spss17.0統(tǒng)計軟件檢測分析數(shù)據(jù)，陽性率的差異性采用X2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

1、兩種方法學(xué)檢測結(jié)果比較:302例生殖道分泌物標(biāo)本同時采用兩種檢測方法檢測結(jié)果見表1，其中Q－PCR法檢出Uu 116例，陽性率為38.4%，培養(yǎng)法檢出Uu 81例，陽性率為26.8%，Q－PCR法敏感性明顯高于培養(yǎng)法(X2=9.228，P＜0.05)。

表1 Q－PCR法和液體培養(yǎng)法檢測解脲支原體的陽性率差異

3 討論

支原體是一群大小介于細菌與病毒之間，能夠獨立生活的微生物，支原體無細胞壁，呈高度多形性，繁殖方式多樣。Uu是引起人類泌尿生殖道感染的主要病原體之一，目前臨床常用的檢測方法為液體培養(yǎng)法和熒光定量PCR技術(shù)。

液體培養(yǎng)法準(zhǔn)確率高，被人們認為是Uu檢測的"金標(biāo)準(zhǔn)"［2］。同時培養(yǎng)法還能通過藥敏試驗，得出病原體的耐藥性，為臨床醫(yī)生提供可靠治療依據(jù)。但是培養(yǎng)要求條件比較高，從標(biāo)本采集，運送都有較高的要求，同時受是否使用抗生素的影響。當(dāng)標(biāo)本采集過少，運送時間過長時可導(dǎo)致培養(yǎng)失敗，患者正在使用抗生素或停藥時間較短時采集標(biāo)本也可能會出現(xiàn)假陰性。這些條件的存在是致使液體培養(yǎng)法陽性率不高的關(guān)鍵所在。熒光定量PCR技術(shù)是近年興起的技術(shù)，它以靈敏度高、特異性強而受歡迎，但是常規(guī)PCR較易出現(xiàn)產(chǎn)物污染導(dǎo)致假陽性的產(chǎn)生，而熒光定量PCR技術(shù)在密閉的反應(yīng)管中檢測，可杜絕產(chǎn)物污染。雖然熒光定量PCR有較高的靈敏性和特異性，但是PCR技術(shù)不能判斷病原體是否存活，病原體的殘核存在PCR也能檢出。另外，PCR不能進行藥物敏感度的判定。

我們通過實驗證實302例生殖道分泌物標(biāo)本采用液體培養(yǎng)法陽性率為26.8%，而Q－PCR法陽性率為38.4%，Q－PCR法敏感性明顯高于傳統(tǒng)培養(yǎng)法。另外，1299例標(biāo)本Q－PCR總體陽性率為36.6%，這與報道的結(jié)果一致［3］。

綜上所述，在解脲支原體感染的臨床檢測中我們應(yīng)該培養(yǎng)法與熒光定量PCR相結(jié)合，這不僅提高了臨床病原體的檢出率，達到早期檢測避免漏檢現(xiàn)象，同時培養(yǎng)的藥敏結(jié)果也給臨床醫(yī)師提供正確選擇抗生素的有效途徑。

［1］陳春英，楊舒盈，朱根海.女性生殖道感染治療前后解脲支原體熒光定量PCR檢測的假陽性分析［J］.中國優(yōu)生與遺傳雜志，2007，15 (3):32－33.

［2］Misteli T.Protein dynamics:implications for nuclear architecture and gene expression［J］.Science，2001，291(5505):843－847.

［3］張永樂，章松平，馬蘭等.檢測早期梅毒螺旋體感染的4種方法比較［J］.中國皮膚性病學(xué)雜志，2008，22(2):118－119.

R446.1

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1009－6019(2014)10－0166－02