楊青+張健+歐陽(yáng)勝+葉文才+趙守訓(xùn)+殷志琦

[收稿日期] 2013-12-12

[基金項(xiàng)目] 國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81001379）；江蘇省第九批“六大人才高峰”高層次人才項(xiàng)目（2012-YY-008）；天然藥物活性組分與藥效國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目（ZJ11175）；江蘇省“青藍(lán)工程”項(xiàng)目

[通信作者] *殷志琦，副教授，主要研究方向?yàn)樘烊划a(chǎn)物活性成分，Tel：（025）86185371，E-mail：chyzq2005@126.com

[作者簡(jiǎn)介] 楊青，碩士研究生，E-mail：yangqingyqyq@126.com

[摘要] 利用各種現(xiàn)代色譜方法從掌葉梁王茶Nothopanax delavayi莖皮70%乙醇提取物中分離得到11個(gè)化合物，通過(guò)波譜技術(shù)和理化性質(zhì)鑒定它們的結(jié)構(gòu)為三對(duì)節(jié)酸3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖-28-O-β-D-吡喃葡萄糖酯苷（1），三對(duì)節(jié)酸3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖-28-O-α-L-吡喃鼠李糖-（1→4）-β-D-吡喃葡萄糖-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖酯苷（2），三對(duì)節(jié)酸（3），三對(duì)節(jié)酸3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷（4），三對(duì)節(jié)酸3-O-β-（2′，4′-O-二乙酰基）-D-吡喃木糖-28-O-α-L-吡喃鼠李糖-（1→4）-β-D-吡喃葡萄糖-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖酯苷（5），三對(duì)節(jié)酸3-O-α-（4′-O-乙?；?L-吡喃阿拉伯糖-28-O-α-L-吡喃鼠李糖-（1→4）-β-D-吡喃葡萄糖-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖酯苷（6），三對(duì)節(jié)酸3-O-α-（2′-O-乙酰基）-L-吡喃阿拉伯糖-28-O-α-L-吡喃鼠李糖-（1→4）-β-D-吡喃葡萄糖-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖酯苷（7），三對(duì)節(jié)酸3-O-β-D-吡喃木糖-28-O-α-L-吡喃鼠李糖-（1→4）-β-D-吡喃葡萄糖-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖酯苷（8），原兒茶酸（9），咖啡酸乙酯（10），咖啡酸酐（11）。其中化合物3～4，9～11為首次從梁王茶屬植物中分離得到，化合物5～8為首次從該植物中分離得到。

[關(guān)鍵詞] 掌葉梁王茶；三萜皂苷；化學(xué)成分；結(jié)構(gòu)鑒定

梁王茶屬Nothopanax植物約有15種，主要分布于大洋洲，我國(guó)僅有2種，即掌葉梁王茶Nothopanax delavayi （Franch.） Harms ex Diels和異葉梁王茶N. davidii （Franch.） Harms ex Diels。掌葉梁王茶為民間草藥，其莖皮有清熱消炎，生津止瀉之效，主治喉炎，分布于貴州，云南，生于海拔1 600～2 500 m的森林或灌木叢中^[1]。梁王茶新鮮植株有芳香氣味，胡英杰等^[2]對(duì)掌葉梁王茶N. delavayi精油的化學(xué)成分進(jìn)行了研究?，F(xiàn)代藥理研究表明，掌葉梁王茶具有較好的鎮(zhèn)痛作用^[3]。另?yè)?jù)報(bào)道，梁王茶多糖具有顯著的消炎、抗衰老等功效，并且具有雙向免疫調(diào)節(jié)作用，有學(xué)者^[4]對(duì)梁王茶多糖的提取工藝路線及其抗氧化活性進(jìn)行了研究。為深入發(fā)掘掌葉梁王茶化學(xué)成分內(nèi)涵，該文對(duì)掌葉梁王茶開(kāi)展化學(xué)成分研究，從中分離并鑒定了11個(gè)化合物，包括3個(gè)苯環(huán)類和8個(gè)皂苷類化合物，其中化合物3～4，9～11為首次從梁王茶屬植物中分離得到，化合物5～8為首次從該植物中分離得到。

1 材料

熔點(diǎn)用X-4 型熔點(diǎn)測(cè)定儀測(cè)定（溫度計(jì)未校正）；核磁用Bruker Avance-500 和Avance-300 型核磁共振儀測(cè)定；柱色譜硅膠100～200，200～300，300～400目為青島海洋化工廠產(chǎn)品；薄層色譜硅膠 GF254 為煙臺(tái)化工研究所產(chǎn)品；Sephadex LH-20為美國(guó)Pharmacia公司產(chǎn)品；MCI HP-20為日本三菱化學(xué)公司產(chǎn)品；ODS（C-18）為Merk公司產(chǎn)品；Pre-HPLC為Waters公司制備型HPLC系列產(chǎn)品；其他試劑均為分析純。

掌葉梁王茶藥材購(gòu)買(mǎi)于2012年3月，產(chǎn)地為云南，經(jīng)中國(guó)藥科大學(xué)秦民堅(jiān)教授鑒定為掌葉梁王茶N. delavayi的莖皮，標(biāo)本保存于中國(guó)藥科大學(xué)天然藥物化學(xué)教研室。

2 提取與分離

干燥的掌葉梁王茶莖皮20.0 kg，70%乙醇加熱回流提取3次，每次分別為2，2，1.5 h，提取液減壓濃縮至無(wú)醇味，加適量水稀釋后依次用乙酸乙酯，水飽和的正丁醇萃取，分別回收溶劑后得乙酸乙酯部位（230 g）和正丁醇部位（920 g）。

取乙酸乙酯部位浸膏230 g，經(jīng)硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇（100∶0～0∶100）梯度洗脫，每份500 mL，TLC檢識(shí)，合并得到7個(gè)流分（Fr.1～7）。Fr.3經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜以氯仿-甲醇（1∶1）洗脫，反復(fù)重結(jié)晶，得化合物3（25 mg）。Fr.4依次經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜以氯仿-甲醇（1∶1）洗脫，再經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜純甲醇洗脫和制備液相色譜（35%甲醇-水+0.05%TFA）分離純化，得到化合物9（15 mg），11（20 mg）。

取正丁醇部位浸膏700 g經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂柱色譜，依次用水，10%，25%，60%，95%乙醇-水洗脫，其中60%乙醇洗脫部分（220 g）經(jīng)硅膠柱色譜，以氯仿-甲醇-水梯度洗脫（75∶25∶10～70∶30∶10～65∶35∶10～0∶100∶0），TLC檢識(shí)，合并得7個(gè)流分（Fr.1～7）。Fr.1經(jīng)硅膠柱色譜以氯仿-甲醇-水梯度洗脫，合并流分1-3，經(jīng)ODS柱色譜以甲醇-水梯度洗脫，反復(fù)Sephadex LH-20柱色譜以甲醇洗脫純化，得化合物10（5 mg）；合并流分10-19，經(jīng)硅膠柱色譜以氯仿-甲醇（15∶1～1∶1）梯度洗脫，甲醇反復(fù)重結(jié)晶，得化合物4（100 mg）；合并流分23-31，經(jīng)反復(fù)Sephadex LH-20柱色譜以甲醇，甲醇-水純化，反復(fù)ODS柱色譜以甲醇-水梯度洗脫，得化合物1（20 mg）。Fr.3經(jīng)硅膠柱色譜，以氯仿-甲醇-水梯度洗脫和制備液相色譜（56%甲醇-水+0.01%TFA），反復(fù)Sephadex LH-20柱色譜以甲醇洗脫純化，得到化合物5（15 mg），6（15 mg），7（10 mg）。Fr.5經(jīng)硅膠柱色譜氯仿-甲醇-水（65∶35∶10）等度洗脫，合并其中流分26～63，回收溶劑后用適量甲醇完全溶解，加8倍量丙酮靜置，白色沉淀物經(jīng)反復(fù)重結(jié)晶得化合物2（1.0 g）；合并流分64～79，反復(fù)ODS柱色譜以乙腈-水（15∶85～100∶0）梯度洗脫得化合物8（10 mg）。endprint

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物 1 白色粉末（甲醇），mp 220～222 ℃，Liebermann-Burchard和Molish反應(yīng)均陽(yáng)性，香草醛-濃硫酸顯紫紅色。1H-NMR（C₅D₅N，300 MHz） δ：6.32（1H，d，J=7.9 Hz，C28-Glc-H-1），5.48（1H，m，H-12），4.75（1H，d，J=7.0 Hz，C3-Ara-H-1），1.43，1.24，1.24，1.09，0.94，0.86（各3H，s，-Me×6）；13C-NMR（C₅D₅N，75 MHz）數(shù)據(jù)見(jiàn)表1，2。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道的liangwanosideⅠ數(shù)據(jù)一致，故化合物1鑒定為三對(duì)節(jié)酸3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖-28-O-β-D-吡喃葡萄糖酯苷。

化合物2 白色粉末（甲醇），mp 217～222 ℃，Liebermann-Burchard和Molish反應(yīng)均陽(yáng)性，香草醛-濃硫酸顯紫紅色。1H-NMR（C₅D₅N，500 MHz） δ：6.23（1H，d，J=8.1 Hz，C28-Glc-H-1），5.81（1H，br s，C28-Rha-H-1），5.45（1H，m，H-12），4.94（1H，d，J=7.7 Hz，C28-Glc′-H-1），4.73（1H，d，J=6.9 Hz，C3-Ara-H-1），4.52（1H，dd，J=3.1，9.4 Hz，H-3），1.67（3H，d，J=6.2 Hz，C28-Rha-CH₃），1.44，1.22，1.22，1.08，0.94，0.88（各3H，s，-Me×6）；13C-NMR（C₅D₅N，125 MHz）數(shù)據(jù)見(jiàn)表1，2。以上數(shù)

據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道的liangwanoside Ⅱ數(shù)據(jù)一致，故化合物2鑒定為三對(duì)節(jié)酸3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖-28-O-α-L-吡喃鼠李糖-（1→4）-β-D-吡喃葡萄糖-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖酯苷。

化合物3 無(wú)色針晶（甲醇），mp>310 ℃，Liebermann-Burchard反應(yīng)陽(yáng)性，Molish反應(yīng)陰性，香草醛-濃硫酸顯紫紅色。1H-NMR（C₅D₅N，500 MHz） δ：5.45（1H，m，H-12），3.33（1H，dd，J=4.0，11.9 Hz，H-3），1.47，1.17，1.11，0.92，0.90，0.79（各3H，s，-Me×6）；13C-NMR（C₅D₅N，125 MHz）數(shù)據(jù)見(jiàn)表1，2。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6-7]報(bào)道的serratagenic acid數(shù)據(jù)一致，故化合物3鑒定為三對(duì)節(jié)酸。

化合物4 白色粉末（甲醇），mp 250～252 ℃，Liebermann-Burchard和Molish反應(yīng)均陽(yáng)性，香草醛-濃硫酸顯紫紅色。1H-NMR（C₅D₅N，500 MHz） δ：5.52（1H，m，H-12），4.75（1H，d，J=7.0 Hz，C3-Ara-H-1），4.40（1H，dd，J=1.4，7.2 Hz，C3-Ara-H-2），4.30（1H，m，C3-Ara-H-4），4.28（1H，m，C3-Ara-H-5e），4.14（1H，dd，J=3.3，8.8 Hz，C3-Ara-H-3），3.82（1H，dd，J=2.4，12.9 Hz，C3-Ara-H-5a），3.32（1H，dd，J=4.5，11.7 Hz，H-3），1.56，1.28，1.24，0.99，0.93，0.84（各3H，s，Me×6）；13C-NMR（C5D5N，125 MHz）數(shù)據(jù)見(jiàn)表1，2。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6-7]報(bào)道的數(shù)據(jù)一致，故化合物4鑒定為三對(duì)節(jié)酸3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷。

化合物 5 白色粉末（甲醇），mp 215 ～ 217 ℃，Liebermann-Burchard和Molish反應(yīng)均陽(yáng)性，香草醛-濃硫酸顯紫紅色。1H-NMR（C₅D₅N，500 MHz） δ：6.24（1H，d，J=8.2 Hz，C28-Glc-H-1），5.82（1H，br s，C28-Rha-H-1），5.77（1H，m，C3-Xyl-H-2），5.52（1H，m，C3-Xyl-H-4），5.45（1H，m，H-12），4.95（1H，d，J=8.2 Hz，C28-Glc′-H-1），4.71（1H，d，J=7.9 Hz，C3-Xyl-H-1），3.17（1H，dd，J=4.0，11.9 Hz，H-3），2.09（3H，s，CH₃CO），1.79（3H，s，CH3CO），1.68（3H，d，J=6.2 Hz，C28-Rha-CH3），1.44，1.22，1.07，1.06，0.89，0.83（各3H，s，-Me×6）；13C-NMR（C₅D₅N，125 MHz）數(shù)據(jù)見(jiàn)表1，2。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道的yiyeliangwanoside Ⅶ 數(shù)據(jù)一致，故化合物5為三對(duì)節(jié)酸3-O-β-（2′，4′-O-二乙?；?D-吡喃木糖-28-O-α-L-吡喃鼠李糖-（1→4）-β-D-吡喃葡萄糖-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖酯苷。

化合物 6 白色粉末（甲醇），mp 228～230 ℃，Liebermann-Burchard和Molish反應(yīng)均陽(yáng)性，香草醛-濃硫酸顯紫紅色。1H-NMR（C₅D₅N，500 MHz） δ：6.24（1H，d，J=8.4 Hz，C28-Glc-H-1），5.81（1H，br s，C28-Rha-H-1），5.45（1H，m，H-12），4.95（1H，d，J=7.9 Hz，C28-Glc′-H-1），4.74（1H，d，J=6.7 Hz，C3-Ara-H-1），3.21（1H，dd，J=3.8，13.5 Hz，H-3），1.96（3H，s，CH₃CO），1.68（3H，d，J=6.2 Hz，C28-Rha-CH3），1.44，1.27，1.23，1.08，0.94，0.88（各3H，s，-Me×6）；13C-NMR（C₅D₅N，125 MHz）數(shù)據(jù)見(jiàn)表1，2。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道的yiyeliangwanosideⅨ 數(shù)據(jù)一致，故化合物6為三對(duì)節(jié)酸3-O-α-（4′-O-乙酰基）-L-吡喃阿拉伯糖-28-O-α-L-吡喃鼠李糖-（1→4）-β-D-吡喃葡萄糖-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖酯苷。endprint

化合物 7 白色粉末（甲醇），mp 210～212 ℃，Liebermann-Burchard和Molish反應(yīng)均陽(yáng)性，香草醛-濃硫酸顯紫紅色。1H-NMR（C₅D₅N，500 MHz） δ：6.25（1H，d，J=8.1 Hz，C28-Glc-H-1），5.83（1H，br s，C28-Rha-H-1），5.46（1H，m，H-12），4.97（1H，d，J=8.0 Hz，C28-Glc′-H-1），4.70（1H，d，J=7.7 Hz，C3-Ara-H-1），3.18（1H，dd，J=4.1，11.5 Hz，H-3），2.10（3H，s，CH₃CO），1.69（3H，d，J=6.2 Hz，C28-Rha-CH3），1.46，1.24，1.09，1.07，0.89，0.85（各3H，s，-Me×6）；13C-NMR（C₅D₅N，125 MHz）數(shù)據(jù)見(jiàn)表1，2。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道的yiyeliangwanosideⅩ數(shù)據(jù)一致，故化合物7為三對(duì)節(jié)酸3-O-α-（2′-O-乙?；?L-吡喃阿拉伯糖-28-O-α-L-吡喃鼠李糖-（1→4）-β-D-吡喃葡萄糖-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖酯苷。

化合物 8 白色粉末（甲醇），mp 219 ～ 224 ℃，Liebermann-Burchard和Molish反應(yīng)均陽(yáng)性，香草醛-濃硫酸顯紫紅色。1H-NMR（C₅D₅N，500 MHz） δ：6.20（1H，d，J=8.1 Hz，C28-Glc-H-1），5.76（1H，br s，C28-Rha-H-1），5.46（1H，m，H-12），4.96（1H，d，J=7.8 Hz，C28-Glc′-H-1），4.89（1H，d，J=7.7 Hz，C3-Xyl-H-1），3.37（1H，dd，J=4.2，11.5 Hz，H-3），1.66（3H，d，J=6.2 Hz，C28-Rha-CH₃），1.44，1.28，1.25，1.07，1.00，0.87（各3H，s，-Me×6）；13C-NMR（C₅D₅N，125 MHz）數(shù)據(jù)見(jiàn)表1，2。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道的yiyeliangwanoside Ⅺ 數(shù)據(jù)一致，故化合物8鑒定為三對(duì)節(jié)酸3-O-β-D-吡喃木糖-28-O-α-L-吡喃鼠李糖-（1→4）-β-D-吡喃葡萄糖-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖酯苷。

化合物 9 白色針晶（甲醇），mp 198 ～ 200 ℃，易溶于甲醇，香草醛-濃硫酸不顯色。1H-NMR（CD₃OD，500 MHz） δ：7.43（1H，br s，H-2），7.42（1H，d，J=8.1 Hz，H-6），6.79（1H，d，J=8.1 Hz，H-5）；13C-NMR（CD₃OD，125 MHz） δ：170.2（-COOH），151.4（C-4），146.0（C-3），123.8（C-6），123.1（C-1），117.7（C-2），115.7（C-5）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道的數(shù)據(jù)一致，故化合物9鑒定為原兒茶酸（protocatechuic acid），即3，4-二羥基苯甲酸。

化合物 10 白色結(jié)晶（甲醇），mp 145 ～ 147 ℃，易溶于甲醇；香草醛-濃硫酸不顯色，紫外254 nm下有強(qiáng)烈暗斑，365 nm下有藍(lán)色熒光，F(xiàn)eCl3-EtOH成陽(yáng)性反應(yīng)。1H-NMR（CD₃OD，300 MHz） δ：7.53（1H，d，J=15.9 Hz，H-3），7.03（1H，d，J=2.0 Hz，H-5），6.94（1H，dd，J=2.0，8.2 Hz，H-9），6.79（1H，d，J=8.2 Hz，H-8），6.24（1H，d，J=15.9 Hz，H-2），4.21（1H，q，J=7.1 Hz，-OCH₂），1.30（1H，t，J=7.1 Hz，-CH₃）；13C-NMR（CD₃OD，75 MHz） δ：168.6（C-1），148.8（C-4′），146.1（C-3），146.0（C-3′），127.0（C-1′），122.2（C-6′），115.8（C-5′），114.6（C-2′），114.4（C-2），60.7（-OCH2-），13.9（-CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10-11]報(bào)道的數(shù)據(jù)一致，故化合物10鑒定為咖啡酸乙酯（ethyl caffeate）。

化合物11 黃色方晶（甲醇），mp 176～179 ℃，易溶于甲醇；香草醛-濃硫酸不顯色，紫外254 nm下有強(qiáng)烈暗斑，365 nm下有藍(lán)色熒光，F(xiàn)eCl3-EtOH成陽(yáng)性反應(yīng)。1H-NMR（CD₃OD，300 MHz） δ：7.48（2H，d，J=15.9 Hz，H-7，H-7′），6.98（2H，d，J=1.9 Hz，H-2，H-2′），6.87（2H，dd，J=1.9，8.2 Hz，H-6，H-6′），6.72（2H，d，J=8.2 Hz，H-5，H-5′），6.16（2H，d，J=15.9 Hz，H-8，H-8′）；13C-NMR（CD₃OD，75 MHz） δ：170.3（C-9，C-9′），148.7（C-4，C-4′），146.3（C-7，C-7′），146.0（C-3，C-3′），127.1（C-1，C-1′），122.1（C-6，C-6′），115.8（C-5，C-5′），114.8（C-2，C-2′），114.4（C-8，C-8′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12-13]報(bào)道的數(shù)據(jù)一致，故化合物11鑒定為咖啡酸酐（caffeic anhydride），即（2E）-3-（3，4-二羥基苯基）-丙-2-烯酸酐。endprint

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