陳美惠，劉文雅，李 黎

風柜斗草又名肉穗草、風鼓斗草，來源于野牡丹科植物肉穗草屬楮頭紅(Sarcopyramis nepalensis Wall)的全草，主要分布于我國福建、廣東、臺灣等地［1］，其性平、味甘，具有涼熱解毒、涼血利水、去肝火、清肺熱的功效，用于急性肝炎、肺熱咳嗽、風濕痹痛、耳鳴耳聾及目霧羞明等治療［2］。現(xiàn)代藥理研究表明，風柜斗草全草含黃酮類成分［3］，其提取物具有清除自由基、抗小鼠肝脂質(zhì)過氧化、抗小鼠肝損傷及抑菌作用［4-5］。向天盞(Scutellaria indica L.)又名韓信草、大力草、耳挖草［《生草藥性備要》］、金茶匙［《本草求原》］、順經(jīng)草(貴州)、大葉半枝蓮(廣西)、虎咬癀(福建)，為唇形科植物向天盞的全草，入藥首見于《生草藥性備要》。原植物為多年生草本，主要分布于江南各省區(qū)，北達河南及陜西，其味辛、微苦、性涼，歸肺、肝經(jīng)，藥材地上部分含有黃酮類成分［6］。本實驗以總黃酮含量為指標，通過單因素試驗比較水煎法、回流法和滲漉法對復方風柜斗草中有效成分含量的影響，篩選最佳提取方法，并通過正交試驗優(yōu)選該制劑的提取工藝。

1 材料與儀器

1.1 材料 風柜斗草(福建南靖，批號1207270)，向天盞(福建南靖，批號130901)，以上兩藥購于福建省漳州片仔癀國藥堂醫(yī)藥連鎖有限公司;蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號10080-200707)、槲皮素對照品(南京景竹生物科技有限公司，批號100080-200809)，均購于中國藥品生物制品檢定所;95%乙醇、正丁醇、甲醇、硝酸鋁、氫氧化鈉等試劑均為分析純級。

1.2 儀器 電子天平FA2004N(上海精密科學儀器有限公司)，紫外分光光度計(棱光)UN754N(上海精密科學儀器有限公司)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀GG17(上海申生科技有限公司)。

2 方法

2.1 化學成分的確定 文獻報道風柜斗草和向天盞均有黃酮類成分，經(jīng)薄層層析試驗也證明確有黃酮類成分。風柜斗草、向天盞及兩者混合物分別用70%乙醇提取，提取液加熱回收乙醇，濃縮液加適量水用正丁醇萃取，正丁醇液揮去溶劑，殘渣甲醇溶解供點樣用。以蘆丁、槲皮素作對照，用硅膠CMCNa板，正丁醇-醋酸-水(4∶1∶1)為展開劑，UV365nm 紫外燈下顯黃色螢光斑點，樣品中有與對照品相應(yīng)的斑點，見圖1。

圖1 薄層層析圖譜

2.2 提取方法的確定 根據(jù)處方比例稱取風柜斗草和向天盞藥材粗粉混合均勻分為三份，分別用水煎法、回流法和滲漉法提取，并測定總黃酮含量。

2.2.1 水煎法 藥材加水煎煮2次，每次2 h，水煎液濃縮至藥液比為1∶1時，加2倍量乙醇攪拌放置過夜，濾過，濾液回收乙醇，濃縮液加適量水用正丁醇萃取，萃取液回收溶劑，殘渣用60%乙醇溶解制成供試液。

2.2.2 回流法 藥材以70%乙醇為溶劑，回流提取2次，每次2 h，提取液合并，回收乙醇，濃縮液同2.2.1法用正丁醇萃取，制備供試液。

2.2.3 滲漉法 藥材以70%乙醇為溶劑，用滲漉法提取，收集提取液為藥材的18倍量，回收乙醇濃縮液同2.2.1法用正丁醇萃取，制備供試液。

2.2.4 總黃酮測定 精密稱取干燥的蘆丁對照品5 mg于10 mL量瓶中，用60%的乙醇溶解，定容至刻度，搖勻，制成0.5 mg/mL的蘆丁對照液。精取對照液和供試液各2 mL，置25 mL容量瓶中，各加水6 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加10%硝酸鋁溶液1 mL搖勻，放置6 min，加4%氫氧化鈉試液10 mL搖勻，加水至刻度，放置15 min，以相應(yīng)試劑作空白，500 nm波長處測定吸光度。

2.3 提取方法的優(yōu)化［7-8］對滲漉法提取條件進行優(yōu)化，選擇最佳工藝，采用四因素三水平的正交試驗法設(shè)計，四因素分別是乙醇的濃度、藥材的粗細度、滲漉法的流速和接收液的量，各設(shè)三個水平見表1。試驗分9組，按L9(34)正交設(shè)計表條件進行9次滲漉法提取，每組按照2∶1投料，取風柜斗草10 g、向天盞20 g，各組提取液，分別回收乙醇，濃縮液加適量水，用正丁醇萃取，萃取液回收溶劑，殘渣用60%乙醇溶解并定容至100 mL，取2 mL按2.2.4法測定總黃酮含量。

表1 正交試驗因素水平表

2.4 數(shù)據(jù)處理方法 以正交試驗的方差分析表分析所得數(shù)據(jù)。

3 結(jié)果

3.1 不同提取方法對有效成分回收率的影響 水煎法、回流法、滲漉法考察不同提取方法測得復方風柜斗草中總黃酮成分的回收率分別是2.04%、2.68%、3.44%。

3.2 滲漉法提取工藝正交試驗結(jié)果 見表2、表3。

表2 正交試驗結(jié)果

表3 總黃酮正交試驗方差分析表

4 討論

通過水煎法、回流法、滲漉法考察不同提取方法對復方風柜斗草中總黃酮成分回收率的影響，結(jié)果表明以滲漉法的回收率較高，故選用此法。滲漉法提取屬于動態(tài)浸出方法，有效成分浸出完全，溶劑利用率高，適用于貴重藥材、毒性藥材的提取。與水煎法、回流法提取相比，滲漉法提取不需要加熱，可以有效地防止加熱過程對活性成分的破壞［9-10］。

采用四因素三水平的正交試驗法對滲漉法提取條件進行優(yōu)化，從表2、表3可知，影響總黃酮提取因素的大小順序為藥材粗細度＞接收滲漉液量＞滲漉液流速＞乙醇濃度。其中，藥材粗細度對提取工藝的影響差異顯著，最佳滲漉提取工藝為A2B3C3D3，即用 70%乙醇、細粉、流速 4.5 mL/min，接收18倍滲漉液體積為最佳滲漉提取條件。此法合理、可行，可為提取復方風柜斗草的有效成分提供參考。

［1］盧 偉，曾櫓煒.楮頭紅的性狀及顯微鑒別［J］.福建中醫(yī)學院學報，2008，18(5):36-38.

［2］陳桂菲，葉淑玲.風柜斗草藥用探討［J］.時珍國醫(yī)國藥，2000，11(2):129-130.

［3］吳水華，陳文娟.風柜斗草中總黃酮超聲提取工藝的研究［J］.海峽藥學雜志，2010，22(6):32-33.

［4］李清祿，陳 強，何海斌，等.楮頭紅提取物的生物活性研究［J］.中國藥學雜志，2007，42(17):1292-1295.

［5］萬春鵬，鄭 嘯，陳海峰，等.東方肉穗草黃酮類化學成分研究［J］.中國中藥雜志，2009，34(2):172-174.

［6］宋立人，洪 恂，丁緒亮，等.現(xiàn)代中藥學大辭典上冊［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2001:867.

［7］謝彥兵，肖紅兵.正交設(shè)計法對大豆中提取異黃酮的工藝研究［J］.東南國防醫(yī)藥，2011，13(1):54-56.

［8］陳 艷，許 茜，許景峰，等.正交設(shè)計優(yōu)化姜香臍貼中木香醇提工藝［J］.東南國防醫(yī)藥，2010，12(1):39-41.

［9］秦 婷，李 平，郭金甲，等.正交試驗法優(yōu)選馬錢子滲漉提取工藝［J］.中國實驗方劑學雜志，2013，19(22):44-46.

［10］劉紹華，覃青云，方 堃，等.滲漉法提取兩面針活性成分工藝的研究［J］.中草藥，2006，37(3):373-375.