陳美惠，劉文雅，李 黎

風(fēng)柜斗草又名肉穗草、風(fēng)鼓斗草，來源于野牡丹科植物肉穗草屬楮頭紅(Sarcopyramis nepalensis Wall)的全草，主要分布于我國(guó)福建、廣東、臺(tái)灣等地［1］，其性平、味甘，具有涼熱解毒、涼血利水、去肝火、清肺熱的功效，用于急性肝炎、肺熱咳嗽、風(fēng)濕痹痛、耳鳴耳聾及目霧羞明等治療［2］。現(xiàn)代藥理研究表明，風(fēng)柜斗草全草含黃酮類成分［3］，其提取物具有清除自由基、抗小鼠肝脂質(zhì)過氧化、抗小鼠肝損傷及抑菌作用［4-5］。向天盞(Scutellaria indica L.)又名韓信草、大力草、耳挖草［《生草藥性備要》］、金茶匙［《本草求原》］、順經(jīng)草(貴州)、大葉半枝蓮(廣西)、虎咬癀(福建)，為唇形科植物向天盞的全草，入藥首見于《生草藥性備要》。原植物為多年生草本，主要分布于江南各省區(qū)，北達(dá)河南及陜西，其味辛、微苦、性涼，歸肺、肝經(jīng)，藥材地上部分含有黃酮類成分［6］。本實(shí)驗(yàn)以總黃酮含量為指標(biāo)，通過單因素試驗(yàn)比較水煎法、回流法和滲漉法對(duì)復(fù)方風(fēng)柜斗草中有效成分含量的影響，篩選最佳提取方法，并通過正交試驗(yàn)優(yōu)選該制劑的提取工藝。

1 材料與儀器

1.1 材料 風(fēng)柜斗草(福建南靖，批號(hào)1207270)，向天盞(福建南靖，批號(hào)130901)，以上兩藥購(gòu)于福建省漳州片仔癀國(guó)藥堂醫(yī)藥連鎖有限公司;蘆丁對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)10080-200707)、槲皮素對(duì)照品(南京景竹生物科技有限公司，批號(hào)100080-200809)，均購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所;95%乙醇、正丁醇、甲醇、硝酸鋁、氫氧化鈉等試劑均為分析純級(jí)。

1.2 儀器 電子天平FA2004N(上海精密科學(xué)儀器有限公司)，紫外分光光度計(jì)(棱光)UN754N(上海精密科學(xué)儀器有限公司)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀GG17(上海申生科技有限公司)。

2 方法

2.1 化學(xué)成分的確定 文獻(xiàn)報(bào)道風(fēng)柜斗草和向天盞均有黃酮類成分，經(jīng)薄層層析試驗(yàn)也證明確有黃酮類成分。風(fēng)柜斗草、向天盞及兩者混合物分別用70%乙醇提取，提取液加熱回收乙醇，濃縮液加適量水用正丁醇萃取，正丁醇液揮去溶劑，殘?jiān)状既芙夤c(diǎn)樣用。以蘆丁、槲皮素作對(duì)照，用硅膠CMCNa板，正丁醇-醋酸-水(4∶1∶1)為展開劑，UV365nm 紫外燈下顯黃色螢光斑點(diǎn)，樣品中有與對(duì)照品相應(yīng)的斑點(diǎn)，見圖1。

圖1 薄層層析圖譜

2.2 提取方法的確定 根據(jù)處方比例稱取風(fēng)柜斗草和向天盞藥材粗粉混合均勻分為三份，分別用水煎法、回流法和滲漉法提取，并測(cè)定總黃酮含量。

2.2.1 水煎法 藥材加水煎煮2次，每次2 h，水煎液濃縮至藥液比為1∶1時(shí)，加2倍量乙醇攪拌放置過夜，濾過，濾液回收乙醇，濃縮液加適量水用正丁醇萃取，萃取液回收溶劑，殘?jiān)?0%乙醇溶解制成供試液。

2.2.2 回流法 藥材以70%乙醇為溶劑，回流提取2次，每次2 h，提取液合并，回收乙醇，濃縮液同2.2.1法用正丁醇萃取，制備供試液。

2.2.3 滲漉法 藥材以70%乙醇為溶劑，用滲漉法提取，收集提取液為藥材的18倍量，回收乙醇濃縮液同2.2.1法用正丁醇萃取，制備供試液。

2.2.4 總黃酮測(cè)定 精密稱取干燥的蘆丁對(duì)照品5 mg于10 mL量瓶中，用60%的乙醇溶解，定容至刻度，搖勻，制成0.5 mg/mL的蘆丁對(duì)照液。精取對(duì)照液和供試液各2 mL，置25 mL容量瓶中，各加水6 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加10%硝酸鋁溶液1 mL搖勻，放置6 min，加4%氫氧化鈉試液10 mL搖勻，加水至刻度，放置15 min，以相應(yīng)試劑作空白，500 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。

2.3 提取方法的優(yōu)化［7-8］對(duì)滲漉法提取條件進(jìn)行優(yōu)化，選擇最佳工藝，采用四因素三水平的正交試驗(yàn)法設(shè)計(jì)，四因素分別是乙醇的濃度、藥材的粗細(xì)度、滲漉法的流速和接收液的量，各設(shè)三個(gè)水平見表1。試驗(yàn)分9組，按L9(34)正交設(shè)計(jì)表?xiàng)l件進(jìn)行9次滲漉法提取，每組按照2∶1投料，取風(fēng)柜斗草10 g、向天盞20 g，各組提取液，分別回收乙醇，濃縮液加適量水，用正丁醇萃取，萃取液回收溶劑，殘?jiān)?0%乙醇溶解并定容至100 mL，取2 mL按2.2.4法測(cè)定總黃酮含量。

表1 正交試驗(yàn)因素水平表

2.4 數(shù)據(jù)處理方法 以正交試驗(yàn)的方差分析表分析所得數(shù)據(jù)。

3 結(jié)果

3.1 不同提取方法對(duì)有效成分回收率的影響 水煎法、回流法、滲漉法考察不同提取方法測(cè)得復(fù)方風(fēng)柜斗草中總黃酮成分的回收率分別是2.04%、2.68%、3.44%。

3.2 滲漉法提取工藝正交試驗(yàn)結(jié)果 見表2、表3。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 總黃酮正交試驗(yàn)方差分析表

4 討論

通過水煎法、回流法、滲漉法考察不同提取方法對(duì)復(fù)方風(fēng)柜斗草中總黃酮成分回收率的影響，結(jié)果表明以滲漉法的回收率較高，故選用此法。滲漉法提取屬于動(dòng)態(tài)浸出方法，有效成分浸出完全，溶劑利用率高，適用于貴重藥材、毒性藥材的提取。與水煎法、回流法提取相比，滲漉法提取不需要加熱，可以有效地防止加熱過程對(duì)活性成分的破壞［9-10］。

采用四因素三水平的正交試驗(yàn)法對(duì)滲漉法提取條件進(jìn)行優(yōu)化，從表2、表3可知，影響總黃酮提取因素的大小順序?yàn)樗幉拇旨?xì)度＞接收滲漉液量＞滲漉液流速＞乙醇濃度。其中，藥材粗細(xì)度對(duì)提取工藝的影響差異顯著，最佳滲漉提取工藝為A2B3C3D3，即用 70%乙醇、細(xì)粉、流速 4.5 mL/min，接收18倍滲漉液體積為最佳滲漉提取條件。此法合理、可行，可為提取復(fù)方風(fēng)柜斗草的有效成分提供參考。

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