婁宏君，高曦，張燕麗，徐英杰，邢凌昊，張新

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，哈爾濱 150040）

脊痛消膠囊對神經(jīng)根型頸椎病模型大鼠脊髓組織白細(xì)胞介素-1β、白細(xì)胞介素-6及組胺的影響

婁宏君，高曦，張燕麗，徐英杰，邢凌昊，張新

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，哈爾濱 150040）

目的研究脊痛消膠囊對神經(jīng)根型頸椎病模型大鼠脊髓組織白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）及組胺（HA）的影響。方法通過手術(shù)植入異物使神經(jīng)根受到卡壓的方式建立神經(jīng)根型頸椎病大鼠模型，將大鼠隨機分成脊痛消膠囊組（中藥組）、布洛芬緩釋對照組（西藥組）、模型組，空白對照組，為排除手術(shù)創(chuàng)傷所致疼痛對實驗結(jié)果的影響加設(shè)假手術(shù)組。于造模3 d后中藥組和西藥組分別給予不同配比的脊痛消膠囊和布洛芬混懸液灌胃；空白組、假手術(shù)組及模型對照組每日給予等量0.9%氯化鈉注射溶液灌胃。觀測給藥后第7天和第14天分批處死實驗大鼠取C5至T1脊髓組織，采用酶聯(lián)免疫法檢測IL-1β、IL-6、HA表達(dá)量。結(jié)果給藥后第7、14天模型組大鼠脊髓組織IL-1β、IL-6、HA含量明顯升高，與空白對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，而中藥組大鼠上述物質(zhì)的表達(dá)量與模型組比較相對較少，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論脊痛消膠囊能有效降低神經(jīng)根型頸椎病模型大鼠脊髓組織中IL-1β、IL-6及HA的含量。

頸椎??；白細(xì)胞介素-1β；白細(xì)胞介素-6；組胺；大鼠，Wistar

神經(jīng)根型頸椎病是臨床的常見病，多發(fā)?。?-2］。中醫(yī)藥治療該病有著確切的療效中藥在頸椎病的防治方面具有療效肯定、毒副作用小、可長期服用等特點，在治療本病上具有西藥不可代替的優(yōu)勢［3-6］。脊痛消膠囊由鄧福樹教授根據(jù)多年臨床經(jīng)驗，以清代王清任《醫(yī)林改錯》中的“補陽還五湯”加減而成，該方在臨床應(yīng)用明顯緩解頸椎病疼痛癥狀，具有鎮(zhèn)痛效果好、起效快等特點，能夠很好地改善臨床癥狀和體征，尤其對神經(jīng)根型頸椎病療效確切。為了探明該藥物的對神經(jīng)根型頸椎病模型大鼠脊髓組織IL-1、IL-6及HA的影響行實驗研究，先將研究結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 選取清潔雄性Wistar大鼠110只，體質(zhì)量（200±10）g，該大鼠由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心提供（許可證號：SCXK黑2013-004）。

1.2 藥品試劑 脊痛消膠囊（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院制劑室）；布洛芬緩釋膠囊（中美天津史克制藥有限公司）；硫酸慶大霉素注射液（天津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司）；大鼠組胺（HA）ELISA檢測試劑盒（上海研吉生物科技有限公司）；大鼠白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）ELISA檢測試劑盒（廈門慧嘉生物科技有限公司）；大鼠白細(xì)胞介素-6（IL-6）ELISA檢測試劑盒（廈門慧嘉生物科技有限公司）。

1.3 造模方法 將所有動物馴養(yǎng)1周后，隨機分成3組：空白對照組（16只）、假手術(shù)組（16只）、造模組（74只）。10%水合氯醛（4mL／kg體質(zhì)量）大鼠腹腔注射，麻醉后固定俯臥位，剪毛，常規(guī)消毒，以第2胸椎棘突為標(biāo)志，以C7為中心，延棘突縱形切開皮膚及皮下組織，長約3 cm，鈍性分離棘突左側(cè)肌肉，暴露棘突及椎板。用蚊式鉗輕輕鉗去C7左側(cè)椎板，暴露硬脊膜，用眼科神經(jīng)剝離子將脊髓輕推至右側(cè)，再用顯微外科鑷夾取長約1.5 cm魚線輕輕沿脊髓縱軸放至C5至T1神經(jīng)根腋下。假手術(shù)組動物僅切開皮膚、皮下組織，鈍性分離棘突旁肌肉，鉗去C7左側(cè)椎板，不插線，而后縫合，術(shù)后每只動物給予硫酸慶大霉素注射液0.4 mL／只，連續(xù)3 d，預(yù)防其傷口感染；空白組不做任何處理。

1.4 試驗方法 3 d后造模組隨機分成3組：脊痛消膠囊組（中藥組）、布洛芬緩釋組（西藥組）及模型組。所有實驗動物于造模后第4天開始給藥（藥物給予均按人與大鼠體表面積換算公式計算）。中藥組：每日給予脊痛消膠囊405 mg／kg，溶于0.9%氯化鈉注射溶液配成27 mg／mL混懸液，按15 mL／kg灌胃。西藥組：每日給予布洛芬緩釋54 mg／kg，溶于0.9%氯化鈉注射溶液配成3.6 mg／mL混懸液，按15 mL／kg灌胃?？瞻讓φ战M假手術(shù)組及模型組：每日給予0.9%氯化鈉注射溶液15mL／kg灌胃。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 運用SPSS17.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，兩組之間的比較運用配對t檢驗，多個均數(shù)之間比較應(yīng)用S-N-K檢驗，組間比較采用One-Way ANOVA分析方法統(tǒng)計。

2 指標(biāo)及結(jié)果

2.1 觀察指標(biāo) 于灌胃后第7天和第14天各組大鼠隨機取8只，10%水合氯醛4 mL／kg體質(zhì)量腹腔注射麻醉，4℃0.9%氯化鈉注射溶液灌注，取C5至T1脊髓及神經(jīng)根組織，稱重，冰水內(nèi)組織勻漿器勻漿，制成20%組織勻漿液，4℃冰箱保存，待測IL-1β、IL-6及HA。

2.2 大鼠脊髓組織IL-1β檢測結(jié)果 給藥后第7、14天，模型組大鼠脊髓組織IL-1β含量與空白對照組及假手術(shù)組相比明顯升高（P＜0.01）；中藥組大鼠脊髓組織IL-1β含量在上述兩個時間點均明顯低于模型組，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），與空白對照組及假手術(shù)組比較亦差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；中藥組與西藥組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

2.3 大鼠脊髓組織IL-6檢測結(jié)果 給藥后第7、14天，模型組大鼠脊髓組織IL-6含量明顯高于空白對照組及假手術(shù)組（P＜0.01）；第7、14天中藥組大鼠脊髓組織IL-6含量明顯低于模型組，與之比較均差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），第14天與空白對照組及假手術(shù)組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；中藥組與西藥組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

2.4 大鼠脊髓組織HA檢測結(jié)果 給藥后第7、14天，模型組大鼠脊髓組織HA含量明顯高于同空白對照組及假手術(shù)組（P＜0.01）；第7、14天脊痛消膠囊組大鼠脊髓組織HA含量明顯低于模型組，與之比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），第14天與空白對照組及假手術(shù)組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；中藥組與西藥組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 各組大鼠脊髓組織的IL-1β、IL-6、HA檢測結(jié)果分析（±s）

表1 各組大鼠脊髓組織的IL-1β、IL-6、HA檢測結(jié)果分析（±s）

注：與空白組比較，aP＜0.05，cP＜0.01；與假手術(shù)組比較，eP＜0.01，dP＜0.05；與模型組比較，bP＜0.01

組別 鼠數(shù)（只）IL-1β（ng／L）7 d 14 d IL-6（ng／L）7 d 14 d HA（μg／L）7 d 14 d空白組 8 237.57±41.41 240.00±67.22 98.42±19.61 105.28±25.56 3.01±0.83 3.31±0.63假手術(shù)組 8 268.28±74.41 244.85±65.36 125.00±24.85 107.14±19.89 3.71±0.60 3.37±0.59中藥組 8 330.14±67.66ab341.42±69.63abd160.85±47.59ab157.85±41.10b4.79±0.92ab4.68±1.63b西藥組 8 350.14±71.03bcd361.85±63.74bce172.57±40.98bc169.14±27.81ab4.44±1.77b5.10±1.56abd模型組 8 502.00±94.18ce545.57±114.77ce367.28±86.53ce405.01±114.32ce7.86±1.97ce8.23±2.67ce

3 討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究［7-15］認(rèn)為IL-1β是一種細(xì)胞因子，由于其功能的多樣性，又被稱為內(nèi)源性熱原質(zhì)。IL-1β是一種強有力的致痛物質(zhì)，IL-1β作用于產(chǎn)生其本身的細(xì)胞或臨近細(xì)胞，多在局部發(fā)揮作用，但在一定的條件下，可以通過內(nèi)分泌的方式作用于遠(yuǎn)處的靶細(xì)胞，介導(dǎo)全身反應(yīng)。它不僅能協(xié)同其他細(xì)胞因子促進(jìn)B、T細(xì)胞活化，而且能誘導(dǎo)其他炎性產(chǎn)物的生成，加強白細(xì)胞對血管內(nèi)皮的粘附等。IL-6是細(xì)胞因子家族中的重要成員，她是一種多功能的、作用廣泛的細(xì)胞因子，IL-6廣泛參與炎性反應(yīng)，是一種非常重要的炎癥因子IL-6是一種多功能蛋白，可通過自分泌和旁分泌而作用于組織細(xì)胞，刺激細(xì)胞生長，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)增生，參與炎性反應(yīng)等過程。組胺（HA）是自體活性物質(zhì)之一，在體內(nèi)由組氨酸脫羧基而成，肥大細(xì)胞是變態(tài)反應(yīng)的關(guān)鍵性細(xì)胞，也是先天免疫過程中重要的起始細(xì)胞。實驗證明脊痛消膠囊對神經(jīng)根型頸椎病模型大鼠的作用機制可能是通過方中以黃芪、當(dāng)歸等藥物的活血化瘀、清熱利尿功能，減少肥大細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及單核巨噬細(xì)胞的浸潤，降低IL-1β、IL-6等前炎癥因子的產(chǎn)生，控制局部炎癥的發(fā)生和發(fā)展。

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R681.531

A

10.3969／J.issn.1672-6790.2014.06.020

2014-03-26）

黑龍江省博士后科研啟動金（LBH-Q12008）

婁宏君，主管檢驗師，Email：LHJ-HZY＠163.com

高曦，博士，博士后，副主任醫(yī)師，副教授，碩士生導(dǎo)師，Email：13845082037＠139.com