黎曉玲 彭瑞光

摘要[目的]采用 HPLC建立同時(shí)測(cè)定梔子金花丸中黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素這4種成分含量的分析方法

關(guān)鍵詞梔子金花丸；HPLC；黃芩苷；漢黃芩苷；黃芩素；漢黃芩素

中圖分類(lèi)號(hào)S567文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2014）06-01605-02

Abstract[Objective] To establish a method for the simultaneous determination of Baicalin， Wogonoside， Baicalein and Wogonin in Zhizijinhua Pill using HPLC. [Method] The separation was carried out on a Agilent Zorbax SB-C_（18）（4.6 mm×250 mm， 5μm）. The mobile phase was methanol-0.1% phosphoric acid with gradient elution and 278nm wavelength detection. [Result] The Baicalin， Wogonoside， Baicalein， Wogonin had good linearity in the ranges of 0.418-4.18 μg/ml（R=0.999 8）， 0.2-2 μg/ml（R=0.999 8）， 0.233-2330 μg/ml（R=0.999 9） and 0.215-2.150 μg/ml（R=0.999 9）. The average recoveries were 98.40%（RSD=0.45%）， 98.66%（RSD=141%）， 98.88%（RSD=1.48%）， 98.97%（RSD=1.45%）， respectively. [Conclusion] This method is rapid， simple with good repeatability and recovery， so it can be used as a quantitative analysis method for Zhizijinhua Pill.

Key wordsZhizijinhua Pill； HPLC； Baicalin； Wogonoside； Baicalein； Wogonin

梔子金花丸由梔子（FRUCTUS GARDENIAE）、黃芩（RADIX SCUTELLARIAE）、黃連（RHIZOMA COPTIDIS）等8味中藥組成，具有涼血解毒和清熱瀉火等功效，主要用于治療口舌生瘡、牙齦腫痛、咽喉腫痛和目赤眩暈等。梔子金花丸中梔子和黃芩是其君藥，其中梔子具有瀉火除煩、清熱利濕和涼血解毒等功效[1]；黃芩具有清熱燥濕、瀉火解毒和止血安胎等功效[2]。目前，很多文獻(xiàn)對(duì)梔子金花丸的質(zhì)量控制，但多是單獨(dú)測(cè)定梔子苷和黃芩苷，而黃芩苷不能全面反映黃芩中有效成分的藥效，且黃芩又是梔子金花丸中的君藥，其有效成分的含量標(biāo)準(zhǔn)直接影響著梔子金花丸的療效。因此，筆者采用HPLC法測(cè)定梔子金花丸中4種主要有效成分的含量，以期為進(jìn)一步完善梔子金花丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供奠定基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1研究對(duì)象。梔子金花丸，由攀枝花市人民醫(yī)院藥劑科提供。

1.1.2主要儀器。Agilent Zorbax SB-C18安捷倫高效液相色譜儀，購(gòu)自Agilent公司；BSA-224S賽多利斯電子天平，購(gòu)自賽多利斯公司；JAC超聲波清洗器，購(gòu)自上海君翼有限公司，功率250 W，頻率25 kHz。

1.1.3主要試劑。黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素對(duì)照品，均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，對(duì)照品的純度均>98%；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，市售；水是重蒸餾水，實(shí)驗(yàn)室自制。

1.2方法

1.2.1色譜條件。色譜柱為Agilent Zorbax SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈-濃度0.1%磷酸，梯度洗脫：0 min→20 min→50 min，乙腈5%→15%→45%；檢測(cè)波長(zhǎng)為278 nm；流速為1.0 ml/min；柱溫為30 ℃；進(jìn)樣量為10 μl。

1.2.2對(duì)照品溶液的制備。分別取黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素對(duì)照品適量，用電子天平精密稱(chēng)定，置棕色容量瓶，加濃度50%甲醇制成1 ml含黃芩苷0.209 mg、漢黃芩苷0.1 mg、黃芩素0.116 5 mg、漢黃芩素0.107 5 mg的混合溶液，即得。

1.2.3供試品溶液的制備。精密稱(chēng)取2.002 6 g梔子金花丸細(xì)粉，置具塞錐形瓶中，精密加入50 ml濃度50%甲醇溶液，稱(chēng)定重量，超聲處理30 min，取出，放冷，再稱(chēng)定重量，用濃度50%甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻并過(guò)濾，即得。

1.2.4方法學(xué)考察。（1）系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)。分別精密吸取上述對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。（2）線(xiàn)性關(guān)系的考察。分別精密吸取 “122”項(xiàng)下對(duì)照品溶液2.5、5.0、7.5、10.0、15.0、20.0和25.0 μl，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，再以峰面積A對(duì)進(jìn)樣量C（μg）進(jìn)行回歸，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程。（3）精密度試驗(yàn)。分別精密吸取“1.2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液10 μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素峰面積的RSD。（4）重復(fù)性試驗(yàn)。取同一批樣品，按“123”項(xiàng)下方法，平行制備6份供試品溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定并計(jì)算黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素平均含量的RSD。（5）穩(wěn)定性試驗(yàn)。分別取適量供試品溶液，于制備后0、2、4、8、12和24 h內(nèi)進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素及漢黃芩素峰面積的RSD。（6）加樣回收試驗(yàn)。精密稱(chēng)取已知含量的梔子金花丸粉末9份，每份0.500 0 g，分成3組，每組各3份，分別精密添加含黃芩苷0.208 mg/ml，漢黃芩苷0100 mg/ml，黃芩素0.116 6 mg/ml及漢黃芩素 0.107 8 mg/ml的混合對(duì)照品溶液2、3和4 ml，分別按照“1.2.3”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按照上述色譜條件測(cè)定并計(jì)算平均回收率和RSD。

3結(jié)論與討論

在試驗(yàn)中，針對(duì)含量測(cè)定配制供試品溶液時(shí)，采用不同提取方法（超聲、回流及索氏提?。?，且用不同提取溶劑（水、25%甲醇、50%甲醇、75%甲醇）和不同溶劑體積（10、25、50和75 ml）以及不同提取時(shí)間（15、30、45和60 min）分別作考察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，以50 ml濃度50%甲醇超聲提取30 min含量最高，雜質(zhì)峰較少。試驗(yàn)建立了同時(shí)測(cè)定中成藥梔子金花丸中4種有效成分的HPLC標(biāo)準(zhǔn)，方法準(zhǔn)確，可靠，可以為此中成藥的指紋圖譜提供有效參考，同時(shí)為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)范提供科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

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