錢岳晟，王 彥，楊 龑，高平進，朱鼎良

高血壓病是一種多基因遺傳性疾病，以心血管的易損性生物標志結合相關基因的多態(tài)性進行分型尋找遺傳特征是當前的研究熱點。中醫(yī)的體質分類綜合先天和后天因素為遺傳學研究提供了一條很好的途徑。以高血壓病為切入點，用中醫(yī)學的體質論，研究痰濕質的病理生理特征已經(jīng)有較多的報道。有研究從人體的糖、脂代謝，胰島素抵抗、脂聯(lián)素水平以及心臟血管結構功能方面研究，發(fā)現(xiàn)一些與其相關的遺傳標記［1－3］。本研究以瘦素受體基因（leptin receptors，Lepr）RS1137101基因的多態(tài)性探討心臟血管的結構功能與瘦素受體基因之間的關系，尋找在遺傳方面的生物標志。

1 資料與方法

1.1 標準

1.1.1 診斷標準 高血壓診斷標準為病史中有不同日3次以上偶測收縮壓和（或）舒張壓≥140／90mmHg（1mmHg＝0.133 kPa）［4］。參照王琦等制定的中醫(yī)痰濕體質的判定［5］和匡調元的體質分類［6］，根據(jù)高血壓的特點痰濕體質判斷標準：體形肥胖，中脘痞滿，口甜黏，身重如裹，大便不實，口干不飲，胸滿昏眩，脈濡或滑，舌苔膩。不符合此標準的為非痰濕體質患者，作為對照組。

1.1.2 納入標準 2001年—2004年在瑞金醫(yī)院高血壓科住院的上海籍原發(fā)性高血壓患者，年齡18歲～80歲，性別不限，并簽署知情同意書。

1.1.3 排除標準 經(jīng)詢問病史、體格檢查和實驗室檢查排除繼發(fā)性高血壓和糖尿病。

1.2 方法

1.2.1 一般檢查及生化檢測 受試者在停用對糖代謝可能影響的降壓藥（β－受體阻滯劑、噻嗪類利尿劑）2周后，由專人測量坐位血壓，每次測壓3遍，取3遍讀數(shù)的均值作為血壓值；測量身高、體重，以體重／身高獲得體重指數(shù)（BMI）。

1.2.2 左室肥厚和頸動脈內膜檢測 采用荷蘭飛利浦公司生產(chǎn)的IE33 彩色多普勒超聲診斷儀。探頭頻率（3～11）MHz。取胸骨旁左室長軸切面，應用M 型超聲及二維超聲技術，測量舒張末期室間隔厚度（IVST）、左室后壁厚度（PWT）及左室腔內徑（LVEDD），根據(jù)Devereux公式計算左室重量（LVM）及左室重量指數(shù)（LVMI）。分別檢測雙側頸總動脈、頸內動脈及頸外動脈，測量各血管內徑及頸總動脈內膜－中膜厚度（IMT），左右各測量3次，取平均值。IMT 的檢測方法是選取頸總動脈距離分叉處近心端15mm 處的遠側血管壁。放大圖像直到能清晰顯示血管壁的結構，測量從血管內膜的內表面到中膜的外表面的垂直距離，以QLab軟件自動測量。

1.2.3 基因測定 對Lepr基因RS1137101進行多態(tài)性分型。每個受試者檢測前都簽署知情同意書，取外周靜脈血4mL，抽提 DNA，采 用 MALDI－TOF 質 譜 檢 測 技 術 進 行ADD 1Gly 4 6 0Trp分型。應用MassARRAYTM Assay Design 2.0軟 件 設 計PCR 引 物。經(jīng) 多 重PCR 擴 增、PCR 產(chǎn) 物SAP 純化、延伸反應、樹脂純化后，將純化產(chǎn)物點樣Spectro CHIP 芯片。MassARRAYTM Analyzer質譜檢測，運行MassARRAYTM Typer 3.0.1軟件進行數(shù)據(jù)分析，并輸出基因類型［7］。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 12.0統(tǒng)計。計量資料用t檢驗，以均數(shù)±標準差表示，計數(shù)資料用χ2檢驗，組間比較采用以性別、年齡、收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP）和BMI進行校正的方差分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 兩組患者一般情況 508例原發(fā)性高血壓患者，經(jīng)中醫(yī)體質分類，符合痰濕質體質判斷標準（痰濕質組）264例，非痰濕體質（非痰濕質組）244例。兩組病程和IMT 差異有統(tǒng)計學意義（P＝0.038，0.01）。

經(jīng)校正性別、年齡、病程、SBP、DBP和BMII后，LVMI兩組間分別為172.97±6.21和157.32±0.65，差異無統(tǒng)計學意義（P＝0.085），但與病程和BMI相關（P＝0.001，0.025）；IMT 值分別為（0.65±0.01）mm 和（0.62±0.01）mm，差異有統(tǒng)計學意義（P＝0.019），與性別、年齡、SBP和DBP相關（P＝0.02，0.006，0.001，0.022）。詳見表1。

表1 兩組患者一般情況比較

表3 兩組患者Lepr基因的RS1137101多態(tài)性與LVM 和IMT 的相關性分析

表3 兩組患者Lepr基因的RS1137101多態(tài)性與LVM 和IMT 的相關性分析

與非痰濕質組比較，1）P＜0.05

項目 痰 濕 質 組 AA非痰濕質組 痰濕質組AG非痰濕質組 痰濕質組GG非痰濕質組LVM（g／m2） 265.769±102.797 165.608±59.470 162.699±17.053 148.658±16.739 172.950±6.51 157.872±6.990 IMT（mm） 0.768±0.0351） 0.626±0.020 0.689±0.030 0.640±0.030 0.647±0.0121） 0.611±0.013

2.2 兩組患者Lepr基因的RS1137101多態(tài)性比較 痰濕質組高血壓患者Lepr基因RS1137101的AA、AG 和GG 的分布分別占1.5%、12.5%和80.6%，非痰濕質組高血壓患者分別占4.9%、13.9%和81.1%，兩組差異無統(tǒng)計學意義。A 等位基因和G 等位基因兩組分別占8.0%、92.0%和11.9%、88.1%，差異無統(tǒng)計學意義。詳見表2。

表2 兩組患者Lepr基因RS1137101多態(tài)性分布比較 例（%）

2.3 兩組患者Lepr基因的RS1137101多態(tài)性與LVM 和IMT的相關性分析 痰濕質組高血壓患者的Lepr 基因的RS1137101的AA 型和GG 型在LVM 和IMT 值比非痰濕質組患者明顯升高，IMT 值有統(tǒng)計學意義（P＝0.017、0.039），而LVM 值差別無統(tǒng)計學意義。詳見表3。

3 討 論

痰濕質是原發(fā)性高血壓患者中最常見的體質類型之一［8］，痰濕質高血壓病患者存在血脂、血糖、胰島素抵抗、脂聯(lián)素水平等代謝方面的異常，且比其他體質患者更為明顯，存在更容易發(fā)生靶器官損害的傾向［9－11］。左心室肥厚程度和頸動脈內膜厚度是評估高血壓靶器官損害的指標之一［4］，本研究以LVMI和IMT 為指標，探討不同體質高血壓患者在心血管的結構和功能方面差異，發(fā)現(xiàn)痰濕體質的高血壓病患者LVM 和IMT 均比非痰濕體質高血壓病患者高，在校正了性別、年齡、病程、SBP、DBP和BMI后，這種差異仍然存在，痰濕質組與非痰濕質組高血壓病患者LVMI分別為1 7 2.9 7±6.2 1和1 5 7.3 2±0.65，差異無統(tǒng)計學意義（P＝0.085），但與病程和BMI呈正相關（P＝0.001，0.0 2 5）；而IMT值差異有統(tǒng)計學意義（P＝0.019），差異還與性別、年齡、SBP和DBP相關（P＝0.0 2，0.006，0.001，0.022）。說明高血壓病程和患者BMI導致了心臟重塑，血壓升高將會增加血管內膜厚度的變化，再次證明痰濕體質高血壓病患者將增加心血管病風險。

中醫(yī)體質分類綜合先天和后天因素為遺傳學研究提供了一條很好的途徑。以痰濕體質作為病理特征，在高血壓病患者中，結合亞臨床的靶器官損害指標尋找心血管的易損性生物標志，可以為早期預防和早期治療提供有效信息。Lepr基因的多態(tài)性早期認為與能量代謝有關［12］，Lepr基因RS1137101的變異Salopuro在芬蘭人中發(fā)現(xiàn)與糖尿病密切相關［13］，Guízar在墨西哥人群中GG 和GA 型中心臟交感神經(jīng)活性，體脂含量和瘦素水平明顯升高［14］。也有報道與高血壓相關［15－17］，但基因的多態(tài)性尚未有一致的結論［18］。本研究的結果顯示痰濕體質和非濕體質高血壓病患者在Lepr基因RS1137101的分布沒有顯著的差異，AA 型和GG 型的痰濕質高血壓患者LVM 和IMT 值均比非痰濕質組患者升高，兩組間IMT 差值有統(tǒng)計學意義，而LVM 差異無統(tǒng)計學意義。有報道認為Lepr基因的RS1137101的A 等位基因與原發(fā)性高血壓患者動脈粥樣硬化相關［19］，GG型基因高血壓患者左心室功能、腎血流動力學各項指標變化更明顯［20］。由于Lepr基因RS1137101的AA 型在人群中所占的比例較低，其結果是否有普遍的臨床意義，還有待擴大樣本做進一步驗證。

［1］ Qian YS，Zhou XO，Zhang Y，et al.Study on insulin resistance and genetic polymorphisms in essential hypertension patients of two different kinds of TCM consitution［J］.Chin J Integr Med，2007，13（3）：175－179.

［2］ 錢岳晟，高平進，張怡，等.痰濕質高血壓患者胰島素抵抗與脂聯(lián)素基因相關性［J］.中華高血壓雜志，2010，18（7）：653－657.

［3］ 錢岳晟，張怡，周曉鷗，等.痰濕體質高血壓病患者脂聯(lián)素異常與脂聯(lián)素基因相關性研究［J］.中國中西醫(yī)結合雜志，2010，30（5）：454－457.

［4］ 中國高血壓防治指南起草委員會.中國高血壓防治指南（修訂版）［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：28－29.

［5］ 王琦，葉加農，朱燕波，等.中醫(yī)痰濕體質的判定標準研究［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2006，21（2）：73－75.

［6］ 匡調元.中醫(yī)體質病理學［M］.上海：上海科學普及出版社，1996：88－90.

［7］ 張怡，周曉鷗，初少莉，等.脂聯(lián)素基因3224C／T 多態(tài)性與男性高血壓患者發(fā)生糖代謝異常相關性研究［J］.內科理論與實踐，2007，2（3）：160－163.

［8］ 錢岳晟，張偉忠，周懷發(fā)，等.原發(fā)性高血壓患者表型與中醫(yī)體質分類關系的研究［J］.中國中醫(yī)基礎雜志，2002，2：49－51.

［9］ 錢岳晟，張怡，朱鼎良.高血壓病患者中醫(yī)體質分類與心血管危險因素的相關研究［J］.中西醫(yī)結合心腦血管病雜志，2011，9（10）：1160－1161.

［10］ 符德玉，趙彥功，任敏之，等.高血壓證型與靶器官損害的相關性研究［J］.中醫(yī)藥學刊，2004，22（11）：2087－2088.

［11］ 錢岳晟，張偉忠，周懷發(fā)，等.血壓變異與高血壓病患者中醫(yī)體質分類的關系［J］.中國中西醫(yī)結合雜志，2003，23（2）：88－90.

［12］ 吳堅，鄒大進.瘦素受體基因研究進展［J］.生理學報，2000，31（2）：143－146.

［13］ Salopuro T，Pulkkinen L，Lindstr?m J，et al.Genetic variation in leptin receptor gene is associated with type 2diabetes and body weight：The Finnish diabetes prevention study［J］.Int J Obes（Lond），2005，29（10）：1245－1251.

［14］ Guízar－Mendoza JM，Amador－Licona N，F(xiàn)lores－Martínez SE，et al.Association analysis of the Gln223Arg polymorphism in the human leptin receptor gene，and traits related to obesity in Mexican adolescents［J］.J Hum Hypertens，2005，19（5）：341－346.

［15］ Bjorbaek C，Kahn BB.Leptin signaling in the central nervous system and the periphery［J］.Recent Prog Horm Res，2004，59：305－331.

［16］ 王楠，馬麗雅，李梅.瘦素、瘦素受體及其基因的多態(tài)性與高血壓［J］.中國老年醫(yī)學雜志，2005，10（25）：1286－1287.

［17］ 蔡澤園，趙福梅，劉婷，等.瘦素受體基因多態(tài)性與高血壓及血脂關系［J］.天津醫(yī)學雜志，2011，39（3）：196－198.

［18］ 顧萍，蔣衛(wèi)民，王堅.等.瘦素受體基因多態(tài)性與高血壓及其臨床代謝特征的相關性研究［J］.臨床內科雜志，2009，26（11）：762－765.

［19］ 李春城，王先梅，楊麗霞.Gln223Arg多態(tài)性與云南省高血壓合并肥胖漢族患者的相關性［J］.嶺南心血管病雜志，2012，18（5）：516－520.

［20］ 王楠，成蓓，馬麗雅.高血壓患者左心室功能及腎臟血流動力學與瘦素受體基因外顯子4Lys109Arg變異的關系［J］.中國醫(yī)師進修雜志，2010，33（1）：14－15.