王 燦 吳宿慧

（河南中醫(yī)學(xué)院,河南 鄭州 450046）

婦炎毓膠囊的抑菌抗炎作用

王 燦 吳宿慧

（河南中醫(yī)學(xué)院,河南 鄭州 450046）

目的研究婦炎毓膠囊（婦炎毓）的抑菌及抗炎作用。方法采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響觀察婦炎毓對急性炎癥的影響；體內(nèi)實驗采用白色念珠菌、陰道滴蟲和大腸桿菌混合感染建立大鼠陰道炎模型，觀察婦炎毓對陰道炎的影響；體外抑菌實驗觀察婦炎毓對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、克雷伯桿菌、甲型以及乙型鏈球菌的影響。結(jié)果婦炎毓對小鼠耳廓腫脹有顯著地抑制作用（P＜0.01）；體內(nèi)實驗結(jié)果表明婦炎毓能明顯抑制陰道炎模型大鼠陰道黏膜充血、水腫、出血和陰道分泌物的分泌，與模型組比較有顯著性差異（P＜0.05或，P＜0.01）。炎毓組病原體轉(zhuǎn)陰效果明顯，ED50為2.99 g/kg，95%可信區(qū)間為2.01～4.63 g/kg。婦炎毓對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、甲型鏈球菌、乙型鏈球菌、克雷伯桿菌均有抑制作用，MIC分別為3.90、15.62、3.90、7.81和125 mg/mL。結(jié)論婦炎毓能殺抑制多種陰道致病菌，并對抗多種細菌真菌混合感染造成的實驗性陰道炎。

婦炎毓膠囊；抑菌作用；陰道炎

婦炎毓膠囊體為我院協(xié)定處方,由蛇床子、牡丹皮、黃柏、茯苓、懷牛膝、黨參、紅花、莪術(shù)組成。功能與主治:清熱解毒,益氣活血,去濕止帶。用于治療陰道炎,盆腔炎及附件炎等癥。癥見赤白帶下,量多,有異味,少腹墜痛。本實驗對其抑菌作用和治療陰道炎作用進行了研究討論。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品與試劑

婦炎毓膠囊（以下簡稱“婦炎毓”）,批號20110509,實驗時去除膠囊外殼,用0.5%羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）配成4%,8%和16%三種濃度的混懸液。婦炎康復(fù)膠囊（陽性對照藥,以下簡稱“婦炎康”）,吉林吉春制藥有限公司,批號090710,實驗時去除外殼,用0.5%CMC-Na配成15%的混懸液。氨芐青霉素,160萬U/支,華北制藥股份有限公司,批號00902103。

1.1.2 菌種

金黃色葡萄球菌26003,中國藥品生物制品鑒定所提供；大腸桿菌E109,中國藥品生物制品鑒定所提供；甲型鏈球菌M207,鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院微生物與免疫教研室保存；乙型鏈球菌,臨床分離株,鄭州大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院提供；克雷伯桿菌,臨床分離株,鄭州大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院提供。

1.1.3 培養(yǎng)基

M-H液體培養(yǎng)基,杭州微生物試劑廠,批號090502；M-H固體培養(yǎng)基,杭州微生物試劑廠,批號080105。使用時根據(jù)需要加入10%小牛血清和5%～10%脫纖維羊血。

1.1.4 動物

SD大鼠、昆明種小鼠均購自河南省實驗動物中心提供,合格證: SCXK（豫）2005-0001。

1.2 方法

1.2.1 婦炎毓對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響

取20～22 g的清潔級昆明種雌性小鼠50只,隨機分為5組,分別灌胃婦炎康組（1.5 g/kg）和婦炎毓Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組（1.30、2.16、3.61、6.03 g/kg）和同體積的生理鹽水（空白對照組）。每天灌胃1次,連續(xù)給藥3 d,于最后一次灌藥1 h后,每鼠左耳滴二甲苯0.04 mL（正反均滴）,右耳作為對照,滴加二甲苯1 h后處死動物,取下雙耳,對齊,用0.8 cm的打孔器打下雙耳耳片。迅速在分析天平上稱重,測腫脹度及其腫脹抑制率。小鼠耳廓腫脹度以每鼠左右耳質(zhì)量之差的平均值來表示,結(jié)果見表1。腫脹抑制率=（空白組腫脹度-給藥組腫脹度）/空白組腫脹度×100%。

1.2.2 婦炎毓對大鼠陰道炎模型的影響

①含藥培養(yǎng)基的制備:將藥物分別加至M-H液體培養(yǎng)基中配制成梯度濃度的含藥培養(yǎng)基。使婦炎毓組和婦炎康組藥物終濃度依次為500、250、125、62.5、31.25、15.62、7.81、3.90、1.95和0.98 mg/mL,青霉素組藥物濃度依次為400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.12和1.56 U/mL。②菌液的制備:將不同凍干菌種分離活化,取單個菌落接種到1 mL液體培養(yǎng)基中（金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和克雷伯桿菌37 ℃培養(yǎng)8 h,1∶1000稀釋；甲型和乙型鏈球菌37 ℃培養(yǎng)18 h,1∶100稀釋）,使各種菌液終濃度約為5.0×106CFU/mL。③最小抑菌濃度（MIC）的測定（試管法）:用微量移液管吸取方法“2.2”中制備的實驗菌液各0.1 mL分別接種到方法“2.2.1”中制備的含藥培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)（金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和克雷伯桿菌37 ℃培養(yǎng)8 h；甲型和乙型鏈球菌37 ℃培養(yǎng)12 h）,并設(shè)空白對照。隨著藥物濃度的增高,培養(yǎng)物濁度漸低?？瞻讓φ展苤械呐囵B(yǎng)物明顯渾濁,實驗把肉眼觀察澄清的最小藥物濃度稱為最小抑菌濃度（MIC）,結(jié)果見表2。④造模與給藥:將大鼠雙側(cè)卵巢和子宮切除后,皮下注射雌二醇建立假動情期。處于假動情期的大鼠經(jīng)陰道先后注入白色念珠菌3× 108CFU/mL、陰道滴蟲2.5×107CFU/mL和大腸桿菌21×108CFU/mL,注入量為0.3 mL/100 g。動物感染5 d后,取大鼠陰道分泌物進行測定:確定病原體檢查為陽性,陰道黏膜發(fā)生充血、水腫或出血者為感染成功。挑選感染成功的大鼠隨機分為7組,分別設(shè)空白對照組、模型對照組、婦炎康組（1.5 g/kg）（生藥濃度,下同）和婦炎毓Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組（1.30、2.16、3.61、6.03 g/kg）（均為生藥濃度,下同）,除空白組每組10只動物外,其余組每組20只。各用藥組動物每天灌胃給藥一次,連續(xù)給藥7 d,空白組和模型組灌服0.5% CMC-Na（10 mL/只）。

1.2.3 婦炎毓對陰道炎模型大鼠陰道黏膜炎癥的影響

停藥當(dāng)天各組分別取10只動物,以10%水合氯醛腹腔注射麻醉,剖取大鼠陰道,觀察陰道黏膜組織充血、水腫、出血、分泌物量及光滑度:陰道黏膜光滑,無充血、水腫、出血,分泌物正常為0級；陰道黏膜光滑,輕度充血、水腫,分泌物正常為Ⅰ級；陰道黏膜基本光滑,中度充血、水腫,點狀出血,分泌物增加為Ⅱ級；陰道黏膜不光滑,重度充血、水腫,出血點密集,分泌物明顯增加為Ⅲ級。結(jié)果采用秩和檢驗,結(jié)果見表3。

1.2.4 病原體轉(zhuǎn)陰率（%）

于停藥后第1,3,5天取各組大鼠陰道分泌物進行病原體檢查,3次檢查均為陰性者為轉(zhuǎn)陰,計算ED50及其95%可信區(qū)間,結(jié)果見表4。

2 結(jié) 果

2.1 婦炎毓對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響,見表1。

表1 婦炎毓對二甲苯致小鼠耳廓腫脹度及腫脹抑制率的影響（s，n=10）

表1 婦炎毓對二甲苯致小鼠耳廓腫脹度及腫脹抑制率的影響（s，n=10）

注：與空白對照組比，2）P＜0.05，1）P＜0.01

由表1可知:與空白對照組比較,婦炎毓Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組對小鼠耳廓腫脹有顯著或者明顯的抑制作用（P＜0.05,P＜0.01）,提示婦炎毓對小鼠的急性炎癥有改善作用。

2.2 最小抑菌濃度（MIC）比較

婦炎毓對多種細菌均有抑制作用,其中對金黃色葡萄球菌、克雷伯桿菌和甲型鏈球菌的抑制作用比婦炎康強,對甲型鏈球菌的抑制效果接近青霉素（表2）。

表2 婦炎毓的最小抑菌濃度（MIC）

2.3 婦炎毓對陰道炎模型大鼠陰道黏膜炎癥的影響

陰道炎模型大鼠陰道黏膜不光滑,可見充血、水腫,并伴有出血和分泌物（P＜0.01）,說明造模成功。婦炎康組和婦炎毓Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組均能明顯抑制陰道炎模型大鼠陰道黏膜充血、水腫、出血和陰道分泌物的分泌,與模型對照組比較,有顯著性差異（P＜0.05或P＜0.01）（表3）。

表3 婦炎毓對陰道炎模型大鼠陰道黏膜炎癥的影響

2.4 病原體轉(zhuǎn)陰率（%）

婦炎毓Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組病原體轉(zhuǎn)陰效果明顯,經(jīng)計算其ED50為2.99 g/kg,95%可信區(qū)間為2.01～4.63 g/kg（表4）。

表4 婦炎毓膠囊對陰道炎模型大鼠陰道病原體的影響

3 討 論

外陰及陰道炎是婦科常見病、多發(fā)病,女性各年齡段均可發(fā)病,常見的臨床癥狀為外陰瘙癢,帶下增多,色黃或黃白相兼、味臭,或質(zhì)稠厚如豆腐渣樣,外陰潮紅,可伴有口苦咽干,尿黃,舌質(zhì)紅,舌苔黃膩,脈濡數(shù),辨證屬“濕熱下注“證。中醫(yī)認為各類陰道炎均屬祖國醫(yī)學(xué)中的陰癢、帶下病范疇,其病因病機在諸多論著中均有闡述,《醫(yī)宗金鑒》認為“婦人陰癢,多因濕熱生蟲,蟲毒作癢?！盵1]；《婦人大全良方》曰:“夫婦人陰癢者,是蟲蝕所為。三蟲在于腸胃之間,因臟虛,三蟲動作,蝕于陰內(nèi)。其蟲作熱,微則為癢,重則乃痛也”[2]。主要病因為濕邪蟲毒,又有內(nèi)外之分；病機為肝脾腎功能失調(diào),濕邪傷及任帶二脈,濕熱下注,使任脈失固、帶脈失約；分肝經(jīng)濕熱、陰虛夾濕、濕濁蘊結(jié)。治當(dāng)清熱化濕,殺蟲止癢立法[3]。婦炎毓膠囊方中蛇床子性溫,具有燥濕祛風(fēng),殺蟲止癢之功效,用于陰癢帶下,濕疹瘙癢；牡丹皮性微寒,有清熱涼血,活血化瘀之功效,用于溫毒發(fā)斑,吐血衄血；黃柏性寒寒,清熱燥濕,解毒,可用于帶下陰癢,熱淋澀痛,瘡瘍腫毒,濕疹濕瘡；苦參清熱燥濕,祛風(fēng)殺蟲,用于濕熱下注、帶下色黃、陰腫陰癢；茯苓性平,利水滲濕,健脾；懷牛膝性平,補肝腎,用于淋證；黨參性甘,平,健脾益肺。諸藥合用,具有清熱解毒、殺蟲、祛濕、止癢,并兼具補腎健脾之功效。實驗結(jié)果表明,采用炎毓膠囊方治療陰道炎,對改善癥狀、消除炎癥有明顯的效果；其中對金黃色葡萄球菌、克雷伯桿菌和甲型鏈球菌的抑制作用優(yōu)于陽性對照組,對甲型鏈球菌的抑制效果接近青霉素,可以推廣運用。

[1] 陳燕,王志,蘭海珍.復(fù)方黃柏苦參洗液治療陰道炎療效觀察[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2010,19(20):2502-2503.

[2] 陳自明.婦人大全良方[M].天津:天津科學(xué)技術(shù)出版社,2003:195.

[3] 高月平,張瑾.自擬冰片薄荷湯治療陰道炎的臨床研究[J].遼寧中醫(yī)雜志,2010,37(10):1991-1992.

R711.31

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1671-8194（2014）25-0094-02