李惠云郭瑞臣*

（1 山東省威海市文登中心醫(yī)院,山東 威海 264400；2 山東大學齊魯醫(yī)院臨床藥理研究所,山東 濟南 250012）

硝苯地平原研與仿制口服制劑體外釋放度的對比研究

李惠云1郭瑞臣2*

（1 山東省威海市文登中心醫(yī)院,山東 威海 264400；2 山東大學齊魯醫(yī)院臨床藥理研究所,山東 濟南 250012）

目的比較原研與仿制硝苯地平口服制劑的釋放度，評價其體外溶出度的一致性。方法以0.25%十二烷基硫酸鈉水溶液（900 mL）為溶出介質(zhì)，采用反相高效液相色譜法測定硝苯地平濃度，轉籃法考察硝苯地平口服制劑釋放度。結果不同廠家硝苯地平口服制劑釋放速度和釋放量存在差異，原研緩釋片4 h釋放度為標示量的59.68%，11 h釋放度為標示量的82.94%；但仿制緩釋片4 h釋放度達標示量的109.18%；兩種緩釋制劑釋放相似度（f2）為60.26。仿制普通片1 h累計溶出度為82.19%，2 h為88.4%。結論硝苯地平原研、仿制緩釋片及仿制普通片釋放度符合藥典規(guī)定，但兩種緩釋片緩釋特點存在明顯差異，釋放相似度較低。進行仿制藥與原研藥體內(nèi)外一致性評價，有利于提高仿制藥質(zhì)量。

硝苯地平緩釋片；原研；仿制；高效液相色譜法；釋放度

硝苯地平由德國拜耳公司最早研制,為第一代鈣離子通道阻滯藥物,主要用于治療心血管疾病,可單獨使用,也可與其他藥物聯(lián)合應用。由于其療效肯定,價格適宜,國內(nèi)企業(yè)爭相仿制,短效或長效口服仿制制劑不斷問世,但質(zhì)量存在極大差異。本文采用中國藥典方法,以釋放度為指標,評價原研硝苯地平緩釋片與仿制硝苯地平緩釋片的一致性,為提高仿制藥品質(zhì)量提供理論依據(jù)[1]。

1 儀器、藥品、方法

1.1 儀器

安捷倫1100型高效液相色譜系統(tǒng),包括G1310A泵,G1314A紫外檢測器,G1313A自動進樣器,安捷倫1200色譜工作站。智能藥物溶出儀:ZRC-6D,北京金科利達電子科技有限公司；PK514BP超聲清洗器（德國BANDEL）；梅特勒-托利多 AX-205電子天平（瑞士梅特勒公司）[2]。

1.2 藥品

硝苯地平對照品（中國藥品生物制品檢定所,批號100338-200502）；硝苯地平緩釋片 （仿制緩釋片,20毫克/片,批號H10910052）；硝苯地平緩釋片（原研緩釋片,20 mg,批號HK-25208）；硝苯地平片（仿制普通片,5毫克/片,批號C110701）。

1.3 試劑

乙腈（色譜純）美國J.T.Baker公司生產(chǎn),批號:H30754；十二烷基硫酸鈉,上海潤捷化學試劑有限公司,批號:20080916；蒸餾水:娃哈哈飲用純凈水,批號:20121109；三乙胺（色譜純）美國Tedia公司生產(chǎn),批號:1005199。

1.4 方法

1.4.1 漏槽條件:三種片劑各取3片,分別置入3個1000 mL燒杯中,用900 mL,0.25%十二烷基硫酸鈉溶解,并超聲30 min至溶液澄清,濾紙過濾,緩釋片劑取5 mL,加15 mL、0.25%十二烷基硫酸鈉稀釋,硝苯地平普通片取10 mL,加10 mL,0.25%十二烷基硫酸鈉稀釋。分別取10 μL進樣分析。0.25%十二烷基硫酸鈉可滿足漏槽條件,超聲有利于消除表層泡沫,利于進樣[3-4]。

1.4.2 波長選擇:以0.25%十二烷基硫酸鈉稀釋硝苯地平儲備液至10 μg/mL,在200～400 nm波長段進行掃描,本品在333 nm波長處有最大吸收。

1.4.3 色譜條件:Phenomenex C18色譜柱（150 mm×4.6 mm,5 μL）,流動相乙腈-水（60∶40,0.3%三乙胺）,檢測波長333 nm,流速0.8 mL/min,進樣量20 μL。

1.4.4 方法學考察:①特異性。0.25%十二烷基硫酸鈉色譜圖見圖1-A。精密稱取硝苯地平標準品10 mg,置于10 mL容量瓶,配成1 mg/mL儲備液。取適量儲備液,加0.25%十二烷基硫酸鈉配成10 μg/mL溶液,上述色譜條件下進樣分析,色譜圖見圖1-B。硝苯地平峰形良好,溶劑無干擾。②線性范圍。分別吸取硝苯地平對照品儲備液適量,加0.25%十二烷基硫酸鈉制成濃度為0.83、1.49、2.33、3.88、6.48、10.8、18和30 μg/mL對照品溶液,在上述色譜條件下進樣分析,記錄峰面積。色譜峰面積A為橫坐標,濃度C（μg/mL）為縱坐標進行回歸,回歸方程為C=19.84x+1.54,R2=0.9999（n=8）,線性范圍為0.83～30 μg/mL。見圖2。③精密度。取硝苯地平儲備液適量,以0.25%十二烷基硫酸鈉為溶劑,得稀釋濃度為24、6.48、1.49 μg/mL的待測溶液。在上述色譜條件下重復進樣5次,連續(xù)3 d,記錄峰面積,日內(nèi)RSD均＜6%,日間RSD均＜5%。④穩(wěn)定性。取適量硝苯地平儲備液,以0.25%十二烷基硫酸鈉為溶劑,得稀釋濃度為24、6.48、1.49 μg/mL的待測溶液,分別測定室溫條件下放置24 h,凍融1次,凍融兩次后,冷凍3 d后硝苯地平濃度,記錄峰面積。RSD%均＜7%,穩(wěn)定性良好。

圖1 硝苯地平對照品色譜圖（A：0.25%十二烷基硫酸鈉；B：硝苯地平對照品）

圖2 硝苯地平線性考察“—”指該時間點未進行取此藥溶出液

圖3 三種硝苯地平口服制劑累計釋放及溶出百分數(shù)

2 結 果

取三種片劑各六片,采用轉籃法,以900 mL,0.25%十二烷基硫酸鈉為溶出介質(zhì),溫度為（37±0.5） ℃,轉速為100 r/min,分別于設定時間點取樣5 mL（補充5 mL溶劑）。三種硝苯地平口服制劑的溶出度測定數(shù)據(jù)。

采用相似因子法評價兩種硝苯地平緩釋片（原研緩釋片與仿制緩釋片）0～12 h內(nèi)的釋放度相似度。相似因子f2值在50～100范圍內(nèi),則表示兩種制劑的釋放度相似。基本公式為:

（1）測得不同時間累計溶出度（Yt）

（2）分別計算每一時間點藥品的平均溶出度（Ynt）

（3）計算相比較的兩種藥品平均溶出度的方差和（Q）

（4）計算相似因子（f2）

由以上公式計算兩種硝苯地平緩釋制劑的釋放相似度為60.26（f2）,計算結果表明原研緩釋片和仿制緩釋片釋放度相似,但相似度較低。

3 討 論

曾嘗試Diamonsil C18（5 μm,150 mm×4.6 mm）和甲醇-水系統(tǒng),峰形不佳,拖尾嚴重,改為Phenomenx C18（5 μm,150 mm× 4.6 mm）和乙腈-水系統(tǒng),可明顯改善峰形,消除拖尾。流動相中加入0.3%三乙胺,峰形更佳,有更好分離效果,保留時間縮短為4.54 min出峰[5]。

仿制普通片在0.33 h,累計溶出百分數(shù)達到61.78%,有速釋特點,1 h溶出度為82.19%,2 h溶出度為88.40%。符合中國藥典2010版1h溶出度應大于標示量百分含量的65%的規(guī)定。

不同廠家生產(chǎn)的硝苯地平口服制劑溶出度、緩釋特征存在差異。仿制緩釋片4 h累計釋放度達到109.18%,而原研緩釋片4 h累計釋放度為59.68%,11 h累計釋放度為82.94%。釋放相似因子計算結果表明兩種緩釋片釋放度相似,但相似度較低。仿制緩釋片緩釋效果接近控釋制劑,原研緩釋片為典型的緩釋制劑[6-7]。

研究結果提示,進行仿制藥與原研藥體內(nèi)外一致性評價,有利于提高仿制藥質(zhì)量,確?；颊咚幬镏委煹陌踩院陀行浴?/p>

緩釋制劑的體外釋放受原料、輔料、制劑工藝等因素影響。一致性評價中應注意考察仿制藥與原研藥原料的晶形、輔料、含量、制劑工藝之間的差異。并聯(lián)合體內(nèi)生物等效性研究結果,可更全面評價仿制藥與原研藥的一致性。

[1] 肖亞寶,文君.硝苯地平緩釋片釋放度測定方法的改進[J].藥物分析雜志,2000,20(6):425.

[2] Maggi L. Supramicellar solution of sodium dodecyl sulphate as dissolution media to study the in vitro release characteristics of sustained-release formulations containing[J].Int J Pharm,1996,135:73-79.

[3] 牛華英,馬萍.硝苯地平制劑的溶出度測定方法[J].齊魯藥事,2005,24(5):311-312.

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[5] 李美珍,盧欣.不同廠家硝苯地平緩釋片體外釋放試驗[J].天津醫(yī)科大學學報,2011,2(4):493-495.

[6] 夏錦輝,劉昌孝.固體藥物制劑的體外溶出度統(tǒng)計學評價分析[J].中國藥學雜志,2000,35(2):130-131.

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1671-8194（2014）25-0091-02

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