麥煥章 旋桂香 李煒鳳 楊育輝

（番禺區(qū)中心醫(yī)院,廣東 廣州 511400）

克拉霉素片含量不確定度的HPLC測(cè)量方法分析

麥煥章 旋桂香 李煒鳳 楊育輝

（番禺區(qū)中心醫(yī)院,廣東 廣州 511400）

目的分析HPLC測(cè)量方法測(cè)定克拉霉素片含量不確定度的方法。方法評(píng)估和分析測(cè)定克拉霉素片各個(gè)環(huán)節(jié)的不確定度，指出影響不確定度的主要因素。結(jié)果得出影響測(cè)定環(huán)節(jié)各個(gè)變量不確定度，同時(shí)給出測(cè)定結(jié)果擴(kuò)展不確定度以及置信水平。結(jié)論HPLC法測(cè)定克拉霉素片含量不確定度大概為1.6%。

克拉霉素片；含量；不確定度；HPLC法

克拉霉素片多用于臨床鼻咽、呼吸道、宮頸炎、肺炎支原體和皮膚軟組織感染的治療中,臨床多采用HPLC外標(biāo)一點(diǎn)法測(cè)定克拉霉素片含量,本文分析評(píng)估了采用HPLC法測(cè)定克拉霉素片含量的不確定度,分析影響克拉霉素不確定度的相關(guān)因素,為臨床正確評(píng)價(jià)克拉霉素片不確定度提供參考意見。

1 測(cè)定方法

1.1 克拉霉素片含量不確定HPLC測(cè)量準(zhǔn)備條件

實(shí)驗(yàn)多采用十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑,流動(dòng)相:磷酸鹽緩沖液-乙腈,柱溫為45 ℃,檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm,將克拉霉素峰值作為計(jì)算標(biāo)準(zhǔn),理論板數(shù)要＞3000,拖尾因子＜2.0,確?？死顾胤逯?、相鄰雜峰分離度與要求相符。

1.2 配置對(duì)照品溶液

克拉霉素作為對(duì)照品,適量,將其置于50 mL的量瓶中,流動(dòng)相溶解,定量稀釋,將其稀釋為0.35 mg/mL的溶液。

1.3 配置供試品溶液

取克拉霉素10片,0.25克/片,稱定,研磨,稱取適量研磨的細(xì)粉,將其置于100 mL的量瓶中,向量瓶中加入流動(dòng)相,搖晃溶解,加水稀釋,用力搖勻并濾過,該溶液即為供試品溶液。

1.4 克拉霉素片含量不確定度的測(cè)定方法及數(shù)據(jù)分析

分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20 μL,將兩種溶液分別注入相色譜儀,密切觀察并記錄兩種溶液的峰面積,結(jié)果見表1。

表1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

計(jì)算公式如下:X=[（As×Vs×Wr×M×P） /（Ar×Ws×Vr×K ×10） ]×100%,其中,X為克拉霉素標(biāo)示量,As是供試品溶液峰面積,Vs是樣品稀釋倍數(shù),Wr是對(duì)照品稱樣量,M是10片克拉霉素重量,P是對(duì)照品純度,Ar是對(duì)照品溶液峰面積,Ws是供試品稱樣量, Vr是對(duì)照品稀釋倍數(shù),K標(biāo)示克拉霉素片劑標(biāo)示量（0.25 g）。

2 克拉霉素片含量不確定度的量化分析

2.1 對(duì)照品引起的不確定度

由對(duì)照品溶液純度造成的克拉霉素片相對(duì)不確定度屬于B類,中國藥品生物制品檢定所提供純度為97.9%的克拉霉素對(duì)照品,在使用該對(duì)照品之前無需干燥處理。

測(cè)量過程中,因?qū)φ掌贩Q量造成的克拉霉素片相對(duì)不確定度也是B類不確定度,使用雙量程電子分析稱,最大允許誤差為正負(fù)0.03 mg,所以,對(duì)照品稱量引起的相對(duì)不確定度為0.03/31/2=0.0173 mg。

由電子分析電平稱重復(fù)性引起的不確定度也是B類不確定度,電子分析天平允許誤差為正負(fù)0.05 mg,按照矩形分布,其不準(zhǔn)確度為0.05/31/2=0.0289 mg,單次稱量的不確定度為（0.01732+0.02892）1/2=0.0337 mg。整個(gè)稱量的過程根據(jù)減重的方法進(jìn)行稱量,最終得出不確定度為0.0477mg。

對(duì)照品稀釋造成的不確定度屬于B類不確定度,按照規(guī)定,A級(jí)50 mL容量瓶的體積允差加減0.05 mL,接下來可以依據(jù)三角分布相關(guān)性質(zhì)得到不確定度[1]。

由容量瓶體積重復(fù)性引起的克拉霉素片含量不確定度屬A類,將50 mL量瓶加水稀釋至刻度,重復(fù)10次稱量,得到不確定度。

溫度引起的不確定是B類不確定度,20 ℃溫度下校準(zhǔn)50 mL容量瓶,按照矩形分布,95%置信概率下,不確定度是6×2.1×10-4×50/（31/2×50）=7.27×10-4。

對(duì)照品溶液稀釋造成的不確定度由對(duì)照品稀釋、容量瓶體積重復(fù)性以及溫度引起的不確定共同絕對(duì),計(jì)算所得的不確定為8.50×10-4。

2.2 供試品引起的不確定度

供試品引起的不確定主要包括供試品稱量引起的不確定度、供試品稀釋引起的不確定度、對(duì)照品溶液進(jìn)樣重現(xiàn)性的不確定度、供試品溶液進(jìn)樣重現(xiàn)性的不確定、平均片重稱量引起的不確定度引起的。其中,供試品稱量引起的不確定度包括電子分析天平校準(zhǔn)不確定度、電子分析電平稱量重復(fù)性不確定度以及供試品雙樣稱量的相對(duì)不確定度。供試品稀釋引起的相對(duì)不確定度包括容量瓶體積重復(fù)性不確定度、溫差引起的不確定度以及供試品溶液稀釋引起的相對(duì)不確定度共同決定。計(jì)算方法如上。引起克拉霉素片含量不確定的因素及分析結(jié)果見表2。

表2 不確定度各分量分析結(jié)果

3 討 論

任何完整的藥品檢驗(yàn)報(bào)告書中均應(yīng)包含不確定度評(píng)定,因?yàn)樵跈z驗(yàn)過程中,任何檢驗(yàn)防范都會(huì)引起不確定度,而不確定度很大程度影響著監(jiān)測(cè)結(jié)果[2]。通過本文不確定度的分析可知,利用HPLC法測(cè)定克拉霉素含片不確定度多來自稱量對(duì)照品、配置供試品溶液以及液相色譜儀等多個(gè)環(huán)節(jié),在上述影響因素中,對(duì)照品及供試品溶液的色譜分析進(jìn)樣環(huán)節(jié)不確定度在很大程度上影響著檢驗(yàn)不確定的結(jié)果。本文研究表明,利用HPLC方法測(cè)定克拉霉素片含量的時(shí)候,要保證被測(cè)藥品相關(guān)參數(shù)和液相色譜儀技術(shù)性能指標(biāo)項(xiàng)適合,并確保定期進(jìn)行相色譜儀計(jì)量檢定和核查工作,保證液相色譜儀處于穩(wěn)定狀態(tài)；另外,要選用精度較高的天平進(jìn)行稱量,從各方面確保降低操作及人為因素造成的不利結(jié)果[3-4]。

總之,利用HPLC測(cè)量方法測(cè)量克拉霉素含量不確定的時(shí)候,要保證液相色譜儀各項(xiàng)性能指標(biāo)正常,在測(cè)定過程中要核查各個(gè)環(huán)節(jié),確保液相色譜儀工作于最佳狀態(tài),以便確?？死顾仄繖z驗(yàn)結(jié)果的客觀正確性。不能為了節(jié)約成本或方便操作等目的降低對(duì)照品及供試品取樣量,應(yīng)從根本上杜絕人為因素或隨意操作等對(duì)克拉霉素片含量不確定度測(cè)量的影響,從而實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確無誤的測(cè)量。

[1] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(二部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:153.

[2] 邢以文.硫酸慶大霉素片含量測(cè)定的不確定度評(píng)估[J].中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用,2011,2(12):67-68.

[3] 吳美芳.高效液相色譜法測(cè)定克拉霉素片的溶出度[J].中國藥師,2008,3(12):57-58.

[4] 饒毅,夏川川,周海濱,等.高效液相色譜法測(cè)定白芍總苷的不確定度分析[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2011,4(3):57-58.

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1671-8194（2014）25-0090-02