張玉文 王 丹 劉 亞

（商丘市第一人民醫(yī)院病理科，河南 商丘 476000）

乳腺癌中CCR5和c-Met的表達(dá)及意義

張玉文 王 丹 劉 亞

（商丘市第一人民醫(yī)院病理科，河南 商丘 476000）

目的探討乳腺癌組織中CCR5和c-Met的表達(dá)及其意義。方法采用免疫組化SP法檢測45例乳腺癌中CCR5和c-Met的表達(dá)。結(jié)果乳腺癌組織CCR5陽性率55.6%（25/45），正常乳腺組織中CCR5表達(dá)率8.9%（4/45），兩種組織陽性表達(dá)率差異顯著（P＜0.01），c-Met的陽性表達(dá)率為51%（23/45），正常乳腺組織中c-Met表達(dá)率6.6%（3/45），兩種組織陽性表達(dá)率差異顯著（P＜0.01）。在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌中c-Met和CCR5的共同陽性率44.4%（20/45），無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌中陽性表達(dá)率為22.2%（10/45）。CCR5和c-Met的表達(dá)和乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移成正相關(guān)。結(jié)論CCR5和c-Met與提示乳腺癌的轉(zhuǎn)移預(yù)后因素有關(guān)，可作為預(yù)測乳腺癌轉(zhuǎn)移的參考指標(biāo)之一。

乳腺腫瘤；CCR5；c-Met；免疫組化

隨著生活方式的改變，乳腺癌已經(jīng)成為女性最常見的惡性腫瘤，其發(fā)病年齡趨于年輕化、惡性化，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，因此采取積極的預(yù)防及治療措施至關(guān)重要。乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展與許多因素相關(guān)，研究表明，CCR5和c-Met與乳腺癌發(fā)病有關(guān)密切關(guān)系[1-5]。目前，這兩個蛋白在乳腺癌中的共同作用沒有報(bào)道，本研究通過檢測45例乳腺癌中CCR5和c-Met的表達(dá)情況，探討CCR5和c-Met作為乳腺癌轉(zhuǎn)移和預(yù)后指標(biāo)的可能性。

1 材料與方法

1.1 材料

收集商丘市第一人民醫(yī)院2010年至2012年乳腺癌標(biāo)本及同病例的正常乳腺組織45例，患者年齡30～65歲，平均年齡47.5歲，女性患者，手術(shù)標(biāo)本經(jīng)10%中性福爾馬林固定，常規(guī)包埋切片，染色。所有病例均進(jìn)行常規(guī)HE染色并經(jīng)過2位以上的病理學(xué)專家診斷。CCR5單克隆抗體（MAB182）購自美國R&D公司，c-Met購自北京中杉公司。

圖1 乳腺癌組織中CCR5/c-Met的表達(dá)

1.2 免疫組化染色

采用PV-6000免疫組化法，切片經(jīng)脫蠟、脫水、修復(fù)、封閉，PBS液沖洗3次×2 min，滴加CCR5和c-Met過夜，PBS沖洗3次×2 min，滴加二抗，孵育30 min，PBS沖洗3次×2 min，用DAB顯色，PBS做陰性對照。

1.3 結(jié)果判讀

免疫組化結(jié)果判定：CCR5和c-Met均為細(xì)胞質(zhì)和胞膜有黃色至棕褐色的細(xì)顆粒狀分布的為陽性細(xì)胞，癌細(xì)胞無著色或陽性細(xì)胞＜10%的為陰性細(xì)胞；淺黃色、陽性細(xì)胞10%～30%為（+），棕黃色、陽性細(xì)胞30%～70%的為（++），棕褐色、陽性細(xì)胞>70%的為（+++）（圖1）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

2 結(jié) 果

乳腺癌組織CCR5陽性率55.6%（25/45），正常乳腺組織中CCR5表達(dá)率8.9%（4/45），兩種組織陽性表達(dá)率差異顯著（χ2=22.436，P＜0.01），c-Met的陽性表達(dá)率為51%（23/45），正常乳腺組織中c-Met表達(dá)率6.6%（3/45），兩種組織陽性表達(dá)率差異顯著（χ2=21.635，P＜0.01）。在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌中c-Met和CCR5的共同陽性率55.5%（25/45），無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌中陽性表達(dá)率為24.4%（11/45）。CCR5和c-Met的表達(dá)和乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（χ2=9.074，P=0.003）。

3 討 論

CC趨化因子受體5（CCR5）具有G蛋白耦聯(lián)受體家族所特有的7個跨膜區(qū)域，呈螺旋結(jié)構(gòu)，為一種細(xì)胞膜蛋白，是趨化因子CCL3，CCL4，CCL5的特異性受體，與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、自身免疫性疾病、糖尿病等急慢性炎癥有著重要的聯(lián)系[6-9]。乳腺癌細(xì)胞株MCF-7可表達(dá)CCR5，用其拮抗劑Met-CCL5預(yù)處理乳腺癌小鼠，腫瘤的體積和質(zhì)量較對照組明顯減少[9,10]。研究表明，CCR5通過兩種途徑對腫瘤發(fā)生作用：①調(diào)節(jié)和遷徙免疫細(xì)胞，從而間接對腫瘤起作用。②腫瘤自身表達(dá)CCR5與不同的細(xì)胞因子結(jié)合，作用于腫瘤本身[10]。

c-Met蛋白為具有生物活性的雙鏈肝細(xì)胞生長因子（HGF）的特異性上皮受體，主要存在于上皮細(xì)胞中，HGF能夠作用于c-Met，使c-Met蛋白收到刺激后調(diào)節(jié)上皮細(xì)胞內(nèi)的磷酸化程度，促進(jìn)有絲分裂等[4,5,7]。通過HGF/c-Met信號通路促進(jìn)腫瘤組織周圍基質(zhì)的降解，腫瘤組織內(nèi)血管的生成，促進(jìn)癌組織的生長、浸潤和轉(zhuǎn)移[4-6]。

本文45例乳腺癌組織CCR5陽性率55.6%（25/45），正常乳腺組織中CCR5表達(dá)率8.9%（4/45），兩種組織陽性表達(dá)率差異顯著（χ2=22.436，P＜0.01），c-Met的陽性表達(dá)率為51%（23/45），正常乳腺組織中c-Met表達(dá)率6.6%（3/45），兩種組織陽性表達(dá)率差異顯著（χ2=21.635，P＜0.01）。在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌中c-Met和CCR5的共同陽性率55.5%（25/45），無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌中陽性表達(dá)率為24.4%（11/45）。CCR5和c-Met的表達(dá)和乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移成正相關(guān)。提示隨著CCR5和c-Met蛋白的活性增高，促進(jìn)癌組織侵襲和轉(zhuǎn)移的能力也增強(qiáng)，易于向周圍組織浸潤性生長，并且易于轉(zhuǎn)移至其他部位。因此CCR5和c-Met蛋白在癌組織中的高表達(dá)和患者的不良預(yù)后有關(guān)，提示二者可以作為乳腺癌轉(zhuǎn)移及預(yù)后的參考指標(biāo)。

本研究從蛋白表達(dá)水平證實(shí)了CCR5和c-Met在乳腺癌組織的發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移方面發(fā)揮著一定作用，可作為乳腺癌預(yù)后不良的標(biāo)志，二者的聯(lián)合檢測可以更加有效的評估患者轉(zhuǎn)移及預(yù)后，為進(jìn)一步研究乳腺癌的作用機(jī)制打下了基礎(chǔ)。但是由于受體作用網(wǎng)絡(luò)的復(fù)雜性以及腫瘤生長的多因素性，CCR5和c-Met在乳腺癌的表達(dá)的正相關(guān)性，是通過何種機(jī)制及其作用細(xì)節(jié)仍需進(jìn)一步探討。

[1] 郭滿盈,陳揚(yáng),王棟.CCR5的表達(dá)在乳腺癌的診斷與轉(zhuǎn)移中的臨床價值[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2012,33(4):392-393.

[2] Loetscher P,Uguccioni M,Bordoli L,et al.CCR5 is characteristic of Th1 lymphocytes[J].Nature,1998,391(6665):344-345.

[3] Muller A,Homey B,Soto H,et al.Involvement of chemokiner receptors in breast cancer metastasis [J].Nature,2001,410(6824):50-56.

[4] Vaday GG,Peehl DM,Kadam PA,et al.Expression of CCL5(RANTES) and CCR5 in prostate cancer[J].Prostate,2006,66(8):124-134.

[5] 肖芹,范欽和,顧學(xué)文.浸潤性乳腺癌中Hepsin和c-Met的表達(dá)及臨床病理意義[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2008,24(1):37-39.

[6] 姚曉莉,童鶴翔,涂毅,等.CCL5及其受體在乳腺癌組織中的表達(dá)及其意義[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,2007,24(5):590-592.

[7] Martin TA,Watkins G,Mansel RE,et al.Hepatocyte growth factor disrupts tight junction in human breast cancer cells[J].Cell Biol Int,2004,28(5):361-371.

[8] 范威,潘翠萍,張懿敏.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對乳腺癌MCF-7細(xì)胞CCL5表達(dá)的影響[J].腫瘤防治研究,2012,39(4): 385-388.

[9] Marco Velasco-Velazquez,Xuanmao Jiao.CCR5 antagonist blocks metastasis of basal breast cancer cells[J].Cancer Reasearch,2012, 72(8):3839-3850.

[10] Aurelie Cazet,Marie Bobowski,Yoann Rombouts,et al.The gangalioside GD2 induces the constitutive activation of c-Met in MDAMB-231 breast cancer cells expressing the GD3 synthase[J]. Glycobiology,2012,22(6):806-816.

Expression of CCR5 and c-Met in Breast Cancer and Its Significance

ZHANG Yu-wen, WANG Dan, LIU Ya
(Department of Pathology, First People's Hospital of Shangqiu, Shangqiu 476000, China)

ObjectiveTo study the significance of CCR5 and c-Met expression in breast cancer.MethodsThe expression of CCR5 and c-Met in 45 cases of breast cancer was analyzed by using immunohistochemisty.ResultsCCR5 was expressed in 55.6% of cancerous breast tissue (25/45), whereas it was only expressed in 8.9% of normal breast tissue (4/45). Significant difference was noted between the expression levels (P＜0.01). c-Met was expressed in 51% of cancerous breast tissue (23/45), but only 6.6% (3/45) of normal tissue. The observed difference in expression level of c-Met was also statistically significant (P＜0.01). On the other hand, 44.4% (20/45) of breast cancer patients with lymph node metastasis showed co-expression of both c-Met and CCR5, compared to 22.2% (10/45) in the normal breast tissue. Our findings demonstrate significant associations between the expression of c-Met, CCR5 and lymph node metastasis in breast cancer patients.ConclusionCCR5 and c-Met expression was associated with poor prognosis of breast cancer patients, which could be predict the prognosis of breast cancer.

Breast cancer; CCR5; c-Met; Immunohistochemistry

R737.9

B

1671-8194（2014）23-0065-02