丁凱陽(yáng)，楊 艷，王 芳，張瑰紅，王志華

(1安徽醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院，合肥230001;2安徽醫(yī)科大學(xué))

彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤(DLBCL)是非霍奇金淋巴瘤最常見(jiàn)的類(lèi)型，在形態(tài)學(xué)、遺傳學(xué)和臨床表現(xiàn)上都具有明顯的異質(zhì)性［1］。近年來(lái)，以利妥昔單抗和蒽環(huán)類(lèi)藥物為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療方案已從根本上改善患者病情，但仍有30%以上的DLBCL患者在標(biāo)準(zhǔn)治療后復(fù)發(fā)或難治［2］。目前已發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子(NF)-κB在多發(fā)性骨髓瘤、淋巴瘤等腫瘤細(xì)胞中異?；罨?，是腫瘤預(yù)后不良的分子指標(biāo)之一［3］。2010年9月～2012年9月，我們檢測(cè)了DLBCL組織中NF-κB的表達(dá)，并探討其意義。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集安徽省立醫(yī)院82例DLBCL患者的腫瘤組織標(biāo)本，患者均資料齊全、未經(jīng)治療;由2名病理科主任醫(yī)師按2008年WHO淋巴系統(tǒng)腫瘤病理分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)，并與10例淋巴結(jié)反應(yīng)性增生組織對(duì)比進(jìn)行確診。其中男45例、女37例，年齡7～83歲;發(fā)病部位:淋巴結(jié)外53例，淋巴結(jié)內(nèi)29例;Ⅰ～Ⅱ期28例，Ⅲ～Ⅳ期54例。參照Hans等［4］的方法，分為生發(fā)中心B細(xì)胞樣(GCB)型17例和非生發(fā)中心B細(xì)胞樣(non-GCB)型65例。

1.2 方法

1.2.1 NF-κB檢測(cè)方法 所有標(biāo)本經(jīng)10%中性甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋切片。常規(guī)HE染色，確定為DLBCL組織。采用免疫組化法檢測(cè)NF-κB，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作，同時(shí)以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。陽(yáng)性表達(dá)判斷標(biāo)準(zhǔn)［5］:NF-κB p50陽(yáng)性染色定位在細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核，呈淡黃至棕黃色顆粒狀，見(jiàn)插頁(yè)Ⅱ圖4。每張切片于400倍光鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，根據(jù)平均陽(yáng)性細(xì)胞百分比及染色強(qiáng)度的乘積表示表達(dá)情況。染色強(qiáng)度無(wú)色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;陽(yáng)性細(xì)胞陰性為0分，＜10%為1分，10% ～50%為2分，50%～75%為3分，＞75%為4分。兩者乘積≥3為陽(yáng)性，0～3為陰性。

圖4 NF-κB陽(yáng)性表達(dá)

1.2.2 預(yù)后觀察方法 隨訪時(shí)間從確診之日到2012年4月30日或死亡之日。隨訪資料來(lái)源于病例記錄或電話聯(lián)系，記錄患者的生存情況。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。率的比較采用χ2檢驗(yàn)，Kaplan-Meier方法繪制生存曲線，存活期比較采用Log-rank檢驗(yàn)。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NF-κB表達(dá)及其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 NF-κB表達(dá)陽(yáng)性、陰性各41例。NF-κB陽(yáng)性表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系，見(jiàn)表1。

表1 NF-κB陽(yáng)性表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系［例(%)］

2.2 生存情況比較 隨訪76例，失訪6例，隨訪率92.68%，隨訪時(shí)間0.5～73個(gè)月;其中46例死亡，死亡率60.53%。76例患者 Log-rank檢驗(yàn)結(jié)果顯示，GCB型患者存活期為4～64個(gè)月，non-GCB型為0.5～41個(gè)月，P ＜0.05。NF-κB 表達(dá)陽(yáng)性患者存活期為0.5～73個(gè)月，陰性為1～73個(gè)月，P ＞0.05。GCB型中，NF-κB表達(dá)陽(yáng)性患者存活期為10～64個(gè)月，陰性為4～61個(gè)月，P ＞0.05;non-GCB 型中，NF-κB表達(dá)陽(yáng)性患者存活期為0.5～73個(gè)月，陰性為1～73 個(gè)月，P ＞0.05。

3 討論

NF-κB在DLBCL細(xì)胞中持續(xù)活化，其過(guò)表達(dá)可能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖及腫瘤的惡性進(jìn)展。p50是NF-κB蛋白的亞單位，目前免疫組化法檢測(cè)NF-κB蛋白抗體多采用 p50。研究證實(shí)，DLBCL患者中non-GCB型較GCB型發(fā)病率高、生存期短。本研究發(fā)現(xiàn)，NF-κB在non-GCB型中的表達(dá)率為56.92%，高于 GCB型的 23.53%，與國(guó)內(nèi)學(xué)者的研究相似［6，7］。這可能與 non-GCB 型 DLBCL 細(xì)胞來(lái)源于后生發(fā)中心B細(xì)胞向漿細(xì)胞分化過(guò)程中的某個(gè)階段，從而高表達(dá)BCR途徑活化的靶基因有關(guān)。體外實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，抑制NF-κB信號(hào)傳導(dǎo)通路對(duì)non-GCB型DLBCL細(xì)胞株是有毒性的，而對(duì)GCB型DLBCL細(xì)胞株增殖沒(méi)有影響［8］。Davis等［9］研究表明，NF-κB的靶基因在很多ABC-DLBCL細(xì)胞系中明顯高表達(dá)，而在GCB型DLBCL細(xì)胞中低表達(dá)。因此，NF-κB信號(hào)通路活化可能是活化B細(xì)胞樣(ABC)-DLBCL細(xì)胞系的共同特征，NF-κB的作用可能是在其他癌基因的作用下阻止腫瘤細(xì)胞凋亡，促進(jìn)其轉(zhuǎn)化。

從臨床治療方面看，傳統(tǒng)聯(lián)合化療(CHOP)后的ABC-DLBCL患者預(yù)后比GCB型患者差［10］。NF-κB信號(hào)傳導(dǎo)通路異?；罨磉_(dá)一些與腫瘤侵襲性生長(zhǎng)有關(guān)的靶基因可以解釋臨床上這種差異性，故檢測(cè)NF-κB有利于亞型與預(yù)后的判斷。異常的NF-κB活化可以促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)，也可使腫瘤細(xì)胞對(duì)化療和放療產(chǎn)生抑制。體外實(shí)驗(yàn)證明，利妥昔單抗可抑制NF-κB活性，但是經(jīng)利妥昔單抗聯(lián)合CHOP化療后的DLBCL預(yù)后在兩組間無(wú)差異性，所以這一結(jié)果對(duì)于臨床有何意義仍未知［11］。

目前，針對(duì)NF-κB通路的藥物尚在進(jìn)一步研究中，臨床上泛蛋白水解酶抑制劑硼替佐咪多用于治療復(fù)發(fā)性難治性多發(fā)性骨髓瘤。研究表明，經(jīng)過(guò)6個(gè)周期的CHOP聯(lián)合硼替佐咪治療后，88%的DLBCL患者獲得了完全緩解，2年無(wú)病生存率和總生存率都達(dá)到了100%［12］。本研究中，NF-κB表達(dá)陽(yáng)性、陰性患者存活期未見(jiàn)明顯差異，可能與未使用或少數(shù)使用恩扎妥啉及硼替佐咪有關(guān)，有待于延長(zhǎng)隨訪時(shí)間、增加病例數(shù)或加入阻斷NF-κB活化的藥物等進(jìn)一步研究。

綜上所述，NF-κB在non-GCB型的表達(dá)率高于GCB型，而non-GCB型患者的生存期較GCB型明顯縮短。檢測(cè)DLBCL中NF-κB的表達(dá)有利于判斷臨床亞型和預(yù)后，并為選擇性使用NF-κB抑制劑提供理論依據(jù)。隨著分子生物學(xué)和免疫學(xué)的發(fā)展，NF-κB的作用機(jī)制將成為下一步研究的重點(diǎn)。

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