劉嵐 許勇峰

實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜視網(wǎng)膜炎小鼠模型的建立及觀察

劉嵐 許勇峰

目的 研究實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜視網(wǎng)膜炎(EAU)的小鼠模型的發(fā)生規(guī)律及特征。方法 6~8周B10.RIII小鼠, 用人源性IRBP肽161-180與完全弗氏佐劑混合注射于小鼠建立模型。觀察小鼠眼部表現(xiàn), 小鼠眼球病理切片, 光鏡觀察記錄不同時(shí)間點(diǎn)小鼠的炎癥情況。結(jié)果 EAU小鼠視網(wǎng)膜炎癥出現(xiàn)在第14~21天, 表現(xiàn)為結(jié)膜充血, 前房混濁, 虹膜后粘連, 眼底視網(wǎng)膜水腫充血。病理切片見(jiàn)玻璃體腔炎癥細(xì)胞, 視網(wǎng)膜水腫, 各層結(jié)構(gòu)紊亂, 炎癥浸潤(rùn), 血管周?chē)? 網(wǎng)膜內(nèi)肉芽腫等。結(jié)論 用IRBP161-180肽成功誘導(dǎo)B10.RIII鼠建立EAU模型, 為人類葡萄膜炎的研究奠定了良好的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜視網(wǎng)膜炎；小鼠；IRBP肽

葡萄膜炎是一種累及葡萄膜、視網(wǎng)膜、視網(wǎng)膜血管及玻璃體的常見(jiàn)眼病, 其病程長(zhǎng), 治療棘手, 在致盲眼病中有重要地位［1］。自身免疫性葡萄膜視網(wǎng)膜炎(EAU)的動(dòng)物模型是研究葡萄膜炎的重要工具, 但國(guó)內(nèi)動(dòng)物模型主要建立在大鼠,本文以B10.RIII小鼠為動(dòng)物, 通過(guò)免疫IRBP肽建立EAU小鼠模型, 通過(guò)臨床表現(xiàn)、病理切片對(duì)其炎癥程度進(jìn)行觀察分級(jí), 為葡萄膜炎的研究奠定了基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1. 1 動(dòng)物 B10.RIII實(shí)驗(yàn)小鼠6~8周齡, 體重18~24g。小鼠動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)操作符合動(dòng)物倫理委員會(huì)的標(biāo)準(zhǔn)。

1. 2 EAU小鼠模型的建立與觀察 人源性IRBP肽161-180由上海生物有限公司委托合成。IRBP肽與弗氏佐劑1:1混合,適齡B10.RIII小鼠麻醉后皮下注射, 并給予腹腔注射1.0 μg白喉毒素。對(duì)照組小鼠皮下注射磷酸緩沖溶液。

通過(guò)裂隙燈觀察小鼠眼前節(jié)情況并予記錄, 直接眼底鏡觀察眼后段情況。小鼠在免疫后處死, 取出眼球, 病理切片, H-E染色。參照Caspi.等［2］評(píng)分如下：0.5分, 局部單核細(xì)胞浸潤(rùn)至視網(wǎng)膜；1分, 單核細(xì)胞浸潤(rùn)至血管旁及玻璃體腔；2分, 視網(wǎng)膜內(nèi)肉芽腫形成, 閉塞性血管炎伴視網(wǎng)膜脫離, 光感受器層丟失；3分, 以上伴視網(wǎng)膜色素上皮層內(nèi)肉芽腫,視網(wǎng)膜下新生血管；4分, 3分的病變侵犯更深更廣范圍。

2 結(jié)果

2. 1 EAU的臨床表現(xiàn) 建立EAU的小鼠表現(xiàn)為雙眼結(jié)膜睫狀充血, 角膜混濁水腫, 羊脂狀KP形成, 前房混濁, 虹膜后粘連, 玻璃體混濁滲出, 眼底視網(wǎng)膜水腫, 血管充血, 黃白色滲出物。

2. 2 EAU的病理改變 正常小鼠玻璃體腔透明, 視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)清晰, 排列規(guī)則。

EAU小鼠玻璃體腔大量炎癥細(xì)胞及滲出, 視網(wǎng)膜水腫,各層結(jié)構(gòu)紊亂, 視神經(jīng)纖維層和視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞層增厚, 見(jiàn)炎癥細(xì)胞, 閉塞性血管周?chē)? 層間可見(jiàn)肉芽腫形成, 部分見(jiàn)視網(wǎng)膜脫離, 視錐視桿層明顯皺褶, 部分消失, 按上述標(biāo)準(zhǔn)給予評(píng)分。小鼠注射IRBP后, 通過(guò)病理切片記錄炎癥出現(xiàn)、高峰及消退的時(shí)間, 小鼠視網(wǎng)膜炎癥出現(xiàn)第14~21天, 炎癥5~6周開(kāi)始消退。

3 討論

葡萄膜炎為我國(guó)致盲眼病的防治重點(diǎn), 但其發(fā)病機(jī)制仍不清楚。近年來(lái)葡萄膜炎的動(dòng)物模型作為研究的重要組成部分得到重視。本文以B10.RIII小鼠為研究對(duì)象, 首次系統(tǒng)性研究了小鼠EAU模型的臨床表現(xiàn)、發(fā)病時(shí)間和病理特征, 為葡萄膜炎研究奠定了良好的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

我國(guó)葡萄膜炎的模型多建立在大鼠上, 采用Lewis或Wistar大鼠, 用提取的S抗原免疫動(dòng)物。大鼠模型發(fā)生時(shí)間早,炎癥1~4 d達(dá)高峰, 6~9 d消退, 炎癥程度重, 更趨向一種急性炎癥反應(yīng)［3］。而人類葡萄膜炎多為慢性, 具有明顯的反復(fù)性。以往研究也用過(guò)豬、猴等動(dòng)物, 但都與人類有較大差異,且遺傳背景不清, 不能對(duì)其展開(kāi)深入研究。

近交系小鼠是現(xiàn)在科研中最為常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物, 其遺傳背景清楚, 相關(guān)實(shí)驗(yàn)資源豐富。小鼠EAU模型需具有一定遺傳背景, 并非所有品系小鼠均可成功誘導(dǎo)。本研究中采用B10.RIII小鼠, IRBP肽誘導(dǎo)的葡萄膜炎發(fā)生時(shí)間晚, 持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng), 病理表現(xiàn)光感受器層部分破壞, 這些特征均說(shuō)明小鼠可更好地模擬人類葡萄膜炎的發(fā)生。且小鼠的實(shí)驗(yàn)資源豐富, 故小鼠EAU模型的建立為研究人類葡萄膜炎的奠定了良好的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

［1］ Sheu, S J. Update on uveomeningoencephalitides. Curr Opin Neurol, 2005,18(3):323-339.

［2］ Chan C C. Pathology of experimental autoimmune uveoretinitis in mice. J Autoimmun, 1990,3(3):247-255.

［3］ Wildner G M. Diedrichs-Mohring Thurau S R. Rat models of autoimmune uveitis. Ophthalmic Res, 2008,40(3-4):141-144.

浙江省教育廳資助科研項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)：Y201328272)

310003 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院眼科 (劉嵐)；浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科(許勇峰)