李志平,趙希青,,趙詩(shī)情,,張慧,劉燕,肖若蕾

(1.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所,北京 100850;2.湖北科技學(xué)院藥學(xué)院,咸寧 437100)

紫杉醇熱敏脂質(zhì)體的制備與質(zhì)量控制

李志平1,趙希青1,2,趙詩(shī)情1,2,張慧1,劉燕1,肖若蕾2

(1.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所,北京 100850;2.湖北科技學(xué)院藥學(xué)院,咸寧 437100)

目的 制備紫杉醇熱敏脂質(zhì)體,建立測(cè)定其含量、有關(guān)物質(zhì)及溶血磷脂的方法,考察其含量、有關(guān)物質(zhì)、溶血磷脂量以及體外溶血性。方法采用高效液相色譜(HPLC)-紫外法檢測(cè)制劑含量及有關(guān)物質(zhì),HPLC-電霧式檢測(cè)器檢測(cè)制劑中溶血磷脂單棕櫚酰磷脂酰膽堿的量,并對(duì)檢測(cè)方法進(jìn)行驗(yàn)證;分光光度法測(cè)定體外溶血百分率。結(jié)果紫杉醇在60.39～181.17 μg·mL-1范圍內(nèi)峰面積與濃度線性關(guān)系良好,回收率及精密度實(shí)驗(yàn)均符合要求;有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法專(zhuān)屬性、靈敏度和系統(tǒng)適用性均符合要求;溶血磷脂測(cè)定方法的專(zhuān)屬性和靈敏度符合有關(guān)規(guī)定,在1.5～50.0 μg·mL-1范圍內(nèi)峰面積與濃度線性關(guān)系良好,回收率、重復(fù)性均符合要求;3批自制紫杉醇熱敏脂質(zhì)體的含量在90.0%～110.0%之間,單個(gè)雜質(zhì)含量均＜0.5%,總雜質(zhì)含量均＜2.0%,體外基本不引起溶血。結(jié)論含量、有關(guān)物質(zhì)及溶血磷脂檢測(cè)方法均可用于紫杉醇熱敏脂質(zhì)體的質(zhì)量評(píng)價(jià),自制紫杉醇熱敏脂質(zhì)體各項(xiàng)指標(biāo)均符合要求,且質(zhì)量穩(wěn)定。

紫杉醇熱敏脂質(zhì)體;溶血性;色譜法,高效液相;質(zhì)量控制

紫杉醇(paelitaxel)是目前應(yīng)用于臨床的一線廣譜抗腫瘤藥物[1-2],但市售制劑(如注射劑及注射用紫杉醇脂質(zhì)體)可產(chǎn)生肝臟毒性、神經(jīng)毒性和心血管毒性等多種嚴(yán)重不良反應(yīng),這不僅與藥物自身性質(zhì)有關(guān),同時(shí)也與制劑中使用的輔料、溶媒如聚氧乙烯蓖麻油(cremophor EL)、無(wú)水乙醇,以及制劑形式有關(guān)[2-3]。為降低輔料及溶媒所產(chǎn)生的毒性和不良反應(yīng),增加病灶局部的藥量,降低全身副作用,本實(shí)驗(yàn)室制備了紫杉醇熱敏脂質(zhì)體(long-circulating temperature-sensitive liposomes with paclitaxel,LTSLP)[4-5],該制劑經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)具有增效減毒效果,具有良好的應(yīng)用前景。為保證所制備LTSLP的質(zhì)量,筆者在本實(shí)驗(yàn)中對(duì)LTSLP進(jìn)行了系統(tǒng)的質(zhì)量研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀(Hitachi公司,2130型), Corona電霧式檢測(cè)器(美國(guó)ESA公司),色譜柱(Agilent,Vensuil XBP C8,4.6 mm×250 mm,5 μm)。

1.2 試藥 紫杉醇原料(桂林暉昂生物制藥有限公司,批號(hào):JF20090303,純度:99.9%)。二棕櫚酰磷脂酰膽堿(dipalmitoyl phosphatidylcholine,DPPC,批號(hào): A71289,純度:99.8%)、溶血磷脂單棕櫚酰磷脂酰膽堿(monostearoylphosphatidylcholine,MSPC,批號(hào): B70309,純度:99.1%)、甲氧基聚乙二醇磷脂酰乙醇胺(monomethoxypolyethyleneglycol-distearoyl phosphatidylethanlamine,mPEG-DSPE,批號(hào):K0986,純度:99.8%)、蛋黃卵磷脂(egg phosphatidylcholine, EPC,批號(hào):108072-3,純度:98.6%),二硬脂酰磷脂酰甘油(distearoyl phoaphatidyl glycerol,DSPG,批號(hào): 1010902,純度:99.0%)均購(gòu)自Avanti polar lipids公司,紫杉醇對(duì)照品(批號(hào):100382-200701,純度: 99.6%)、三杉尖寧堿(雜質(zhì)A,批號(hào):100926-200701)、10-去乙酰基7-表紫杉醇(雜質(zhì)B,批號(hào):100925-200701)及7-表紫杉醇(雜質(zhì)C,批號(hào):100927-200701)對(duì)照品均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院;甲醇為色譜純,其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 LTSLP的制備 采用薄膜分散法制備LTSLP。分別稱(chēng)取處方量的DPPC、MSPC、mPEG-DSPE、DSPG、EPC及紫杉醇置于茄形瓶中,加入適量三氯甲烷溶解,然后在抽真空條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑,以形成磷脂膜;向磷脂膜中加入10 mmol·L-1磷酸鹽緩沖溶液(pH7.0),在60℃條件下水化30 min,所形成的混懸液在氮?dú)饬飨陆?jīng)200 nm聚碳酸酯膜均質(zhì)擠出即得LTSLP[6]。

2.2 LTSLP質(zhì)量研究

2.2.1 性狀 所制備的3批樣品均為略帶藍(lán)色乳光的半透明液體。

2.2.2 含量測(cè)定

2.2.2.1 檢測(cè)方法 取LTSLP適量,置于50 mL量瓶,加甲醇-冰醋酸(400∶1)使溶解并稀釋至刻度,搖勻,精密量取10 μL注入液相色譜儀,進(jìn)行分析;另取紫杉醇對(duì)照品適量,精密稱(chēng)定,同法測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算其中紫杉醇的含量[7]。

HPLC參數(shù):流動(dòng)相為乙腈-水(30∶70,V/V);流速1.0 mL·min-1;色譜柱:Venusil XBP-C8(4.6 mm× 250 mm,5 μm);檢測(cè)波長(zhǎng)227 nm;柱溫25℃;進(jìn)樣量10 μL。

2.2.2.2 方法學(xué)驗(yàn)證 ①專(zhuān)屬性:分別配制空白輔料及紫杉醇對(duì)照品的甲醇-冰醋酸(400∶1)溶液作為對(duì)照溶液,按照“2.2.2.1”項(xiàng)方法考察紫杉醇含量檢測(cè)方法的專(zhuān)屬性。結(jié)果表明,紫杉醇峰形良好,空白輔料不干擾其測(cè)定,說(shuō)明本色譜方法的專(zhuān)屬性良好。

②線性關(guān)系:取紫杉醇對(duì)照品適量,精密稱(chēng)定,用甲醇-冰醋酸(400∶1)溶解并稀釋至刻度,配制成濃度約為0.4 mg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,然后分別稀釋成濃度約為60,80,100,120,140,160,180 μg·mL-1的系列溶液,照“2.2.2.1”中方法檢測(cè),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明,紫杉醇峰面積與濃度間的線性回歸方程為:Y= 465 684X+878 444,r=0.999 8,說(shuō)明紫杉醇在60.39～181.17 μg·mL-1范圍內(nèi)峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。

③回收率:取紫杉醇對(duì)照品適量精密稱(chēng)定,用甲醇-冰醋酸(400∶1)溶解并稀釋至刻度,制備濃度約為0.5 mg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液;另取處方量的空白輔料置于量瓶中,精密加入標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液適量,配制成濃度分別為96 μg·mL-1(80%)、120 μg·mL-1(100%)、144 μg·mL-1(120%)的供試液,每個(gè)濃度平行配制3份;另平行配制濃度為120 μg·mL-1的對(duì)照溶液2份。照“2.2.2.1”項(xiàng)方法檢測(cè),計(jì)算回收率。結(jié)果表明,各樣品的回收率均在98%～102%之間,高、中、低濃度的平均回收率分別為100.20%,98.45%, 98.88%,RSD為0.94%,均符合要求。

④重復(fù)性和精密度:精密量取LTSLP適量,加甲醇-冰醋酸(400∶1)溶解并稀釋至刻度,配制成濃度約為120 μg·mL-1的供試液,平行制備6份,照“2.2.2.1”項(xiàng)方法檢測(cè),計(jì)算樣品中主藥含量及其RSD。結(jié)果表明,6份樣品的含量在95.60%～99. 79%之間,RSD為1.69%,表明方法的重復(fù)性良好。

照重復(fù)性實(shí)驗(yàn)方法,改變檢測(cè)時(shí)間、分析人員及檢測(cè)儀器,測(cè)定LTSLP中紫杉醇的含量,計(jì)算重復(fù)性及中間精密度實(shí)驗(yàn)中共12份樣品的含量及其RSD。結(jié)果表明,12份樣品的含量在95.26%～99.79%之間, RSD為1.53%,表明方法的中間精密度良好。

⑤溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn):精密量取LTSLP適量,用甲醇-冰醋酸(400∶1)配制成濃度約為120 μg·mL-1的供試液,室溫避光保存分別于0,0.5,1,1.5,2,4 h照“2.2.2.1”項(xiàng)方法檢測(cè)。結(jié)果表明,放置不同時(shí)間后紫杉醇峰面積的RSD為1.08%,說(shuō)明樣品溶液在室溫避光條件下放置4 h穩(wěn)定。

綜合以上結(jié)果,該含量測(cè)定方法準(zhǔn)確可靠,可用于LTSLP中紫杉醇的含量測(cè)定。

2.2.2.3 自制樣品中紫杉醇含量的檢測(cè) 分別對(duì)3批LTSLP中紫杉醇的含量進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明,3批樣品中紫杉醇的含量分別為100.5%,97.5%及104.0%,均在90.0%～110.0%之間。

2.2.3 有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)

2.2.3.1 檢測(cè)方法 取LTSLP適量,加入甲醇-冰醋酸-三氯甲烷(400∶1∶100)混合溶液適量破膜,渦旋使之溶解,定容后搖勻,用孔徑0.45 μm有機(jī)膜濾過(guò),制備成濃度約為0.5 mg·mL-1的供試液,按照含量測(cè)定方法進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)[7]。

2.2.3.2 方法學(xué)驗(yàn)證 ①專(zhuān)屬性:配制空白溶劑及空白輔料溶液,按照有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法檢測(cè);另取LTSLP、空白輔料以及空白溶劑適量置10 mL量瓶,分別于0.5 mol·L-1鹽酸(HCl)、0.5 mol·L-1氫氧化鈉(NaOH)、30%過(guò)氧化氫(H2O2)、強(qiáng)光[(4 500± 500)lx]以及100℃條件下放置不同時(shí)間,使紫杉醇的降解程度為10%～30%,加入甲醇-冰醋酸-三氯甲烷(400∶1∶100)混合溶液溶解并定容,按照有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示,空白溶劑及空白輔料不干擾紫杉醇及其有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定;LTSLP經(jīng)強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、氧化、光照及高溫破壞后,所產(chǎn)生的降解產(chǎn)物與主藥以及降解產(chǎn)物之間均能良好分離,空白輔料及空白溶劑均不影響主藥以及降解產(chǎn)物的測(cè)定,說(shuō)明本方法專(zhuān)屬性良好。

②系統(tǒng)適用性:取紫杉醇、雜質(zhì)A、雜質(zhì)B和雜質(zhì)C對(duì)照品適量,用甲醇-冰醋酸-三氯甲烷(400∶1∶100)混合溶液溶解并稀釋制成約含0.5 mg·mL-1紫杉醇、2.5 μg·mL-1雜質(zhì)A、2.5 μg·mL-1雜質(zhì)B和2.5 μg·mL-1雜質(zhì)C的溶液,作為系統(tǒng)適用性供試溶液。照有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法檢測(cè)。結(jié)果表明,紫杉醇及各已知雜質(zhì)峰之間的分離度均>2.51,理論板數(shù)均> 14 280,且重復(fù)進(jìn)樣6次,各峰面積的RSD均＜0.52%,說(shuō)明本方法的系統(tǒng)適用性良好。

③靈敏度:精密量取紫杉醇、雜質(zhì)A、雜質(zhì)B和雜質(zhì)C對(duì)照品適量,用甲醇-冰醋酸-三氯甲烷(400∶1∶100)混合溶液溶解并稀釋至不同濃度,照有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法檢測(cè),測(cè)定紫杉醇及各已知雜質(zhì)的檢測(cè)限和定量限。結(jié)果表明,紫杉醇、雜質(zhì)A、雜質(zhì)B和雜質(zhì)C的檢測(cè)限分別為1.5,1.5,1.5,3 ng,定量限分別為4,4, 4,11 ng。

綜合以上結(jié)果,該有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法專(zhuān)屬性好,靈敏度高,可用于LTSLP中紫杉醇的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定。

2.2.3.3 自制樣品有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè) 分別對(duì)3批自制LTSLP中的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果表明,3批樣品中雜質(zhì)A的含量分別為0.22%,0.23%及0.21%,其他最大單個(gè)雜質(zhì)的含量分別為0.29%,0.25%及0.26%,總雜質(zhì)的含量分別為0.82%,0.71%及0.75%?！吨腥A人民共和國(guó)藥典》2010年版中收載了紫杉醇相關(guān)制劑,要求雜質(zhì)Ⅰ(雜質(zhì)Ⅰ峰面積乘以校正因子1.26)與其他單個(gè)雜質(zhì)均不得超過(guò)0.5%,各雜質(zhì)之和不得超過(guò)2.0%,因此自制LTSLP的有關(guān)物質(zhì)符合《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版要求。

2.2.4 溶血磷脂MSPC的檢測(cè)

2.2.4.1 檢測(cè)方法 取LTSLP適量,置于50 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,采用HPLC-CAD法測(cè)定溶血磷脂含量。HPLC參數(shù):流動(dòng)相A為甲醇,流動(dòng)相B為0.1 moL·L-1醋酸胺緩沖液(pH4.8),流速1 mL·min-1,色譜柱為Vensuil XBP C8(4.6 mm× 250 mm,5 μm),柱溫30℃,進(jìn)樣量10 μL,洗脫方法為梯度洗脫,洗脫程序見(jiàn)表1。Corona檢測(cè)器參數(shù):氣源:氮?dú)?工作氣壓:35 psi;濾波時(shí)間參數(shù):低;滿量程輸出范圍:200pA。

表1 溶血磷脂含量測(cè)定的梯度洗脫程序Tab.1 Gradientelutionprogramforcontent determination of MSPC

2.2.4.2 方法學(xué)驗(yàn)證 ①專(zhuān)屬性:分別配制DPPC、MSPC、mPEG-DSPE、DSPG、EPC及紫杉醇對(duì)照品的甲醇溶液作為對(duì)照溶液,按照“2.2.4.1”項(xiàng)方法考察溶血磷脂的專(zhuān)屬性。結(jié)果見(jiàn)圖1。由圖1可知,溶血磷脂(MSPC)的出峰時(shí)間合理,峰形良好,且MSPC與相鄰峰的分離度均>3,其他物質(zhì)不干擾MSPC的測(cè)定,說(shuō)明本色譜方法的專(zhuān)屬性良好。

②靈敏度:取一定濃度的MSPC標(biāo)準(zhǔn)溶液,用甲醇倍比稀釋后,按照“2.2.4.1”方法檢測(cè),考察檢測(cè)限和定量限,結(jié)果見(jiàn)圖2。結(jié)果表明,MSPC的檢測(cè)限和定量限分別為4和12 ng。

1.MSPC;2.紫杉醇圖1 MSPC(A)及TSLP(B)的HPLC色譜圖1.MSPC;2.paslitaxelFig.1 HPLC chromatagrams of MSPC(A)and TSLP (B)

圖2 MSPC的檢測(cè)限(A)及定量(B)限色譜圖Fig.2 Chromatagrams of MSPC at the limits of detection(A)and quantification(B)

③線性關(guān)系考察:精密稱(chēng)取MSPC適量置于量瓶中,以甲醇溶解定容后配制成濃度約為100 μg·mL-1的儲(chǔ)備液,分別稀釋成濃度為1.5,10,20,30及50 μg ·mL-1標(biāo)準(zhǔn)溶液,按照“2.2.4.1”方法檢測(cè),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果MSPC峰面積與濃度的線性回歸方程為Y=16 087X+10 895,r為0.999 8,說(shuō)明MSPC在1.5～50.0 μg·mL-1范圍內(nèi)峰面積與濃度線性關(guān)系良好。

④重復(fù)性:精密吸取LTSLP適量至50 mL量瓶,用甲醇破膜溶解,配制成MSPC濃度約為30 μg·mL-1的溶液,平行配制6份,按照“2.2.4.1”項(xiàng)方法檢測(cè)。結(jié)果表明,實(shí)測(cè)MSPC含量平均為1.73 mg·mL-1,6份樣品測(cè)定結(jié)果的RSD為1.77%,說(shuō)明方法的重復(fù)性良好。

⑤回收率:分別按處方比例精密稱(chēng)取除MSPC外的原輔料置100 mL量瓶,以甲醇溶解后定容,作為空白輔料溶液;精密吸取MSPC對(duì)照溶液至相應(yīng)比例的空白輔料溶液中,配制濃度分別為24 μg·mL-1(80%)、30 μg·mL-1(100%)、36 μg·mL-1(120%)的供試液,每個(gè)濃度平行配制3份;另平行配制濃度為30 μg·mL-1的MSPC對(duì)照溶液2份;按照“2.2.4.1”項(xiàng)下方法檢測(cè),考察方法的回收率。結(jié)果各樣品的回收率均在98%～102%,高、中、低濃度的平均回收率分別為101.63%,99.00%,101.04%,RSD＜2%,符合要求。

綜合以上結(jié)果,該溶血磷脂測(cè)定方法準(zhǔn)確、可靠、靈敏度高,可用于LTSLP中溶血磷脂的檢測(cè)。

2.2.3.3 自制樣品中溶血磷脂的含量檢測(cè) 分別對(duì)3批自制LTSLP中的溶血磷脂進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明,3批樣品中的溶血磷脂MSPC的量分別為1.71,1.73及1.69 mg·mL-1。《英國(guó)藥典》2010年版丙泊酚注射劑標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定溶血磷脂限度不得大于2 mg·mL-1[8],參照這一標(biāo)準(zhǔn),本品中溶血磷脂量低于2 mg·mL-1,符合《英國(guó)藥典》2010年版要求。

2.2.3.4 體外溶血性考察 取兔耳緣靜脈血10 mL,加入玻璃珠振搖10 min后,加入10倍量5%葡萄糖溶液,搖勻,3 000 r·min-1離心5 min(r=5 cm),除去上清液,所得紅細(xì)胞沉淀繼續(xù)用5%葡萄糖溶液洗滌至上清液不顯紅色,離心,棄去上清液,得紅細(xì)胞。取紅細(xì)胞2 mL,用5%葡萄糖溶液配成2%混懸液100 mL,備用。

取潔凈試管5只,1～3號(hào)管作為供試品管,4號(hào)管為陰性對(duì)照管,5號(hào)管為陽(yáng)性對(duì)照管。根據(jù)LTSLP的臨床應(yīng)用方案,以稀釋5倍后的LTSLP為樣品溶液,即:1～3號(hào)管中加入用5%葡萄糖溶液稀釋5倍后的LTSLP懸液2.5 mL,4號(hào)管中加入5%葡萄糖溶液2.5 mL,然后向1～4號(hào)管中分別加入2%紅細(xì)胞混懸液2.5 mL,搖勻,備用。5號(hào)管中加入2%紅細(xì)胞混懸液2.5 mL后,3 000 r·min-1離心5 min(r=5 cm),吸取上層無(wú)色溶液1.5 mL后,加入純化水4 mL,搖勻,備用。將各試管置(37±0.5)℃水中溫育3 h, 3 000 r·min-1離心5 min(r=5 cm)后,取適量上清液,稀釋后于波長(zhǎng)398 nm處測(cè)定吸光度,計(jì)算溶血百分率[9]。

結(jié)果3批樣品溶血百分率分別為2.67%,3.12%和2.54%,說(shuō)明本品基本不引起溶血作用。

3 討論

溶血磷脂可以增加分子滲透、殺菌、溶血以及藥物親和性等[5],這使得溶血磷脂具有誘使細(xì)胞形狀改變、促進(jìn)細(xì)胞融合、引起溶血以及改變細(xì)胞滲透性等特點(diǎn)[10]。YEAGLE和MARTIN等[10-11]研究結(jié)果證明,僅在高濃度下溶血磷脂才會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞溶血,低濃度的溶血磷脂能夠抑制細(xì)胞膜融合,這可能與低濃度溶血磷脂可誘使磷脂脂質(zhì)體呈交插脂雙層結(jié)構(gòu)而抑制膜融合有關(guān)。

本研究在LTSLP中加入了少量溶血磷脂MSPC,以實(shí)現(xiàn)在相變溫度下藥物迅速釋放的目的。為進(jìn)一步控制溶血磷脂的含量,避免在該熱敏脂質(zhì)體貯存及使用過(guò)程中溶血磷脂量超標(biāo),筆者在本實(shí)驗(yàn)中建立了檢測(cè)溶血磷脂含量的方法。目前用于測(cè)定磷脂組成的方法中,HPLC法以操作簡(jiǎn)便、耗時(shí)少、成本低等特點(diǎn)成為磷脂分析的主流方法,所采用的檢測(cè)器多為紫外檢測(cè)器(ultraviolet detector,UV)、紅外檢測(cè)器(infrared detector,IR)、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(evaporative light scattering detector,ELSD)和電霧檢測(cè)器(charged aerosol detector,CAD)。采用UV及IR時(shí),磷脂的檢測(cè)靈敏度低,基線不穩(wěn)定[12];ELSD和CAD屬于新型檢測(cè)器,兩者均能消除梯度洗脫和流動(dòng)相造成的分析檢測(cè)方面的不良影響。CAD作為一種獨(dú)特的通用檢測(cè)技術(shù),不同于ELSD檢測(cè)器響應(yīng)值與組分質(zhì)量的對(duì)數(shù)關(guān)系,更便于計(jì)算,且具有更高的靈敏度和更好的重復(fù)性[13]。筆者在本實(shí)驗(yàn)中利用HPLC-CAD建立了一種檢測(cè)LTSLP中溶血磷脂含量的方法,流動(dòng)相采用了緩沖鹽-有機(jī)溶劑體系,使得基線更為平穩(wěn),使其靈敏度提高了將近20倍[14-15]。

長(zhǎng)循環(huán)熱敏脂質(zhì)體屬于一種新型藥物遞送載體,目前尚無(wú)上市產(chǎn)品,其質(zhì)量控制無(wú)成熟標(biāo)準(zhǔn)可供參考。尚需進(jìn)一步完善有關(guān)質(zhì)量控制指標(biāo),如脂質(zhì)體電位、脂質(zhì)體的包封體積、體外釋放行為、滲透性以及光散射指數(shù)等。

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DOI 10.3870/yydb.2014.11.024

Preparation and Quality Control of Thermo-sensitive Paclitaxel Liposomes

LI Zhi-ping1,ZHAO Xi-qing1,2,ZHAO Shi-qing1,2,ZHANG Hui1,LIU Yan1,XIAO Ruo-lei2
(1.Institute of Pharmacology and Toxicology,Academy of Military Medical Sciences,Beijing 100850,China;2.Department of Pharmacy,Hubei University of Science and Technology,Xianning 437100,China)

ObjectiveTo prepare long-circulating temperature-sensitive liposomes with paclitaxel(LTSLP),develop methods for determination of paclitaxel,related substances and monostearoyl phosphatidylcholine(MSPC)in LTSLP,and the haemolysis of LTSLP invitro.MethodsHPLC-UV methods for paclitaxel content and related substances and HPLC-CAD method for MSPC in LTSLP were established and validated.Spectrophotometric method was used to determine hemolysisin vitro.ResultsThere was a good linear relationship between peak area and concentration within the range of 60.39-181.17 μg·mL-1.Recovery and precision of the method for determination of paclitaxel content met the requirements.Specificity,sensitivity,and system suitability for related substances were consistent with requirements.There was a good linear relationship between peak area and concentration within the range of 1.5-50.0 μg·mL-1for the determination of MSPC with good specificity,sensitivity and recovery. Paclitaxel contents in three batches of self-prepared LTSLP were between 90.0%and 110.0%,single related substances were below 0.5%and total impurities were below 2.0%.There was almost no hemolysis invitro.ConclusionThe methods for determining paclitaxel content,related substances and haemolysis can be used to assess the quality of LTSLP.Self-produced LTSLP consistently meet the quality standards.

Thermo-sensitive liposomes with paclitaxel;Haemolysis;HPLC;Quantity control

R97;TQ460.6

B

1004-0781(2014)11-1486-05

2013-11-02

2013-12-05

李志平(1980-),女,河南濮陽(yáng)人,助理研究員,博士,研究方向:緩控釋制劑。電話:010-66932654,E-mail:dearwood2010@126.com。

肖若蕾,女,副教授,碩士生導(dǎo)師,研究方向:緩控釋制劑。電話:0715-8272135,E-mail:yxyxrl@163.com。