解彥平，王淑惠，何燕

(石家莊市疾病預(yù)防控制中心，河北石家莊 050019)

葡萄酒中的二氧化硫不僅可以作為細(xì)菌抑制劑，同時也是一種抗氧化劑，可以保護(hù)葡萄酒的天然水果特性，同時防止酒液的老化。二氧化硫含量過高，人體飲用后會引起急性中毒［1-2］。為了改善葡萄酒口感，甜蜜素被非法添加使用，如果過量使用，會引起食品安全問題，影響消費者的身體健康［3-4］。因此，葡萄酒中的二氧化硫和甜蜜素含量應(yīng)該在葡萄酒檢測中嚴(yán)格監(jiān)控。

我國現(xiàn)行的國標(biāo)法食品中的甜蜜素和二氧化硫的測定，分別采用氣相色譜法、化學(xué)法常規(guī)的化學(xué)分析法分開檢測。前處理過程繁瑣，穩(wěn)定性差，檢測時間長，有機試劑消耗多，檢測結(jié)果受實驗條件及人工操作等因素的影響較大［5-6］。

本文采用自動淋洗-電導(dǎo)抑制離子色譜法，采用離子交換固相萃取柱凈化，樣品無需衍生，操作簡便、快速，精密度和準(zhǔn)確度均符合要求，相對化學(xué)法，該方法實現(xiàn)兩種組分同時分析，節(jié)約成本，提高效率。

1 實驗部分

1.1 試劑與儀器

二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)溶液:環(huán)境保護(hù)部標(biāo)準(zhǔn)樣品研究所(GSB07-1273-2000)，濃度為 100 μg/mL;環(huán)己基氨基磺酸鈉:歐洲藥典(139-05-9)，100 mg;甲醇，色譜純;葡萄酒樣品，來自農(nóng)貿(mào)市場;實驗用水采用電阻率為18 MΩ·cm的超純?nèi)ルx子水。

ICS2000型離子色譜系統(tǒng)，配有EG40在線淋洗液系統(tǒng)、電導(dǎo)檢測器和 Chromeleon色譜工作站;T-460/H微波超聲振蕩器;SiGM2-16希格瑪離心機;Advantage A10型超純水機;0.22 μm微孔濾膜;On GuardⅡP、RP固相萃取柱。

1.2 樣品預(yù)處理

量取一定量葡萄酒樣品于錐形瓶中，加入超純?nèi)ルx子水，稀釋一定的倍數(shù)，微波超聲振蕩器上常溫振蕩10 min，以3 000 r/min離心5 min。上清液再經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過濾。待測液進(jìn)入色譜柱前依次通過預(yù)先活化的SPE固相萃取柱，以除去有機物大分子和色素。

1.3 色譜條件

色譜柱為 IonPacASⅡ-HC型陰離子分析柱(4.0 mm ×250 mm)，IonPacAGⅡ-HC 型陰離子保護(hù)柱(4.0 mm ×50 mm)，ASRS 抑制器(4 mm)，抑制器電流65 mA，淋洗液為26 mmol/L的KOH溶液，流速1.0 mL/min，進(jìn)樣體積25 μL，柱溫30 ℃。

1.4 固相萃取條件

分別用一定量的去離子水和甲醇活化SPE柱，活化過程中注意控制流速，使固相萃取小柱活化充分。葡萄酒樣品經(jīng)過固相萃取柱，控制同樣的滴速，并收集提取液。

1.5 樣品測定

提取液經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過濾后，直接上機測定，以峰面積定量，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程求出不同組分的含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線和檢出限

按標(biāo)準(zhǔn)方法配制甜蜜素和二氧化硫的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，按色譜條件進(jìn)行分析，結(jié)果見圖1、圖2。

圖1 甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Calibration curve of sodium cyclamate

圖2 二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2 Calibration curve of sulfur dioxide

以峰面積對濃度作回歸，得到兩種組分的線性范圍和相關(guān)系數(shù)等指標(biāo)(見表1)。準(zhǔn)確量取5.0 mL樣品，定容到50 mL，測得樣品中甜蜜素和二氧化硫的檢出限分別為 1.0，1.0 mg/L。實驗結(jié)果見表1，兩種組分在各自的測試濃度范圍內(nèi)質(zhì)量濃度ρ與峰面積 A都具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)都在0.999 0以上。加標(biāo)樣品色譜圖見圖3。

表1 甜蜜素和二氧化硫指標(biāo)Table 1 Parameters of sodium cyclamate and sulfur dioxide

圖3 加標(biāo)樣品色譜圖Fig.3 Chromatogram of spiked sample

2.2 精密度實驗

在相同的色譜條件下，將配制好的甜蜜素和二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行7次重復(fù)測定，結(jié)果見表2。

表2 精密度測定Table 2 Precision tests

由表2可知，這兩種標(biāo)準(zhǔn)品的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.52%，1.21%，方法的精密度良好，達(dá)到葡萄酒樣品中甜蜜素和二氧化硫的測定要求。

2.3 加標(biāo)回收率

在6種已知本底值的不同紅葡萄酒(750 mL)樣品中加入一定量標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照相同的色譜條件進(jìn)行測定，結(jié)果見表3。

表3 實際樣品測定及加標(biāo)回收結(jié)果Table 3 Results of recovery and determination of samples

2.4 淋洗液的選擇

甜蜜素溶于水，在堿性條件下帶負(fù)電荷，離子色譜對甜蜜素有所保留。同時，葡萄酒中的二氧化硫是以亞硫酸鹽形式存在，在酸性條件下易分解釋放出 SO2，SO32－在中性和堿性溶液中較穩(wěn)定［7-8］，因此，我們嘗試采用離子色譜法測定葡萄酒中的這兩種相對國標(biāo)法較復(fù)雜組分。實驗室采用KOH在線淋洗液系統(tǒng)，淋洗在線發(fā)生器的使用可以保證KOH的高純度和精確的濃度，消除人工配制淋洗液以及試劑雜質(zhì)、CO2引入的誤差，有利于得到穩(wěn)定的基線和小的噪聲，從而保證高的重現(xiàn)性和信噪比［9］。

2.5 色譜條件的選擇

為了達(dá)到最佳的分離效果和合理的保留時間，我們多次對色譜條件進(jìn)行優(yōu)化。增加流速，可縮短保留時間，分離效率并不明顯，我們選擇1.0 mL/min流速，在該條件下分離度和分析時間較合適。淋洗液的濃度越高，從固定相置換溶質(zhì)離子越有效，保留時間相應(yīng)會縮短，但淋洗液濃度過高將降低信噪比，造成背景電導(dǎo)偏高［10］。結(jié)合上述因素和色譜柱的使用情況，我們選擇淋洗液濃度為26 mmol/L的KOH溶液，儀器推薦的抑制器電流(65 mA)進(jìn)行測試，可以得到分離度很好的色譜峰形。

2.6 固相萃取處理

葡萄酒中的蛋白質(zhì)、樹脂、聚合物、色素可使酒具有膠體溶液的性質(zhì)，同時也是酒中的不穩(wěn)定因素，這些組分不僅會堵塞管道，而且還直接作用于分離柱，影響柱的性能和壽命，故選用固相萃取柱對葡萄酒樣品進(jìn)行前處理。OnGuardⅡ固相萃取柱基質(zhì)為二乙烯基苯高聚物，可選擇性吸附樣品基體中的疏水性化合物，從而實現(xiàn)樣品的有效凈化。同時RP柱還起到過濾作用，稍渾濁或有少量雜質(zhì)的樣品，過RP柱后樣液更清澈，有利于樣品分析和色譜柱保護(hù)［5］。

3 結(jié)論

結(jié)合固相萃取的樣品前處理技術(shù)，我們建立了一種快速測定葡萄酒中甜蜜素和二氧化硫的方法。相對國標(biāo)方法，該方法步驟和操作簡便，其精密度和靈敏度符合要求，適用于批量葡萄酒這兩種組分的測定分析。

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