劉吉福+梁海龍+武珊珊+徐波

[摘要] 目的 探討鼠吸入全氟異丁烯（PFIB）致急性肺損傷（ALI）模型應(yīng)用紅花苷干預(yù)的意義。 方法 Wistar 雄性大鼠130只隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組（30只，包括3個(gè)亞組）、染毒組（30只）和正常組（10只），分為24 h、72 h、7 d三個(gè)時(shí)間觀察點(diǎn)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)各10只。正常組不染毒、不干預(yù)處理；而染毒組僅染毒，無(wú)藥物干預(yù)；3個(gè)實(shí)驗(yàn)組均在染毒后1 h腹腔給藥干預(yù)，實(shí)驗(yàn)組1單純給紅花，實(shí)驗(yàn)組2給紅花聯(lián)合地塞米松；實(shí)驗(yàn)組3給紅花聯(lián)合烏斯他丁；染毒組腹腔注射鹽水；分別在不同時(shí)間點(diǎn)放血處死。觀察肺含水量、支氣管肺泡灌洗液（BALF）蛋白含量、血清和肺組織中的腫瘤壞死因子-α（TNF-α），用ELISA法測(cè)定白介素-1（IL-1），IL-8，IL-18，IL-10和P-選擇素（P-s）。 結(jié)果 肺含水量以24 h最高；染毒組[（81.95±2.05）%]、實(shí)驗(yàn)組（3組）[（81.57±2.31）%、（83.57±3.35）%、（80.41±1.51）%]與正常組[（78.18±1.34）%]比較差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）；3個(gè)實(shí)驗(yàn)組中以實(shí)驗(yàn)組組3最低，與實(shí)驗(yàn)組2和染毒組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。BALF蛋白含量，正常組[（0.32±0.25）g/L]與染毒組[（6.16±2.14）g/L]和實(shí)驗(yàn)組（3組）[（5.64±1.97）、（6.01±3.55）、（5.23±2.79）g/L]比較，差異均有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）；實(shí)驗(yàn)組3與染毒組、實(shí)驗(yàn)組1、2比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），但以實(shí)驗(yàn)組3最低。24 h實(shí)驗(yàn)組各組血清細(xì)胞因子TNF-α、IL-1、IL-8、IL-18低于染毒組，其中實(shí)驗(yàn)組1、實(shí)驗(yàn)組2 TNF-α[（14.06±6.08）、（6.92±14.10）μg/L]和IL-18[（64.94±11.84）、（66.93±11.69）μg/L]與染毒組TNF-α[（20.20±4.70）μg/L]，IL-18[（87.34±20.98）μg/L]比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。肺組織中相同細(xì)胞因子明顯高于血清，在時(shí)間點(diǎn)的變化趨勢(shì)與血清基本一致。 結(jié)論 紅花苷可以降低PFIB吸入性ALI炎性細(xì)胞因子水平，聯(lián)合烏斯他丁能更有效減輕肺水腫。

[關(guān)鍵詞] 急性肺損傷；全氟異丁烯；細(xì)胞因子；紅花苷

[中圖分類(lèi)號(hào)] R563 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2014）02（b）-0004-05

Carthamin ameliorate acute lung injury in rats after perfluoroisobutylene exposing

LIU Jifu LIANG Hailong WU Shanshan XU Bo

Department of Thoracic Surgery， General Hospital of Beijing Military Region， Beijing 100700， China

[Abstract] Objective To study carthamin treating effect for acute lung injury （ALI） in mice after exposing perfluoroisobutylene （PFIB）. Methods 130 Wistar male rats were randomly divided into experiment groups （30 rats， including 3 subgroup）， contamination group （30 rats） and normal group （10 rats）， at 24 h， 72 h， 7 d and 3 different observing time points， 10 rats were researched in every time point. No poison and drug were given in normal group. The drugs were injected into peritoneal cavity， carthamin only injected in experiment group 1； carthamin and dexamethasone in experiment group 2， carthamin and urinastain injected in experiment group 3. The saline was injected into peritoneal cavity in the contamination group at 1 h after PFIB exposed. The rats in 3 experiment groups and contamination group were died by bloodletting. The water content of the lung， the protein level of the bronchoalveolar lavage （BALF） were evaluated， and TNF-α， IL-1， IL-8， IL-18， IL-10 and P-selectin of serum and pulmonary tissue were measured with ELISA. Results At time point of 24 h， the lung water content in each group was the highest； the lung water content in contamination group [（81.95±2.05） %] and experimental groups [（81.57±2.31） %， （83.57±3.35） %， （80.41±1.51） %] were compared with that in normal group [（78.18±1.34） %]， the differences were statistically significant （P < 0.01）； in the 3 experiment groups， the lung water content in experiment group 3 was the lowest， compared with those in experiment group 1 and experiment group 2， the differences were statistically significant （P < 0.05）. The protein content of BALF in normal group [（0.32±0.25） %] was compared with those in contamination group [（6.16±2.14） g/L] and 3 experiment groups [（5.64±1.97）， （6.01±3.55）， （5.23±2.79） g/L]， the differences were statistically significant （P < 0.01）； the protein content in experiment group 3 was compared with those in contamination group， experiment group 1 and experiment group 2， the difference was not statistically significant （P > 0.05）， but that in experiment group 3 was the lowest. The serum cytokine TNF-α， IL-1， IL-8， IL-18 at time point of 24 h， these in experimental groups were lower than control group， TNF-α in experiment group 1 and experiment group 2 [（14.06±6.08）， （6.92±14.10） μg/L] and IL-18 in experiment group 1 and experiment group 2 [（64.94±11.84）， （66.93±11.69） μg/L] were compared with those in contamination group [TNF-α （20.20±4.70） μg/L， IL-18 （87.34±20.98） μg/L]， the differences were statistically significant （P < 0.05）. The above cytokine in pulmonary tissue was obviously higher than serum， the variation trend at each time point were the same in serum. Conclusion Carthamin may decrease inflammatory cytokine level of ALI after PFIB exposed， the usage of carthamin combined urinastain can further alleviate the pneumonedema.

[Key words] Acute lung injury； Perfluoroisobutylene； Cytokine； Carthamin

急性肺損傷（acute lung injury，ALI）是一種常見(jiàn)、危重癥，然而對(duì)塑料物品燃燒產(chǎn)生的全氟異丁烯（Perfluoroisobutylene，PFIB）吸入所致ALI認(rèn)識(shí)并不多。有關(guān)ALI的研究多關(guān)注氧自由基和一氧化氮及合成酶對(duì)ALI損傷作用[1-2]。本研究探討吸入PFIB致ALI用紅花干預(yù)對(duì)細(xì)胞因子的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選擇雄性Wistar大鼠130只（購(gòu)自北京利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)公司），體重190～220 g，分成實(shí)驗(yàn)組（包括3個(gè)亞組）、染毒組和正常組；實(shí)驗(yàn)組和染毒組每組各30只，正常組10只；分別觀察24 h、72 h、7 d三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)各10只。實(shí)驗(yàn)組均在染毒后1 h按動(dòng)物體重計(jì)算經(jīng)腹腔給藥，紅花注射液（生產(chǎn)商：山西華輝凱德制藥，批號(hào)3130113501）1 mL/100 g，1次/d。實(shí)驗(yàn)組1：?jiǎn)渭兘o紅花；實(shí)驗(yàn)組2：紅花聯(lián)合地塞米松，地塞米松2.5 mg/100 g，1次/d；實(shí)驗(yàn)組3：紅花聯(lián)合烏斯他丁，烏斯他酊0.1萬(wàn)/100 g，1次/d。染毒組于染毒后1 h經(jīng)腹腔給生理鹽水1 mL/100 g，1次/d；正常組10只，不做任何處理。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物模型建立 采用張憲成等[3]已建立染毒裝置和頭部暴露式染毒方法，PFIB與空氣混合均勻，吸入濃度在0.16～0.18 mg/L，持續(xù)吸入8 min。

1.2.2 取材 每組動(dòng)物均在觀察時(shí)間點(diǎn)麻醉，剖腹顯露腹主動(dòng)脈放血處死，留取血液6 mL，4℃離心機(jī)分離出血清；肺組織取右側(cè)下葉肺留取肺組織3 g，勻漿。血清和組織勻漿均在-80℃保存?zhèn)錅y(cè)。

1.2.3 支氣管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）蛋白測(cè)定 游離氣管及左右主支管后，夾閉右主支氣管，對(duì)左肺用生理鹽水（NS）灌洗并回收灌洗液，5 mL/次，3次/只。BALF用Bradford方法測(cè)定總蛋白含量。

1.2.4 肺水量的測(cè)定 留取右肺上葉去除表面附著的血及水后烘干，分別測(cè)定肺干濕重，計(jì)算肺含水量，計(jì)算公式：（肺濕重-肺干重）/肺濕重×100%。

1.2.5 細(xì)胞因子測(cè)定 ELISA法（采用全自動(dòng)多功能酶標(biāo)儀，Multiskan MK3，USA）測(cè)定血清、肺組織腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-alpha，TNF-α），白介素-1（IL-1），IL-8，IL-18，IL-10和P-選擇素（P-selectin，P-s）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 17.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，正態(tài)分布計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩獨(dú)立樣本的計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)；多組間比較采用方差分析。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大體標(biāo)本肉眼觀察

實(shí)驗(yàn)組和染毒對(duì)照組肺葉均顯示腫脹，呈急、慢性充血狀。

2.2 肺含水量

以24 h肺含水量最高，正常組[（78.18±1.34）%]與染毒組[（81.95±2.05）%]和實(shí)驗(yàn)組[實(shí)驗(yàn)組1（81.57±2.31）%，實(shí)驗(yàn)組2（83.57±3.35）%，實(shí)驗(yàn)組3（80.41±1.51）%，]比較，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）。染毒組與實(shí)驗(yàn)組1、實(shí)驗(yàn)組3比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。實(shí)驗(yàn)組3與染毒組、實(shí)驗(yàn)組2比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。7 d時(shí)仍呈此勢(shì)態(tài)，實(shí)驗(yàn)組3低于染毒組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見(jiàn)表1。

表1 鼠吸入全氟異丁烯急性肺損傷紅花干預(yù)肺含水量的動(dòng)態(tài)變化（%，x±s）

注：與正常組比較，**P < 0.01；與染毒組比較，▲P < 0.05；與實(shí)驗(yàn)組3比較，△P < 0.05

2.3 BALF蛋白含量測(cè)定

24 h BALF蛋白含量染毒組和實(shí)驗(yàn)組（3組）范圍在5.23～6.16 g/L，高于正常組，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）；染毒組與實(shí)驗(yàn)組（3組）比較，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；實(shí)驗(yàn)組（3組）中各時(shí)間點(diǎn)以實(shí)驗(yàn)組3最低，但3組之間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見(jiàn)表2。

表2 鼠吸入全氟異丁烯急性肺損傷紅花干預(yù)BALF蛋白含量

動(dòng)態(tài)變化，（g/L，x±s）

注：與正常組比較，**P < 0.01；BALF：肺灌洗液

2.4 血清及肺組織中細(xì)胞因子變化

2.4.1 24 h血清及肺組織中細(xì)胞因子變化 TNF-α、IL-1、IL-10、IL-18在實(shí)驗(yàn)組（3組）均低于染毒組，TNF-α和IL-18在實(shí)驗(yàn)組1、實(shí)驗(yàn)組2較染毒組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；TNF-α在實(shí)驗(yàn)組3較實(shí)驗(yàn)組2降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；IL-8、IL-10、P-s實(shí)驗(yàn)組（3組）均高于染毒組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。24 h肺組織中細(xì)胞因子與血清中的變化趨勢(shì)基本一致，IL-1、IL-8、IL-10在實(shí)驗(yàn)組1、實(shí)驗(yàn)組2中低于對(duì)照組，IL-8、IL-10在實(shí)驗(yàn)組2低于實(shí)驗(yàn)組1（P < 0.05或P < 0.01）。見(jiàn)表3、4。

2.4.2 72 h血清及肺組織中細(xì)胞因子變化 血清炎性細(xì)胞因子（TNF-α，IL-1，IL-18）與24 h 趨勢(shì)相似，但高于24 h，TNF-α在實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組3中低于染毒組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；IL-1在實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2中低于染毒組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；IL-18在實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2中低于染毒組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；IL-10在實(shí)驗(yàn)組2高于實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組3，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；肺組織中IL-10實(shí)驗(yàn)組1明顯低于染毒組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見(jiàn)表5、6。

2.4.3 7 d血清中細(xì)胞因子及肺組織中細(xì)胞因子變化 7 d血清中細(xì)胞因子變化基本恢復(fù)正常水平。但肺組織中細(xì)胞因子反而有升高，P-s在實(shí)驗(yàn)組2、實(shí)驗(yàn)組3中高于染毒組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見(jiàn)表7、8。3個(gè)時(shí)間觀察點(diǎn)肺組織中的IL-18均明顯低于血清濃度。

3 討論

ALI是一種常見(jiàn)急癥，引起急性肺損傷的原因很多，其病理?yè)p害基本相似，但發(fā)病過(guò)程有所不同。目前多采用燒傷煙霧吸入或光氣吸入動(dòng)物模型研究[4-6]，PFIB模型很少受到重視。然而PFIB是一種聚氟乙烯高溫裂解產(chǎn)物中毒性最強(qiáng)的成分，平時(shí)火災(zāi)或工業(yè)事故常存在該種有毒氣體，易經(jīng)呼吸道吸入，可穿透防毒面具，一旦吸入可造成嚴(yán)重肺損傷。PFIB吸入急性肺損傷的機(jī)制主要是肺組織受損傷后中性粒細(xì)胞滲出，其產(chǎn)生的細(xì)胞因子顯著增加并釋放到肺組織中，造成肺水腫。目前在救治中尚無(wú)理想的藥物，多采用激素或減輕水腫的藥物，如烏斯他丁。本研究重點(diǎn)探討紅花苷在急性肺損傷中的作用。

紅花苷有減輕肺水腫、減少肺泡蛋白滲出的作用，最新研究ALI可采用經(jīng)肺單或雙溫度指示劑定量測(cè)定血管外肺水，用于臨床診斷、預(yù)測(cè)死亡和多器官功能不全，但方法復(fù)雜[7]。實(shí)驗(yàn)研究采用肺干濕重的方法計(jì)算肺含水量仍然可以反映肺水腫的程度。有報(bào)道用原炎性激動(dòng)劑誘導(dǎo)ALI動(dòng)物模型，對(duì)房型尿鈉肽研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)源性房型尿鈉肽對(duì)肺血管滲出有代償性保護(hù)機(jī)制，是減輕肺水腫的另一種保護(hù)物質(zhì)[8]。鼠吸入PFIB后有明顯肺水腫，24 h水腫最嚴(yán)重，以后逐漸減輕。3個(gè)實(shí)驗(yàn)組均低于染毒組，以實(shí)驗(yàn)組3最低，實(shí)驗(yàn)組3與實(shí)驗(yàn)組2比有顯著差異。說(shuō)明紅花苷有減輕肺水腫的作用，與烏司他丁聯(lián)合應(yīng)用療效更好，明顯優(yōu)于與激素聯(lián)合應(yīng)用。

鼠支氣管肺泡灌洗液蛋白含量，可反映肺水腫液滲出的嚴(yán)重程度。吳允孚等[9]對(duì)大鼠內(nèi)毒素性ALI模型分為對(duì)照組、ALI組和血必凈組，血必凈組BALF中肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF）和角細(xì)胞生長(zhǎng)因子（KGF）、粒細(xì)胞數(shù)均低于ALI組，表明活血化瘀中藥對(duì)ALI的保護(hù)作用。本研究測(cè)定BALF蛋白含量，在不同時(shí)間點(diǎn)3個(gè)實(shí)驗(yàn)組均低于染毒組，雖未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但趨勢(shì)顯示紅花干預(yù)有意義，以實(shí)驗(yàn)組3更明顯，這一結(jié)果與吳允孚等[9]的結(jié)果一致。

紅花苷可減輕ALI細(xì)胞因子的水平。急性肺損傷按中醫(yī)辨證屬于“瘀癥”，紅花有活血祛瘀作用。紅花中主要有效成分是紅花苷。已有研究證明炎性病變使用活血化瘀中藥有改善白細(xì)胞黏附遷移作用[10-11]。本研究中實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞因子低于對(duì)照組，以實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2中降低最明顯，尤其是IL-1、IL-18和TNF-α；IL-10則有所增高，隨著時(shí)間延長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)組3高于另2個(gè)實(shí)驗(yàn)組，這表明紅花在PFIB誘發(fā)的ALI有減少炎性細(xì)胞因子的作用，同時(shí)也有調(diào)節(jié)免疫功能。

肺組織中的細(xì)胞因子明顯高于血清。ALI肺組織的主要改變是肺組織水腫、炎性細(xì)胞滲出，許多細(xì)胞因子是單核、巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生，如TNF-α、IL-1、IL-8、IL-18、IL-10、P-s[12-13]。本研究肺組織中細(xì)胞因子除LI-18外，其余均顯著高于血清中，而且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)血清中的細(xì)胞因子逐漸下降，而肺組織中則保持了較高水平，說(shuō)明血清中細(xì)胞因子可能主要來(lái)源肺組織和全身炎性因子釋放，另外，肺組織中炎性細(xì)胞因子持續(xù)增高，可能對(duì)肺組織的持久損害起到了不良作用。這一結(jié)果類(lèi)似于梅雪等[14]的臨床報(bào)道，觀察了78例全身炎癥反應(yīng)綜合征患者血清中促炎因子水平與病情輕重、患者生存狀況有關(guān)。

肺組織中IL-18明顯低于血清，說(shuō)明血清中IL-18增高并非是肺組織中釋放，而是體內(nèi)其他部位含IL-18組織受到致炎因子的影響而釋放。也代表了ALI可以引起全身炎性反應(yīng)。

綜上所述，本研究顯示紅花苷可以降低吸入PFIB致ALI的血清細(xì)胞因子水平，聯(lián)合烏司他丁應(yīng)用能減輕肺水腫。

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[13] 沈楨巍，方路，姜敏敏，等.β防御素2對(duì)大鼠肺部炎癥細(xì)胞因子的影響[J].成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，8（1）：17-20.

[14] 梅雪，李春盛，王爍.全身炎癥反應(yīng)綜合癥患者血清細(xì)胞因子動(dòng)態(tài)變化的研究[J].中國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué)，2006，18（2）：85-88.

（收稿日期：2013-08-23 本文編輯：李繼翔）

2.4.3 7 d血清中細(xì)胞因子及肺組織中細(xì)胞因子變化 7 d血清中細(xì)胞因子變化基本恢復(fù)正常水平。但肺組織中細(xì)胞因子反而有升高，P-s在實(shí)驗(yàn)組2、實(shí)驗(yàn)組3中高于染毒組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見(jiàn)表7、8。3個(gè)時(shí)間觀察點(diǎn)肺組織中的IL-18均明顯低于血清濃度。

3 討論

ALI是一種常見(jiàn)急癥，引起急性肺損傷的原因很多，其病理?yè)p害基本相似，但發(fā)病過(guò)程有所不同。目前多采用燒傷煙霧吸入或光氣吸入動(dòng)物模型研究[4-6]，PFIB模型很少受到重視。然而PFIB是一種聚氟乙烯高溫裂解產(chǎn)物中毒性最強(qiáng)的成分，平時(shí)火災(zāi)或工業(yè)事故常存在該種有毒氣體，易經(jīng)呼吸道吸入，可穿透防毒面具，一旦吸入可造成嚴(yán)重肺損傷。PFIB吸入急性肺損傷的機(jī)制主要是肺組織受損傷后中性粒細(xì)胞滲出，其產(chǎn)生的細(xì)胞因子顯著增加并釋放到肺組織中，造成肺水腫。目前在救治中尚無(wú)理想的藥物，多采用激素或減輕水腫的藥物，如烏斯他丁。本研究重點(diǎn)探討紅花苷在急性肺損傷中的作用。

紅花苷有減輕肺水腫、減少肺泡蛋白滲出的作用，最新研究ALI可采用經(jīng)肺單或雙溫度指示劑定量測(cè)定血管外肺水，用于臨床診斷、預(yù)測(cè)死亡和多器官功能不全，但方法復(fù)雜[7]。實(shí)驗(yàn)研究采用肺干濕重的方法計(jì)算肺含水量仍然可以反映肺水腫的程度。有報(bào)道用原炎性激動(dòng)劑誘導(dǎo)ALI動(dòng)物模型，對(duì)房型尿鈉肽研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)源性房型尿鈉肽對(duì)肺血管滲出有代償性保護(hù)機(jī)制，是減輕肺水腫的另一種保護(hù)物質(zhì)[8]。鼠吸入PFIB后有明顯肺水腫，24 h水腫最嚴(yán)重，以后逐漸減輕。3個(gè)實(shí)驗(yàn)組均低于染毒組，以實(shí)驗(yàn)組3最低，實(shí)驗(yàn)組3與實(shí)驗(yàn)組2比有顯著差異。說(shuō)明紅花苷有減輕肺水腫的作用，與烏司他丁聯(lián)合應(yīng)用療效更好，明顯優(yōu)于與激素聯(lián)合應(yīng)用。

鼠支氣管肺泡灌洗液蛋白含量，可反映肺水腫液滲出的嚴(yán)重程度。吳允孚等[9]對(duì)大鼠內(nèi)毒素性ALI模型分為對(duì)照組、ALI組和血必凈組，血必凈組BALF中肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF）和角細(xì)胞生長(zhǎng)因子（KGF）、粒細(xì)胞數(shù)均低于ALI組，表明活血化瘀中藥對(duì)ALI的保護(hù)作用。本研究測(cè)定BALF蛋白含量，在不同時(shí)間點(diǎn)3個(gè)實(shí)驗(yàn)組均低于染毒組，雖未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但趨勢(shì)顯示紅花干預(yù)有意義，以實(shí)驗(yàn)組3更明顯，這一結(jié)果與吳允孚等[9]的結(jié)果一致。

紅花苷可減輕ALI細(xì)胞因子的水平。急性肺損傷按中醫(yī)辨證屬于“瘀癥”，紅花有活血祛瘀作用。紅花中主要有效成分是紅花苷。已有研究證明炎性病變使用活血化瘀中藥有改善白細(xì)胞黏附遷移作用[10-11]。本研究中實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞因子低于對(duì)照組，以實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2中降低最明顯，尤其是IL-1、IL-18和TNF-α；IL-10則有所增高，隨著時(shí)間延長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)組3高于另2個(gè)實(shí)驗(yàn)組，這表明紅花在PFIB誘發(fā)的ALI有減少炎性細(xì)胞因子的作用，同時(shí)也有調(diào)節(jié)免疫功能。

肺組織中的細(xì)胞因子明顯高于血清。ALI肺組織的主要改變是肺組織水腫、炎性細(xì)胞滲出，許多細(xì)胞因子是單核、巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生，如TNF-α、IL-1、IL-8、IL-18、IL-10、P-s[12-13]。本研究肺組織中細(xì)胞因子除LI-18外，其余均顯著高于血清中，而且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)血清中的細(xì)胞因子逐漸下降，而肺組織中則保持了較高水平，說(shuō)明血清中細(xì)胞因子可能主要來(lái)源肺組織和全身炎性因子釋放，另外，肺組織中炎性細(xì)胞因子持續(xù)增高，可能對(duì)肺組織的持久損害起到了不良作用。這一結(jié)果類(lèi)似于梅雪等[14]的臨床報(bào)道，觀察了78例全身炎癥反應(yīng)綜合征患者血清中促炎因子水平與病情輕重、患者生存狀況有關(guān)。

肺組織中IL-18明顯低于血清，說(shuō)明血清中IL-18增高并非是肺組織中釋放，而是體內(nèi)其他部位含IL-18組織受到致炎因子的影響而釋放。也代表了ALI可以引起全身炎性反應(yīng)。

綜上所述，本研究顯示紅花苷可以降低吸入PFIB致ALI的血清細(xì)胞因子水平，聯(lián)合烏司他丁應(yīng)用能減輕肺水腫。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 王和枚，王春倩，張憲成，等.大鼠吸入全氟異丁烯中毒后不同時(shí)間對(duì)內(nèi)源性NO及其合成酶活力的影響[J].軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊，2010，34（6）：560-562.

[2] Enkhbaatar P，Connelly R，Wang J，et al. Inhibition of neuronal nitric oxide osynthase in ovine model of acute lung injury [J]. Crit Care Med，2009，37（1）：361-363.

[3] 張憲成，丁日高，張?zhí)旌辏?大鼠頭部暴露全氟異丁烯中毒致肺損傷實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕J].軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊，2005，29（1）：51-54.

[4] Enkhbaatar P，Cox RA，Traber LD，et al. Aerosolized ameliorate acute lung injury in sheep after exposure to burn and smoke inhalation [J]. Crit Care Med，2007，35（12）：2805-2810.

[5] Zhou M，He JS，Li Q，et al. Pulmonary immune responses to acute lung injury following smoke inhalation and its mechanisms [J]. Zhongguo Wei Zhong Bing Ji Jiu Yi Xue，2007，19（4）：209-213.

[6] Sciuto AM，Hurt HH. Therapeutic treatment of phosgene-induced lung injury [J]. Inhal Toxicol，2004，16（8）：565-580.

[7] Mallat J. Can extravascular lung water predict progression to acute lung injury in patients at increased risk？ Still an unanswered question [J]. Crit Care Med，2012，40（4）：1391-1392.

[8] Xing JJ，Yakubov B，Poroyko V，et al. Opposite effects of ANP receptors in attenuation of LPS-induced endothelial permeability and lung injury [J]. Microvasc Res，2012，83（2）：194-199.

[9] 吳允孚，陳剛，席與斌.血必凈注射液對(duì)內(nèi)毒素性肺損傷治療作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2008， 15（3）：181-182.

[10] 何蔚，劉奕明，陳匯，等.燈盞花素對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注后腦水腫和中性粒細(xì)胞的影響[J].中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2004，18（3）：161-165.

[11] 黃琦，倪海祥，邵國(guó)民，等.2型糖尿病患者CD11b/CD18 的表達(dá)及活血化瘀藥對(duì)其的影響[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2003，23（6）：430-432.

[12] 姚艷敏，王希柱，宋巧鳳，等.急性肺血栓栓塞癥炎性因子與肺損傷關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究[J].疑難病雜志，2013，12（3）：217-219.

[13] 沈楨巍，方路，姜敏敏，等.β防御素2對(duì)大鼠肺部炎癥細(xì)胞因子的影響[J].成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，8（1）：17-20.

[14] 梅雪，李春盛，王爍.全身炎癥反應(yīng)綜合癥患者血清細(xì)胞因子動(dòng)態(tài)變化的研究[J].中國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué)，2006，18（2）：85-88.

（收稿日期：2013-08-23 本文編輯：李繼翔）

2.4.3 7 d血清中細(xì)胞因子及肺組織中細(xì)胞因子變化 7 d血清中細(xì)胞因子變化基本恢復(fù)正常水平。但肺組織中細(xì)胞因子反而有升高，P-s在實(shí)驗(yàn)組2、實(shí)驗(yàn)組3中高于染毒組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見(jiàn)表7、8。3個(gè)時(shí)間觀察點(diǎn)肺組織中的IL-18均明顯低于血清濃度。

3 討論

ALI是一種常見(jiàn)急癥，引起急性肺損傷的原因很多，其病理?yè)p害基本相似，但發(fā)病過(guò)程有所不同。目前多采用燒傷煙霧吸入或光氣吸入動(dòng)物模型研究[4-6]，PFIB模型很少受到重視。然而PFIB是一種聚氟乙烯高溫裂解產(chǎn)物中毒性最強(qiáng)的成分，平時(shí)火災(zāi)或工業(yè)事故常存在該種有毒氣體，易經(jīng)呼吸道吸入，可穿透防毒面具，一旦吸入可造成嚴(yán)重肺損傷。PFIB吸入急性肺損傷的機(jī)制主要是肺組織受損傷后中性粒細(xì)胞滲出，其產(chǎn)生的細(xì)胞因子顯著增加并釋放到肺組織中，造成肺水腫。目前在救治中尚無(wú)理想的藥物，多采用激素或減輕水腫的藥物，如烏斯他丁。本研究重點(diǎn)探討紅花苷在急性肺損傷中的作用。

紅花苷有減輕肺水腫、減少肺泡蛋白滲出的作用，最新研究ALI可采用經(jīng)肺單或雙溫度指示劑定量測(cè)定血管外肺水，用于臨床診斷、預(yù)測(cè)死亡和多器官功能不全，但方法復(fù)雜[7]。實(shí)驗(yàn)研究采用肺干濕重的方法計(jì)算肺含水量仍然可以反映肺水腫的程度。有報(bào)道用原炎性激動(dòng)劑誘導(dǎo)ALI動(dòng)物模型，對(duì)房型尿鈉肽研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)源性房型尿鈉肽對(duì)肺血管滲出有代償性保護(hù)機(jī)制，是減輕肺水腫的另一種保護(hù)物質(zhì)[8]。鼠吸入PFIB后有明顯肺水腫，24 h水腫最嚴(yán)重，以后逐漸減輕。3個(gè)實(shí)驗(yàn)組均低于染毒組，以實(shí)驗(yàn)組3最低，實(shí)驗(yàn)組3與實(shí)驗(yàn)組2比有顯著差異。說(shuō)明紅花苷有減輕肺水腫的作用，與烏司他丁聯(lián)合應(yīng)用療效更好，明顯優(yōu)于與激素聯(lián)合應(yīng)用。

鼠支氣管肺泡灌洗液蛋白含量，可反映肺水腫液滲出的嚴(yán)重程度。吳允孚等[9]對(duì)大鼠內(nèi)毒素性ALI模型分為對(duì)照組、ALI組和血必凈組，血必凈組BALF中肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF）和角細(xì)胞生長(zhǎng)因子（KGF）、粒細(xì)胞數(shù)均低于ALI組，表明活血化瘀中藥對(duì)ALI的保護(hù)作用。本研究測(cè)定BALF蛋白含量，在不同時(shí)間點(diǎn)3個(gè)實(shí)驗(yàn)組均低于染毒組，雖未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但趨勢(shì)顯示紅花干預(yù)有意義，以實(shí)驗(yàn)組3更明顯，這一結(jié)果與吳允孚等[9]的結(jié)果一致。

紅花苷可減輕ALI細(xì)胞因子的水平。急性肺損傷按中醫(yī)辨證屬于“瘀癥”，紅花有活血祛瘀作用。紅花中主要有效成分是紅花苷。已有研究證明炎性病變使用活血化瘀中藥有改善白細(xì)胞黏附遷移作用[10-11]。本研究中實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞因子低于對(duì)照組，以實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2中降低最明顯，尤其是IL-1、IL-18和TNF-α；IL-10則有所增高，隨著時(shí)間延長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)組3高于另2個(gè)實(shí)驗(yàn)組，這表明紅花在PFIB誘發(fā)的ALI有減少炎性細(xì)胞因子的作用，同時(shí)也有調(diào)節(jié)免疫功能。

肺組織中的細(xì)胞因子明顯高于血清。ALI肺組織的主要改變是肺組織水腫、炎性細(xì)胞滲出，許多細(xì)胞因子是單核、巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生，如TNF-α、IL-1、IL-8、IL-18、IL-10、P-s[12-13]。本研究肺組織中細(xì)胞因子除LI-18外，其余均顯著高于血清中，而且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)血清中的細(xì)胞因子逐漸下降，而肺組織中則保持了較高水平，說(shuō)明血清中細(xì)胞因子可能主要來(lái)源肺組織和全身炎性因子釋放，另外，肺組織中炎性細(xì)胞因子持續(xù)增高，可能對(duì)肺組織的持久損害起到了不良作用。這一結(jié)果類(lèi)似于梅雪等[14]的臨床報(bào)道，觀察了78例全身炎癥反應(yīng)綜合征患者血清中促炎因子水平與病情輕重、患者生存狀況有關(guān)。

肺組織中IL-18明顯低于血清，說(shuō)明血清中IL-18增高并非是肺組織中釋放，而是體內(nèi)其他部位含IL-18組織受到致炎因子的影響而釋放。也代表了ALI可以引起全身炎性反應(yīng)。

綜上所述，本研究顯示紅花苷可以降低吸入PFIB致ALI的血清細(xì)胞因子水平，聯(lián)合烏司他丁應(yīng)用能減輕肺水腫。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 王和枚，王春倩，張憲成，等.大鼠吸入全氟異丁烯中毒后不同時(shí)間對(duì)內(nèi)源性NO及其合成酶活力的影響[J].軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊，2010，34（6）：560-562.

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[3] 張憲成，丁日高，張?zhí)旌?，?大鼠頭部暴露全氟異丁烯中毒致肺損傷實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕J].軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊，2005，29（1）：51-54.

[4] Enkhbaatar P，Cox RA，Traber LD，et al. Aerosolized ameliorate acute lung injury in sheep after exposure to burn and smoke inhalation [J]. Crit Care Med，2007，35（12）：2805-2810.

[5] Zhou M，He JS，Li Q，et al. Pulmonary immune responses to acute lung injury following smoke inhalation and its mechanisms [J]. Zhongguo Wei Zhong Bing Ji Jiu Yi Xue，2007，19（4）：209-213.

[6] Sciuto AM，Hurt HH. Therapeutic treatment of phosgene-induced lung injury [J]. Inhal Toxicol，2004，16（8）：565-580.

[7] Mallat J. Can extravascular lung water predict progression to acute lung injury in patients at increased risk？ Still an unanswered question [J]. Crit Care Med，2012，40（4）：1391-1392.

[8] Xing JJ，Yakubov B，Poroyko V，et al. Opposite effects of ANP receptors in attenuation of LPS-induced endothelial permeability and lung injury [J]. Microvasc Res，2012，83（2）：194-199.

[9] 吳允孚，陳剛，席與斌.血必凈注射液對(duì)內(nèi)毒素性肺損傷治療作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2008， 15（3）：181-182.

[10] 何蔚，劉奕明，陳匯，等.燈盞花素對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注后腦水腫和中性粒細(xì)胞的影響[J].中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2004，18（3）：161-165.

[11] 黃琦，倪海祥，邵國(guó)民，等.2型糖尿病患者CD11b/CD18 的表達(dá)及活血化瘀藥對(duì)其的影響[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2003，23（6）：430-432.

[12] 姚艷敏，王希柱，宋巧鳳，等.急性肺血栓栓塞癥炎性因子與肺損傷關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究[J].疑難病雜志，2013，12（3）：217-219.

[13] 沈楨巍，方路，姜敏敏，等.β防御素2對(duì)大鼠肺部炎癥細(xì)胞因子的影響[J].成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，8（1）：17-20.

[14] 梅雪，李春盛，王爍.全身炎癥反應(yīng)綜合癥患者血清細(xì)胞因子動(dòng)態(tài)變化的研究[J].中國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué)，2006，18（2）：85-88.

（收稿日期：2013-08-23 本文編輯：李繼翔）