楊芳+岳正剛+王欣+張修朋+柴江+崔九成+宋小妹+梅其炳

[摘要] 杜仲葉來源于杜仲科植物杜仲Eucommia ulmoides的干燥葉。為了深入了解杜仲葉中的活性成分，該研究采用D-101大孔樹脂，MCI樹脂，反相ODS，Sephadex LH-20，Rp-HPLC制備柱色譜法和重結(jié)晶等方法，從杜仲葉乙醇提取物的正丁醇萃取部位中分離得到10個化合物，通過MS和NMR等譜學(xué)方法，鑒定結(jié)構(gòu)為山柰素-3-O-β-D-葡萄糖苷（1），槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷（2），槲皮素（3），槲皮素-3-O-β-D-木糖基-（1→2）-β-D-葡萄糖苷（4），山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖基-（1→6）-β-D-葡萄糖苷（5），（2S，3S）-（-）-花旗松素-3-O-β-D-葡萄糖苷（6），4-羥基肉桂酸（7），（+）-環(huán)橄欖脂素（8），松脂素-β-D-葡萄糖苷（9），角鯊烯（10），其中化合物1，5～7，10為首次從該屬植物中分離得到。采用DPPH自由基清除法對分離得到的化合物進行抗氧化活性研究。結(jié)果顯示，其中化合物2表現(xiàn)出顯著的自由基清除能力（IC₅₀為13.7 μmol·L^-1），活性強于Vit C（IC₅₀為59.9 μmol·L^-1）；化合物1，3，9顯示中等強度自由基清除能力（IC₅₀分別為161，137，214 μmol·L^-1），活性弱于Vit C，但強于2，6-二羥丁基對甲酚（IC₅₀為236 μmol·L^-1）；化合物4，6自由基清除能力較弱（IC₅₀分別為264，299 μmol·L^-1）；提示杜仲的藥理作用，可能與其黃酮和木脂素類化學(xué)成分具有能夠體內(nèi)清除體內(nèi)活性氧及抗氧化成分有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 杜仲葉；化學(xué)成分；黃酮；木脂素；DPPH自由基清除法抗氧化活性

[收稿日期] 2013-11-27

[基金項目] 國家自然科學(xué)基金項目（81071037）；陜西省教育廳科技計劃項目（09jk394）

[通信作者] 宋小妹，Tel：（029）38185165，E-mail：songxiaom@126.com； 梅其炳，Tel：（029）84779212，E-mail：qbmei@fmmu.edu.cn

中藥杜仲為杜仲科植物杜仲Eucommia ulmoides Oliver.的干燥樹皮，味甘、性溫，歸肝、腎經(jīng)，具有補肝腎、強筋骨等功效，主要用于肝腎不足、腰膝酸痛、筋骨無力、頭暈?zāi)垦５萚1]。本課題組前期研究中發(fā)現(xiàn)在去卵巢（OVX）大鼠骨質(zhì)疏松模型上，杜仲提取物表現(xiàn)出較好的預(yù)防絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的作用，與雌激素相比具有無子宮刺激的優(yōu)點[2]，然而其抗骨質(zhì)疏松作用的物質(zhì)基礎(chǔ)并不明確。文獻研究表明體內(nèi)活性氧及抗氧化成分羥自由基SOD、MDA及GSH-Px等可能參與絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的病理過程[3-4]，由于杜仲富含黃酮、木脂素等多酚類化合物[5]，本研究推測杜仲抗骨質(zhì)疏松作用可能是通過其能夠影響活性氧及抗氧化成分有關(guān)。因此，擬開展了杜仲化學(xué)成分的研究，并進行抗氧化活性測試，為揭示杜仲抗骨質(zhì)疏松的藥理作用奠定基礎(chǔ)。另外，由于杜仲的采集為15年以上植物的樹皮，杜仲葉與杜仲皮具有相似化學(xué)成分和藥理作用[6]，為了珍惜、保護及充分利用資源，本實驗采用活性追蹤的方式對杜仲葉化學(xué)成分進行了深入研究。通過采用D-101大孔樹脂、MCI樹脂、反相ODS，Sephadex LH-20、Rp-HPLC制備柱色譜法和重結(jié)晶等方法，從中分離出10個化合物，并將分到的化合物通過1，1-二苯基-2-芐基苯肼自由基清除法（DPPH法）來評價其抗氧化活性。

1 材料

Bruker-AVANCE 500核磁共振儀；Waters Quattro Premier型和Agilent Technologies 6550 Q-TOF質(zhì)譜儀以及Agilent Technologies 6520 Accurate-Mass-Q-TOF LC-MS液質(zhì)聯(lián)用儀；Combiflash R_f200快速制備色譜儀（Isco公司）；Waters 2695高效液相色譜儀，Shimadzu LC-6AD型高效半制備液相色譜儀（Ultimate XB-C₁₈或Allsphere ODS-2制備柱）；Molgene 1810a型純水儀；RV 10D digital FLEX型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（IKA公司）；DLSB-5/20型低溫冷凝循環(huán)泵（鄭州科工貿(mào)公司）；D-101大孔樹脂（西安藍曉科技新材料股份有限公司）；MCI-CHP-20樹脂（日本三菱公司）；ODS-C₁₈填料（加拿大SiliCycle 公司）、Sephadex LH-20（瑞典GE Healthcare Bio-Sciences AB公司）；柱色譜硅膠（100～200，200～300 目）均為青島海洋化工廠產(chǎn)品，薄層硅膠為煙臺江友硅膠發(fā)展有限公司生產(chǎn)；本實驗所用試劑均為天津科密歐公司分析純和色譜醇產(chǎn)品。

藥材于2009年7月采自陜西省安康市石泉縣，經(jīng)陜西省藥檢所郭耀武教授鑒定為杜仲科植物杜仲E. ulmoide的葉，標本現(xiàn)存秦巴山區(qū)中藥發(fā)展協(xié)同創(chuàng)新中心，標簽為杜仲葉樣本。

2 提取與分離

杜仲濕葉18 kg恒溫干燥（40 ℃）得干葉9 kg。 95%乙醇回流提取3次，每次1.5 h。將95%乙醇提取液減壓濃縮至流浸膏，懸浮于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。取正丁醇層部分經(jīng)D-101大孔樹脂吸附，分別用水，20%，40%，60%，80%，95%的乙醇梯度洗脫，減壓回收溶劑，分別得到20%乙醇洗脫部分（82.1 g），40%乙醇洗脫部分（73.9 g），60%乙醇洗脫部分（47.3 g），80%乙醇洗脫部分（34.5 g），95%乙醇洗脫部分（29.8 g）。40%乙醇部分（73.9 g）經(jīng)Flash制備色譜分離，甲醇-水洗脫（30∶70～100∶0）梯度洗脫，得Fr. I（5.7 g），F(xiàn)r. II（15.3 g），F(xiàn)r. III（23.9 g），F(xiàn)r. IV（17.4 g），F(xiàn)r. V（16.1 g）和Fr. VI（17.4 g），F(xiàn)r. IV經(jīng)反相ODS柱色譜分離，甲醇-水（10%～80%））梯度洗脫，收集13個亞組分（Fr. IV-1～Fr. IV-13），F(xiàn)r. IV-10經(jīng)Sephadex LH-20，反相HPLC制備純化及重結(jié)晶等方法得到化合物1（173 mg），2（257 mg）；Fr. IV-11經(jīng)反相ODS，Sephadex LH-20和反相HPLC制備純化得到化合物3（13.1 mg），4（57 mg），5（52 mg），6（6.1 mg）；Fr. IV-5經(jīng)反復(fù)Sephadex LH-20和重結(jié)晶得到化合物7（1.5 mg），8（3 mg），9（4.2 mg），10（18.7 mg）。endprint

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 黃色晶體，紫外254 nm下有暗斑，10%硫酸乙醇顯色呈棕黃色；鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈陽性，Molish 反應(yīng)呈陽性。¹H-NMR（Me₂CO-d₆，500 MHz）δ：6.27（1H，d，J=2.1 Hz，H-6），6.52（1H，d，J=2.1 Hz，H-8），8.13（2H，d，J=8.75 Hz，H-2′，6′），6.97（2H，d，J=8.8 Hz，H-3′，5′），5.25（1H，d，J=7.5 Hz，H-1″），3.32（3H，br s，4′-OCH₃），3.65（1H，d，J=11.6 Hz，H-6b″），3.52（1H，d，J=5.2 Hz，H-6a″），3.12～3.51（4H，m，H-2″～5″）；¹³C-NMR（Me₂CO-d₆，125 MHz）δ：161.1（C-2），135.5（C-3），179.3（C-4），163.1（C-5），94.8（C-6），165.3（C-7），99.8（C-8），158.7（C-9），105.6（C-10），122.7（C-1′），132.3（C-2′），115.9（C-3′），158.1（C-4′），115.9（C-5′），132.3（C-6′），104.9（C-1″），75.3（C-2″），78.1（C-3″），71.3（C-4″），77.9（C-5″），62.9（C-6″），49.9（4′-OCH₃）。以上數(shù)據(jù)與文獻[7]報道的山柰素-3-O-β-D-葡萄糖苷數(shù)據(jù)一致。

化合物2 黃色晶體，紫外 254 nm下有暗斑，10%硫酸乙醇顯色呈棕黃色；鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈陽性，Molish 反應(yīng)呈陽性。¹H-NMR（MeOH-d₄，500 MHz）δ：7.59（1H，d，J=2.2 Hz，H-2′），7.46（1H，dd，J=2.2，8.5 Hz，H-6′），6.74（1H，d，J=8.5 Hz，H-5′），6.06（1H，d，J=2.1 Hz，H-6），6.25（1H，d，J=2.1 Hz，H-8），5.12（1H，d，J=7.6 Hz，H-1″），3.60（1H，dd，J=2.3，11.9 Hz，H-6b″），3.45（1H，dd，J=5.3，11.9 Hz，H-6a″），3.11～3.65（4H，m，2″～5″）；¹³C-NMR（MeOH-d₄，125 MHz）δ：158.7（C-2），135.3（C-3），179.1（C-4），162.7（C-5），94.3（C-6），165.6（C-7），99.5（C-8），158.1（C-9），105.3（C-10），122.8（C-1′），115.6（C-2′），145.5（C-3′），149.5（C-4′），117.2（C-5′），122.7（C-6′），103.9（C-1″），75.4（C-2″），78.0（C-3″），70.8（C-4″），77.7（C-5″），62.2（C-6″）。以上數(shù)據(jù)與文獻[8]報道槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷的數(shù)據(jù)一致。

化合物3 黃色粉末，紫外 254 nm下有暗斑，10%硫酸乙醇顯色呈棕黃色；鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈陽性，Molish 反應(yīng)呈陰性。¹H-NMR（MeOH-d₄，500 MHz）δ：7.74（1H，s，H-2′），7.46（1H，d，J=8.2 Hz，H-6′），6.89（1H，d，J=8.2 Hz，H-5′），6.38（1H，s，H-8），6.18（1H，s，H-6）；¹³C-NMR（MeOH-d₄，125 MHz）δ：149.0（C-2），137.5（C-3），177.6（C-4），162.7（C-5），94.7（C-6），166.0（C-7），99.6（C-8），158.5（C-9），104.7（C-10），124.4（C-1′），116.2（C-2′），146.5（C-3′），148.2（C-4′），116.5（C-5′），121.9（C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻[9]報道槲皮素的數(shù)據(jù)一致。

化合物4 黃色粉末，紫外 254 nm下有暗斑，10%硫酸乙醇顯色呈棕黃色；鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈陽性，Molish 反應(yīng)呈陽性。¹H-NMR（MeOH-d₄，500 MHz）δ：7.64（1H，s，H-2′），7.63（1H，d，J=8.2，2.1 Hz，H-6′），6.88（1H，d，J=8.2 Hz，H-5′），6.38（1H，s，H-8），6.19（1H，s，H-6），5.35（1H，d，J=7.6 Hz，H-1″），4.79（1H，d，J=8.1 Hz，H-1），3.95（1H，dd，J=4.9，11.6 Hz，H-6b″），3.75（1H，dt，J =8.8 Hz，H-2″），3.72（1H，dd，J =2.3，11.6 Hz，H-6a″），3.20～3.63（8H，m，H-3″～5″，2～4，5a，5b）；¹³C-NMR（MeOH-d₄，125 MHz）δ：158.8（C-2），135.4（C-3），179.8（C-4），163.2（C-5），100.3（C-6），166.8（C-7），95.0（C-8），158.7（C-9），105.8（C-10），123.7（C-1′），117.5（C-2′），146.3（C-3′），150.1（C-4′），116.4（C-5′），123.3（C-6′），100.3（C-1″），82.7（C-2″），78.3（C-3″），71.1（C-4″），75.1（C-5″），62.4（C-6″），105.7（C-1），77.2（C-2），78.5（C-3），71.2（C-4），66.9（C-5）。以上數(shù)據(jù)與文獻[9]報道槲皮素-3-O-β-D-木糖基-（1→2）-β-D-葡萄糖苷的數(shù)據(jù)一致。endprint

化合物5 黃色粉末，紫外 254 nm下有暗斑，10%硫酸乙醇顯色呈棕黃色；鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈陽性，Molish 反應(yīng)呈陽性。¹H-NMR（MeOH-d₄，500 MHz）δ：8.05（2H，d，J=8.8 Hz，H-2′，6′），6.88（2H，d，J=8.8 Hz，H-3′，5′），6.35（1H，s，H-8），6.20（1H，s，H-6），5.03（1H，d，J=7.1 Hz，H-1″），4.50（1H，d，J=1.2 Hz，H-1），3.79（1H，d，J=9.5 Hz，H-6b″），3.65（1H，br s，H-2″），3.54（1H，dd，J=3.3，9.5 Hz，H-6a″），3.25～3.50（8H，m，H-3″～5″，2～4，5a，5b），1.13（3H，d，J=6.2 Hz，H-6）；¹³C-NMR（MeOH-d₄，125 MHz）δ：159.3（C-2），135.4（C-3），179.0（C-4），161.6（C-5），100.8（C-6），168.4（C-7），96.0（C-8），158.7（C-9），104.9（C-10），122.7（C-1′），132.3（C-2′），116.2（C-3′），162.7（C-4′），116.2（C-5′），132.3（C-6′），104.8（C-1″），73.8（C-2″），77.2（C-3″），71.4（C-4″），75.6（C-5″），68.3（C-6″），102.4（C-1），72.0（C-2），71.4（C-3），72.2（C-4），69.7（C-5），17.9（C-6）。以上數(shù)據(jù)與文獻[10]報道山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖基-（1→6）-β-D-葡萄糖苷的數(shù)據(jù)一致。

化合物6 白色粉末，紫外 254 nm 下有暗斑，10%硫酸乙醇顯色呈棕黃色，鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈陽性，Molish 反應(yīng)呈陽性。¹H-NMR（MeOH-d₄，500 MHz）δ：6.93（1H，s，H-2′），6.80（2H，m，H-5′，6′），6.21（1H，br s，H-8），6.19（1H，br s H-6），5.32（1H，J=9.0 Hz ，H-2 ），4.98（1H，d，J=9.0 Hz，H-3），4.78（1H，d，J=7.5 Hz，H-1″），3.88（1H，d，J=12.2 Hz，H-6b″），3.32-3.80（5H，m，H-2″～5″，6a″）；¹³C-NMR（MeOH-d₄，125 MHz）δ：80.8（C-2），74.8（C-3），198.7（C-4），167.2（C-5），98.1（C-6），167.1（C-7），97.1（C-8），164.7（C-8a），101.4（C-4a），131.7（C-1′），116.4（C-2′），147.1（C-3′），146.6（C-4′），114.1（C-5′），119.5（C-6′），105.1（C-1″），71.3（C-2″），78.4（C-3″），70.3（C-4″），77.9（C-5″），62.5（C-6″）。以上數(shù)據(jù)與文獻[11]報道（2S，3S）-（-）-花旗松素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷數(shù)據(jù)一致。

化合物7 白色粉末，紫外 254 nm下有暗斑，10%硫酸乙醇顯色呈紫色。¹H-NMR（MeOH-d₄，500 MHz）δ：7.61（1H，d，J=15.9 Hz，H-7），6.29（1H，d，J=15.9 Hz，H-8），7.45（2H，d，J=8.6 Hz，H-3，5），6.81（2H，d，J=8.6 Hz，H-2，6）；¹³C-NMR（MeOH-d₄，125 MHz）δ：161.3（C-1），116.8（C-2），131.2（C-3），127.5（C-4），131.2（C-5），116.9（C-6），146.7（C-7），115.8（C-8），171.3（C-9）。以上數(shù)據(jù)與文獻[12]報道4-羥基肉桂酸的數(shù)據(jù)一致。

化合物8 白色粉末，紫外 254 nm下有暗斑，10%硫酸乙醇顯色呈紫色；[α]²⁰_D+43.2（c 0.1，MeOH）。¹H-NMR（Me₂CO-d₆，500 MHz）δ：6.78（1H，d，J=2.0 Hz，H-5），6.76（1H，s，H-2），6.64（1H，dd，J=2.0，8.1 Hz，H-6），6.61（1H，s，H-2′），6.16（1H，s，H-5′），4.15（2H，m，H-9），3.89（1H，m，H-7），3.54（2H，m，H-9′），2.60（2H，t，H-7′），2.09（1H，m，H-8），3.78（6H，br s，3，3′-OCH₃）；¹³C-NMR（Me₂CO-d₆，125 MHz）δ：138.3（C-1），113.8（C-2），148.4（C-3），145.2（C-4），115.7（C-5），123.2（C-6），44.6（C-7），47.5（C-8），60.8（C-9），126.5（C-1′），112.7（C-2′），146.7（C-3′），145.9（C-4′），116.8（C-5′），133.6（C-6′），40.3（C-7′），74.1（C-8′），69.5（C-9′），56.4（3-OCH₃），56.3（3′-OCH₃）。以上數(shù)據(jù)與文獻[13]報道（+）-環(huán)橄欖脂素的數(shù)據(jù)一致。endprint

化合物9 白色粉末，紫外 254 nm 下有暗斑，10%硫酸乙醇顯色呈紫色。¹H-NMR（MeOH-d₄，500 MHz）δ：7.02（1H，s，H-2），6.92（1H，d，J=8.3 Hz，H-5），7.15（1H，d，J=8.3 Hz，H-6），4.75（1H，d，J=4.0 Hz，H-7），4.25（2H，dd，J=7.9，13.2 Hz，H-9），6.94（1H，s，H-2′），6.79（1H，d，J=8.2 Hz，H-5′），6.80（1H，d，J=8.2 Hz，H-6′），4.71（1H，d，J=4.0 Hz，H-7′），3.69（2H，dd，J=7.9，13.2 Hz，H-9′），3.12（2H，m，H-8，8′），3.85（3H，s，3-OCH₃），3.83（3H，s，3′-OCH₃），4.83（1H，d，J=7.5 Hz，H-1″），3.2-3.8（6H，m，H-2″～5″，6a″，6b″）；¹³C-NMR（MeOH-d₄，125 MHz）δ：136.1（C-1），110.3（C-2），149.6（C-3），147.7（C-4），114.7（C-5），118.7（C-6），86.1（C-7），54.1（C-8），71.3（C-9），132.3（C-1′），109.6（C-2′），149.3（C-3′），146.1（C-4′），116.6（C-5′），118.4（C-6′），85.7（C-7′），53.9（C-8′），71.2（C-9′），101.4（C-1″），73.5（C-2″），76.8（C-3″），69.9（C-4″），76.4（C-5″），61.1（C-6″），55.4（3-OCH₃），55.1（3′-OCH₃）。以上數(shù)據(jù)與文獻[14]松脂素-β-D-葡萄糖苷的數(shù)據(jù)一致。

化合物10 白色晶體，紫外 254 nm下無暗斑，10%硫酸乙醇顯色呈棕黑色。¹H-NMR（CDCl₃，500 MHz）δ：5.11～5.18（6H，m），1.89～2.13（20H，m），1.71（6H，s），1.63（18H，s）；¹³C-NMR（MeOH-d₄，125 MHz）季碳信號135.3，135.1，131.4（3×2）；叔碳信號124.6，124.5，124.3（3×2）；仲碳信號39.9，39.8，28.5，27.0，26.8（5×2）；伯碳信號25.9，17.8，16.2，16.3（3 × 2）。以上數(shù)據(jù)與文獻[15]角鯊烯數(shù)據(jù)一致。

4 抗氧化實驗

4.1 溶液配制 用無水乙醇將DPPH自由基配制成2 × 10^-3mol·L^-1溶液，置于4 ℃避光保存。將各樣品化合物與陽性對照藥分別用無水乙醇配制成0.01 mol·L^-1溶液，測試前用無水乙醇稀釋成所需濃度。

4.2 活性的測定方法 參照文獻實驗方法[16]并加以改進，將不同濃度的供試品溶液100 μL和2×10^-4mol·L^-1DPPH自由基溶液100 μL加入96孔板各孔中，選擇常用抗氧化劑維生素C（Vit C）和2，6-二叔丁基對甲酚（BHT）作為陽性對照，同時以不加DPPH自由基（以100 μL無水乙醇代替DPPH自由基）的供試品溶液各濃度作為對照以消除供試品本身顏色對測試結(jié)果的干擾，并設(shè)DPPH自由基陰性對照（以100 μL無水乙醇代替供試品），每組平行設(shè)3個復(fù)孔。將96孔板放入酶標儀中，振蕩1 min，并于此條件下保存（室溫、避光），30 min后測試其在517 nm處的吸光度A，按如下公式計算供試品的自由基清除率。

4.3 活性測試結(jié)果 自由基清除率公式：清除率=[A_DPPH.control–（A_sample– A_{sample.control}）] / A_DPPH.control× 100%。其中：A_DPPH.control為DPPH自由基陰性對照組A的平均值；A_sample為樣品組A的平均值；A_{sample.control}為樣品乙醇對照組A平均值。計算IC₅₀。

杜仲葉中化合物的DPPH自由基清除活性結(jié)果見表1，其中化合物2的活性表現(xiàn)出顯著的抗氧化活性，活性強于Vit C，化合物 1，3，9顯示中等抗氧化活性，弱于Vit C但強于BHT的活性，化合物4，6活性較弱。

5 討論

杜仲是地質(zhì)史上第三紀冰川運動殘留下來的唯一一科一屬的落葉喬木。在我國，杜仲主要分布于陜、甘、川三省交界的秦巴山區(qū)，為國家二級珍稀樹種。傳統(tǒng)上以杜仲皮入藥，具有補肝腎，強筋骨，調(diào)血壓，防衰老，抗腫瘤等功效，藥用價值極高。然而，在資源考察中發(fā)現(xiàn)，杜仲采收仍以伐樹剝皮為主，而從種樹到剝皮一般需要15年以上，因此僅以皮作為藥源勢必引起資源緊缺。研究表明，杜仲葉與皮具有相似的化學(xué)成分和藥理作用，且資源豐富，具有可再生的特點，因此，系統(tǒng)開展杜仲葉物質(zhì)基礎(chǔ)研究，可為杜仲葉替代杜仲皮藥用提供理論依據(jù)。

骨質(zhì)疏松癥是老年人常見疾病，其發(fā)病率、致殘率高，嚴重危害著人們的身體健康。研究發(fā)現(xiàn)活性氧可以增強破骨細胞的活性，減少成骨細胞的數(shù)量以及直接參與基質(zhì)的降解，可能是導(dǎo)致骨質(zhì)疏松癥發(fā)生的誘因之一。中藥中富含抗氧化成分，如黃酮、木脂素等多酚類物質(zhì)，從中尋找活性成分，對于發(fā)掘新型抗骨質(zhì)疏松藥物具有重要意義。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，杜仲葉中黃酮類和木脂素類化學(xué)成分均表現(xiàn)出較強的抗氧化活性，為后期深入開展杜仲預(yù)防絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥藥理作用的研究奠定了基礎(chǔ)。endprint

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Chemical constituents of leaf of Eucommia ulmoides

YANG Fang， YUE Zheng-gang， WANG Xin， ZHANG Xiu-peng， CHAI Jiang，

CUI Jiu-cheng， SONG Xiao-mei， MEI Qi-bing

（1.Shaanxi College of Traditional Chinese Medicine， Xianyang 712046， China；

2. School of Pharmacy， the Fourth Military Medical University， Xi′an 710032， China；

3. Collaborative Innovation Center for Chinese Medicine in Qinba Mountains， Xi′an 710032， China；

4. the First Hospital of Xi′an， Xi′an 710002， China）

[Abstract] Ten compounds were isolated from the leaf of Eucommia ulmoides by means of recrystallization and chromatographic techniques such as D-101 macroporous resin，MCI resin，ODS gel，Sephadex LH-20 and Rp-HPLC. Their structures were identified by NMR spectral analyses as kaempferide 3-O-β-D-glucoside（1），quercetin-3-O-β-D-glucoside（2），quercetin（3），quercetin-3-O-β-D-xylosyl-（1→2）-β-D-galactoside（4），kaempferol-3-O-α-L-rhamnosyl-（1→6）-β-D-glucoside（5），（2S，3S）-taxifolin 3-O-β-D-glucoside（6），4-hydroxy cinnamic acid（7），（+）-cycloolivil（8），pinoresinol β-D-glucoside（9），squalene（10）. Among them compounds 1，5-7，10 were isolated from the Eucommia genus for the first time. In the DPPH free radical scavenging assay，compound 2 exhibited significant activity（IC₅₀13.7 μmol·L^-1），compared with vitamin C（IC₅₀59.9 μmol·L^-1）； compounds 1，3 and 9 showed moderate activity（IC₅₀161，137， 214 μmol·L^-1），compared with 2，6-di-tert-butyl-4-methylphenol（IC₅₀236 μmol·L^-1）； compound 4 and 6 showed weak activity（IC₅₀264， 299 μmol·L^-1）.

[Key words] Eucommia ulmoides； chemical constituents； flavonoids； lignans； antioxidant activity of DPPH free radical scavenging assay

doi：10.4268/cjcmm20140817

[責(zé)任編輯 孔晶晶]endprint