邴晏如，莫和國，黃健云，李璐琳，歐水連，黎泳儀，陸小琴，蔡錦梅

(南方醫(yī)科大學附屬小欖醫(yī)院檢驗科，廣東 中山 528415)

·論著·

男性不育患者精子形態(tài)與精中性α-葡糖苷酶和精漿彈性硬蛋白酶關系的研究

邴晏如，莫和國，黃健云，李璐琳，歐水連，黎泳儀，陸小琴，蔡錦梅

(南方醫(yī)科大學附屬小欖醫(yī)院檢驗科，廣東 中山 528415)

目的研究男性不育患者精子形態(tài)與精中性α-葡糖苷酶和精漿彈性硬蛋白酶的關系。方法466例男性不育患者分別根據年齡和精子正常形態(tài)百分率分成5組和8組，采用Diff-Quik染色法、酶法和酶聯免疫吸附試驗(ELISA)分別進行精子形態(tài)、精中性α-葡糖苷酶和精漿彈性硬蛋白酶的檢測。結果各年齡組的正常形態(tài)精子百分率和精漿彈性硬蛋白酶濃度差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，精中性α-葡糖苷酶的活性在41～50歲年齡段顯著降低，其他年齡段精中性α-葡糖苷酶的活性差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。在精子正常形態(tài)百分率不同的8組中，年齡差異不具統(tǒng)計學意義，精漿彈性硬蛋白酶濃度差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，精子正常形態(tài)百分率大于7.1%的5組精中性α-葡糖苷酶的活性差異無統(tǒng)計學意義，其余三組精中性α-葡糖苷酶的活性與各組精中性α-葡糖苷酶的活性差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。結論精子正常形態(tài)百分率不受年齡和精漿彈性硬蛋白酶濃度影響，而隨著精中性α-葡糖苷酶的活性降低而降低，精中性α-葡糖苷酶活性的顯著降低可能是導致精子形態(tài)畸形的獨立因素。

男性不育；精子形態(tài)；中性α-葡糖苷酶；彈性硬蛋白酶

隨著社會發(fā)展，不育癥的發(fā)病率呈明顯上升趨勢，育齡夫婦不育癥的發(fā)病率從20世紀60年代的7%～8%上升到近年來的15%～20%[1-2]。不育原因中20%是單獨由男性因素引起的，其余還有30%～40%與男性因素有關[3]，因此，近年來有關精子質量與男性不育原因的研究越來越引起臨床的重視，而精子形態(tài)學正是研究中最受關注的領域之一。本文研究男性不育患者精子形態(tài)與精中性α-葡糖苷酶和精漿彈性硬蛋白酶的關系，旨在評價不同因素對患者精子形態(tài)的影響程度，為男性不育癥的診斷和治療提供研究依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2012年6月至2013年12月在本院男科門診就診的466例不育男性，且精液常規(guī)檢查至少有一項參數結果異常，年齡21～49歲，平均33.6歲，根據年齡分成5組。診斷標準：同居一年及以上；性生活正常；未采用任何避孕措施；女方各項檢查均正常。

1.2 研究方法

1.2.1 標本采集檢查前禁欲3～7 d，手淫法取精于干燥無菌廣口杯內，37℃液化，液化后進行精液常規(guī)檢測，新鮮標本液化后立即取部分標本在3 000×g離心10 min，留取精漿，用Eppendorf管分裝數支后-20℃保存，同時分裝數支全精液標本-20℃保存，以上所有分裝標本凍融一次后不再使用。

1.2.2 主要儀器試劑及檢測方法精液常規(guī)采用北京偉力WLJY-9000型彩色精子分析儀檢測；精子形態(tài)分析采用WHO推薦的Diff-Quik精子形態(tài)學快速染色法；精漿中性Q-葡糖苷酶(酶法)和精漿彈性硬蛋白酶(ELISA法)定量試劑盒均購自深圳華康公司；全自動酶標儀為美國Bio-Tek ELx800。

1.2.3 精子形態(tài)及精漿生化指標正常參考正常參考值均采用世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦標準或國際認可標準：精子形態(tài)按《WHO人類精液及精子—宮頸黏液相互作用實驗室檢測手冊》(第4版)進行分類，精子正常形態(tài)百分率正常參考值＞15%。精漿彈性硬蛋白酶正常參考值為＜290 ng/ml，精漿中性Ⅱ-葡糖苷酶正常參考值為≥20 Mu/一次射精(WHO)。

1.2.4 精子形態(tài)分析根據精子正常形態(tài)百分率從高到低分成8組，其中正常形態(tài)精子百分率≥15.0%為一組，輕度畸形：15.0%＞正常形態(tài)精子百分率≥10.0%為一組，中度畸形：10.0%＞正常形態(tài)精子百分率≥5.0%分成5組，重度畸形：正常形態(tài)精子百分率＜5.0%為一組。

1.3 統(tǒng)計學方法應用SPSS統(tǒng)計學軟件進行數據分析，計量數據以均數±標準差(±s)表示，組間均值比較采用方差分析方法，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

表1 不同年齡段不育男性精子形態(tài)、精漿彈性硬蛋白酶和精中性α-葡糖苷酶檢測結果(±s)

表1 不同年齡段不育男性精子形態(tài)、精漿彈性硬蛋白酶和精中性α-葡糖苷酶檢測結果(±s)

2 結果

2.1 不同年齡段不育男性精子形態(tài)、精漿彈性硬蛋白酶和精中性α-葡糖苷酶檢測結果466例不育男性根據年齡分成5組，各年齡組的正常形態(tài)精子百分率和精漿彈性硬蛋白酶濃度差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，精液量和精中性α-葡糖苷酶的活性在41～50歲年齡段顯著降低(P＜0.01)，其他年齡段精液量和精中性α-葡糖苷酶的活性差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)見表1。

2.2 不育男性精子形態(tài)與精漿彈性硬蛋白酶和精中性α-葡糖苷酶的關系分析在精子正常形態(tài)百分率不同的8組中年齡差異無統(tǒng)計學意義；精漿彈性硬蛋白酶濃度在這8組中的差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；精中性α-葡糖苷酶的活性在精子正常形態(tài)百分率大于7.1%的5組中差異無統(tǒng)計學意義，其余3組精中性α-葡糖苷酶的活性與各組精中性α-葡糖苷酶的活性差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，見表2。

表2 不育男性精子形態(tài)與精漿彈性硬蛋白酶和精中性α-葡糖苷酶的關系分析(±s)

表2 不育男性精子形態(tài)與精漿彈性硬蛋白酶和精中性α-葡糖苷酶的關系分析(±s)

3 討論

研究結果顯示，男性不育患者各年齡段的正常形態(tài)精子百分率和精漿彈性硬蛋白酶濃度差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。在精子正常形態(tài)百分率不同的8組中，精漿彈性硬蛋白酶濃度差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。Eggert-Kruse等[4]研究發(fā)現，不育患者血清及精漿彈性硬蛋白酶含量與精子形態(tài)及精子功能各項指標均無相關性；與之相反，Moretti等[5]通過對患者精漿彈性硬蛋白酶的檢測發(fā)現，精漿彈性硬蛋白酶含量＞1 000 ng/ml組與精漿彈性硬蛋白酶含量＜290 ng/ml組在頭部畸形方面差異有統(tǒng)計學意義。

本研究還顯示，精中性α-葡糖苷酶的活性在41～50歲年齡段顯著降低，這可能與該年齡段的射精量減少有關。精子正常形態(tài)百分率小于7.1%的3組精中性α-葡糖苷酶的活性分別與各組精中性α-葡糖苷酶的活性差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，且精子正常形態(tài)百分率在5.1%～6.0%，和5.0%以下兩組的精中性α-葡糖苷酶的活性均值均低于正常參考范圍(≥20 mU/一次射精)。當精中性α-葡糖苷酶的活性低于正常參考范圍時，精子形態(tài)表現為重度畸形，且精子正常形態(tài)百分率隨著精中性α-葡糖苷酶的活性降低而降低?？梢娋行驭?葡糖苷酶檢測不僅對輸精管阻塞有診斷價值[6-8]，對精子形態(tài)畸形因素的研究也有幫助。精中性α-葡糖苷酶活性的顯著降低可能是導致精子形態(tài)畸形的獨立因素。

綜上所述，精子形態(tài)與精漿彈性硬蛋白酶濃度無相關性，與精中性α-葡糖苷酶的活性關系密切，男性不育患者除做精液常規(guī)檢查外，還需要進一步作精中性α-葡糖苷酶的活性檢測，查找不育原因、評估生育能力并為疾病診斷、療效判定提供了客觀依據。

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[4]Eggert-Kruse W,Zimmermann K,Geissler W,et a1.Clinical relevance of polymorphonuclear(PMN-)elastase determination in semen and serum during infertility investigation[J].Int J Androl,32 (4):317-329

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Relationship between sperm morphology and neutral a-glucosidase or elastase in male infertile patients.

BING Yan-ru,MO He-guo,HUANG Jian-yun,LI Lu-lin,OU Shui-lian,LI Yong-yi,LU Xiao-Qin,CAI Jin-mei.Department of Clinical Laboratory,Xiaolan Hospital Affiliated to South Medical University,Zhongshan 528415,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo investigate the relationship between sperm morphology and neutral α-glucosidase or elastase in male infertile patients.MethodsA total of 466 males with infertility were divided into 5 groups and 8 groups according to age and sperm morphology respectively.Diff-Quik stain,enzyme and ELISA were used to check sperm morphology and neutral α-glucosidase or elastase activity respectively.ResultsThere were no significant differences in the percentage of morphological normal sperm and elastase concentration among different age groups(P＞0.05).The neutral α-glucosidase decreased remarkably in age group 41～50 and there were no significant differences in neutral α-glucosidase among other age groups(P＞0.05).There were no significant differences in age or elastase concentration among 8 morphology groups(P＞0.05).There were no significant differences in neutral α-glucosidase among the 5 morphology groups,in which the percentage of morphologically normal sperm was above 7.1%,while there were significant differences in neutral α-glucosidase among the rest 3 groups and other groups(P＜0.01).ConclusionThe percentage of morphologically normal sperm was not affected by age and elastase concentration,but decreased with the reducing of the activity of neutral a-glucosidase,which could be the independent factor of sperm morphological abnormity.

Male infertility;Sperm morphology;Neutral α-glucosidase;Elastase

R698+.2

A

1003—6350（2014）13—1950—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.13.0756

2014-01-27)

中山市醫(yī)學科研基金項目(編號：2013A020207)

莫和國。E-mail：945161386@qq.com