黃淑媛 覃川平 黎偉霞 黃涌森 楊 妍 廖衛(wèi)華 運(yùn)秀杰

1.深圳市龍崗區(qū)社會福利中心，深圳 518172；2.廣東省東莞市南城醫(yī)院，廣東東莞 523071

MP-DNA、MP-IgM及MP-IgG在兒童肺炎支原體感染中的動態(tài)變化

黃淑媛1覃川平1黎偉霞2黃涌森1楊 妍1廖衛(wèi)華1運(yùn)秀杰1

1.深圳市龍崗區(qū)社會福利中心，深圳 518172；2.廣東省東莞市南城醫(yī)院，廣東東莞 523071

目的探討MP-DNA、MP-IgM及MP-IgG在兒童肺炎支原體感染中的動態(tài)變化情況，為患兒的診治提供依據(jù)。 方法98例患兒均留取咽拭子和血清標(biāo)本，采用實(shí)時熒光PCR檢測患兒咽拭子標(biāo)本中的MP-DNA；采用顆粒凝集法檢測患兒血清中MP-IgM；采用ELISA檢測患兒血清中MP-IgG。MP-DNA陽性或MP-IgM陽性或兩者都是陽性者均確診為肺炎支原體感染病例，觀察分析確診病例在不同病程時MP-DNA、MP-IgM及MP-IgG的動態(tài)變化規(guī)律。結(jié)果98例患兒在就診當(dāng)天MP-DAN的陽性率達(dá)76.53%，隨著病程的延長，MP-DNA陽性率逐漸下降；MP-IgM的陽性率在就診當(dāng)天為36.73%，大約2周時達(dá)高峰，后緩慢下降；MP-IgG在就診當(dāng)天的陽性率很低，只有3.06%，大約4周時達(dá)高峰，至第8周時仍持續(xù)高值，三者在不同病程時期的檢出陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），且在就診當(dāng)天、治療后1、2、4及8周時差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。 結(jié)論 在肺炎支原體感染患兒不同的病程時期應(yīng)動態(tài)監(jiān)測MP-DAN、MP-IgM及MP-IgG，并進(jìn)行綜合分析，實(shí)現(xiàn)優(yōu)勢互補(bǔ)，以提高診斷的特異度和靈敏度，減少漏診和誤診，使患者得到早期正確的診斷及治療。

肺炎支原體；兒童；動態(tài)變化

肺炎支原體（Mycoplasma pneumoniae，MP）是一種呼吸道感染的常見病原體，在兒童社區(qū)獲得性肺炎中，有近40%由MP引起[1-2]。隨著MP的變遷，MP已成為小兒肺炎的主要病原體，并且感染率呈上升趨勢[3-4]，發(fā)病年齡也逐漸趨小。據(jù)臨床報道，應(yīng)用大環(huán)內(nèi)酯類抗生素治療MP感染的效果顯著，而β-內(nèi)酰胺類抗生素?zé)o效，故及時準(zhǔn)確的診斷可以有效地控制病情，避免延誤MP感染的治療，避免濫用抗生素，并能降低嚴(yán)重感染患兒的死亡率，因此，早期診斷出MP感染尤為重要。本研究回顧性分析了本院收治的98例MP-DNA陽性或MP-IgM陽性或兩者均為陽性的門診及住院患兒的臨床資料，探討MP-DNA、MP-IgM 及MP-IgG在兒童MP感染中的動態(tài)變化情況，為患兒的診治提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2009年1月～2013年3月以本福利中心及東莞市南城醫(yī)院98例MP-DNA陽性或MP-IgM陽性或兩者均陽性的門診及住院MP感染患兒為研究對象，年齡6個月～13歲，其中，男52，女46例。

1.2 方法

每例患兒均取就診當(dāng)天、1周、2周、4周及8周的咽拭子檢測MP-DAN，并同時抽血進(jìn)行MP-IgM及MP-IgG檢測；所有患兒均給予阿奇霉素（商品名：希舒美，輝瑞制藥有限公司，0.1 g/袋），10 mg/（kg·d），1次/d，用3 d停4 d，1周為1個療程，共治療4周。

1.2.1 MP-IgG的測定 采用ELISA方法，由晶美生物工程公司提供的MP-IgG抗體試劑盒，操作參照試劑盒內(nèi)說明書，標(biāo)本OD值與陰性對照OD值比較，以O(shè)D值≥2.0為陽性。

1.2.2 MP-IgM的測定 采用顆粒凝集法，Sero-Dia-MycoⅡ試劑盒由日本Fujirebio Inc提供，血清抗體56℃滅活，操作方法按說明書進(jìn)行，同時設(shè)立陽性與陰性對照孔，滴度≥80為陽性。

1.2.3 MP-DNA的測定 采用實(shí)時熒光PCR檢測患兒咽拭子標(biāo)本中的MP-DNA，試劑由中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供，儀器采用美國生物系統(tǒng)ABI-7500熒光定量PCR儀。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計學(xué)軟件對相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

共有98例患兒入選，隨著病情的好轉(zhuǎn)及治愈，至第8周時只有75例患兒參與隨訪。就診當(dāng)天患兒MP-DAN的陽性率最高，達(dá)76.53%，隨著病程的進(jìn)展，MP-DNA的陽性率逐漸下降；MP-IgM的陽性率至第2周時達(dá)高峰，然后緩慢下降；MP-IgG在就診當(dāng)天的陽性率很低，至第4周時達(dá)高峰，至第8周時仍持續(xù)高值。MP-DNA、MP-IgM及MP-IgG在不同病期檢出率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），故三者對MP感染的診斷價值高低因病程不同而異（表1，圖1）。

表1患兒不同病程MP-DNA、MP-IgM及MP-IgG陽性率的比較[n（%）]

圖1 患兒不同病程MP-DNA、MP-IgM及MP-IgG陽性率的動態(tài)變化情況直方圖

3 討論

MP感染在全球范圍內(nèi)均有發(fā)生，是繼細(xì)菌、病毒后，引起兒童呼吸道感染又一常見的病原，且MP感染的發(fā)病率有逐年上升趨勢，危害較大，嚴(yán)重者可引起全身炎癥反應(yīng)綜合征及心功能不全等肺外并發(fā)癥[5]。MP對β-內(nèi)酰胺酶類抗生素?zé)o效，對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素療效顯著。因此，早期正確診斷及如何提高M(jìn)P感染的診斷水平受到普遍關(guān)注。MP的分離培養(yǎng)雖然對診斷和鑒別有決定性意義，但是由于耗時較長，培養(yǎng)較困難，且檢出率低，故在臨床上很少應(yīng)用，血清特異性抗體測定是目前臨床診斷MP感染的最常用的實(shí)驗(yàn)室證據(jù)[6-7]。

MP-IgM是機(jī)體受MP感染后最早出現(xiàn)的特異性抗體，于發(fā)病后1～2 d即可檢出，大部分患者在感染后1周內(nèi)出現(xiàn)，少部分患兒在感染后7～10 d出現(xiàn)，約2周時達(dá)到高峰，可以持續(xù)12～16周甚至更長的時間[8]，IgM抗體陽性可作為早期或急性期感染的診斷指標(biāo)。本研究提示，患兒MP-IgM在就診當(dāng)天的陽性率為36.73%，至第2周時為79.59%，達(dá)到高峰，直至第8周時仍有較高的陽性率。MP-IgG的出現(xiàn)較晚，從病程第2周起陽性率開始增高，至第4周時達(dá)高峰，第8周時仍居高不下，基本與文獻(xiàn)報道一致。

國內(nèi)普遍認(rèn)為，MP-IgM在感染3～7 d后出現(xiàn)，比MP-IgG出現(xiàn)早，提示MP近期和當(dāng)前感染，但MP-IgM陽性并不總是表示當(dāng)前的感染狀態(tài)，部分患者可達(dá)半年之久，在某些病例中，MP-IgM在感染1年后仍然持續(xù)存在；另外，MP-IgM在再次感染MP后含量極微，或者無法檢測到[9]。MP-IgM抗體的檢測受多種因素的影響。①年齡：嬰幼兒免疫系統(tǒng)尚處于發(fā)展期，發(fā)育還未完全，在MP感染后患兒抗體生成不足，影響抗體檢出陽性率；②病程：抗原刺激機(jī)體免疫應(yīng)答產(chǎn)生抗體需要一段時間，MP-IgM抗體發(fā)病1周左右時才開始上升，對于病程＜1周的患兒，檢測MP-IgM抗體時容易造成漏診、誤診；③機(jī)體免疫狀態(tài)：對于免疫功能低下的患兒，其免疫反應(yīng)低，IgM升高幅度很小，導(dǎo)致MP-IgM抗體的陽性率低。因此，血清MP-IgM抗體的檢測在臨床應(yīng)用中有一定的局限性[7，10]，僅依賴于MP-IgM的檢測，有可能造成誤診或漏診。而IgG 較IgM出現(xiàn)晚，在體內(nèi)持續(xù)時間較長，可以作為回顧性診斷和亞急性感染狀態(tài)的指標(biāo)，進(jìn)行病原學(xué)追蹤。故需結(jié)合MP-DNA和MP-IgG以減少漏診和誤診，并進(jìn)行病原學(xué)追蹤。

與MP-IgM相比，MP-DNA陽性率在發(fā)病初期就很高，且不受病程是否達(dá)到高峰及感染程度的影響，而產(chǎn)生抗體需要一定時間[11]。尚曉云[12]發(fā)現(xiàn)，不少經(jīng)臨床及實(shí)時定量PCR確診的MP感染患兒，僅在出院前的最后1次MP-IgM檢測才出現(xiàn)陽性，有些病后1周MP-IgM為陰性的MP感染患兒，其病情可能較陽性者嚴(yán)重。如果研究者只選擇MP-IgM陽性的患兒，就有可能可能忽略了即將進(jìn)展為重癥臨床表現(xiàn)的患兒[13]。因此，在發(fā)病初期MP-DNA對MP感染患兒具有很高的診斷價值，可以作為MP感染的早期診斷指標(biāo)。MP-DNA在發(fā)病初期的陽性率較高，隨著治療和病情的轉(zhuǎn)歸，陽性率迅速下降轉(zhuǎn)陰，表明MP-DNA可以直觀地反映MP在體內(nèi)感染和復(fù)制的情況。通過觀察MP-DNA動態(tài)變化，可以為臨床動態(tài)觀察治療效果提供依據(jù)[14]，故應(yīng)聯(lián)合動態(tài)監(jiān)測MP-DNA和MP-IgM來減少漏診和誤診的發(fā)生。本研究通過觀察MP-DNA在不同病程的動態(tài)變化，發(fā)現(xiàn)患兒的MP-DNA隨著病程的延長和康復(fù)好轉(zhuǎn)其陽性率逐漸下降，表明MP-DNA可以直觀地反映MP在體內(nèi)的感染和復(fù)制情況，可以為臨床動態(tài)觀察治療效果提供依據(jù)，可用于患兒病情轉(zhuǎn)歸的預(yù)測評估。

綜上所述，臨床中遇到懷疑為MP感染的患兒時最好同時檢測MP-DNA、MP-IgM及MP-IgG，以提高診斷的特異度和靈敏度，減少漏診和誤診的發(fā)生，使患者得到早期正確的診斷及治療，而動態(tài)檢測MP-DNA、 MP-IgM及MP-IgG，既可在診斷中優(yōu)勢互補(bǔ)，又可了解疾病的病程及轉(zhuǎn)歸情況，為臨床診斷治療提供參考。

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Dynamic changes of MP-DNA,MP-IgM and MP-IgG in children with Mycoplasma pneumoniae infection

HUANG Shu-yuan1QIN Chuan-ping1LI Wei-xia2HUANG Yong-sen1YANG Yan1LIAO Wei-hua1YUN Xiu-jie1
1.Social Welfare Centre of Longgang District in Shenzhen City of Guangdong Province,Shenzhen 518172,China; 2.Nancheng Hospital of Dongguan City in Guangdong Province,Dongguan 523071,China

ObjectiveTo explore the dynamic changes of MP-DNA,MP-IgM and MP-IgG in children with Mycoplasma pneumoniae infection.MethodsThroat swabs and serum samples were taken from the 98 cases of children,MP-DNA in throat swabs was detected by real time fluorescence PCR,serum MP-IgM was detected by pellet agglutination assay, serum MP-IgG was detected by ELISA.Children with positive MP-DNA or MP-IgM alone or both MP-DNA and MPIgM were all diagnosed as Mycoplasma pneumoniae infection,the changes in the positive rates of MP-DNA,MP-IgM and MP-IgG during different courses were observed and analyzed.ResultsIn the early disease course,The positive rate of MP-DAN was up to 76.53%,and the positive rate of MP-DAN was gradually decreased with the prolongation of the disease.The positive rate of MP-IgM was 36.73%in the early disease course，about 2 weeks up to peak,then decreased slowly.In the early disease course,the positive rate of MP-IgG was very slow,which was only 3.06%,and then it reached the peak after 4 weeks of the treatent,and continued high value until to eight weeks,the differences of the positive rate of MP-DAN,MP-IgM and MP-IgG during different course were all statistically significant(P＜0.01),and there were statistical differences in the early disease course,second week,fourth weeks and eighth weeks(P＜0.01).ConclusionIn different periods of children with Mycoplasma pneumoniae infection,the dynamic monitoring of MP-DAN,MP IgM and MP-IgG should be taken,and gives synthetically analysis,complement each other in order to improve the diagnostic sensitivity and specificity,and reduce missed diagnosis and misdiagnosis,make the patients get early correct diagnosis and treatment.

Mycoplasma pneumoniae;Children;Dynamic change

R375+.2

A

1674-4721（2014）02（a）-0095-03

2013-11-26本文編輯：袁 成）