勾曉丹

遼寧省朝陽市食品藥品檢驗所檢驗二室，遼寧朝陽 122000

HPLC法測定止咳定喘丸中苦杏仁苷的含量

勾曉丹

遼寧省朝陽市食品藥品檢驗所檢驗二室，遼寧朝陽 122000

目的 測定止咳定喘丸中苦杏仁苷的含量，為止咳定喘丸的質(zhì)量研究提供依據(jù)。 方法 采用高相液相色譜（HPLC）法測定止咳平喘丸中苦杏仁的活性成分苦杏仁苷的含量；使用Agilent SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱；以乙腈-0.1%磷酸（8∶92）為流動相，流量1.0 ml/min。 結(jié)果 建立了HPLC法測定止咳定喘丸中苦杏仁苷的含量，苦杏仁苷進樣量在0.0824～2.0600 μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好（r=0.9995），平均回收率為99.03%，RSD= 2.25%（n=6）。 結(jié)論 該方法準確、重復(fù)性好，可用于止咳平喘丸的質(zhì)量控制。

HPLC；止咳平喘丸；苦杏仁苷

止咳平喘丸由苦杏仁（炒）、麻黃、石膏、紫蘇子（炒）、厚樸（姜制）、陳皮、罌粟殼（蜜炙）、甘草、茶葉等中藥材加工制成的復(fù)方純中藥制劑[1]，收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準中藥方成制劑第三冊》[2]。功能主治：清熱宣肺，止咳平喘。用于咳嗽氣喘，久咳不止。該藥原標準過于簡單，標準中只對其性狀和檢查項確定了檢驗標準，無其他檢定方法，對其產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量無法控制。為控制止咳平喘丸的質(zhì)量，本實驗采用高效液相色譜 （high performance liquid chromatography，HPLC）法擬建立止咳平喘丸的質(zhì)量控制方法，為該制劑的質(zhì)量控制提供方法，為定量指標提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗儀器

島津LC-2010A型高效液相色譜儀（包括LC-2010型紫外檢測器）；LC Solution色譜工作站。

1.2 試劑與試藥

乙腈為色譜純，其余試劑為分析純，水為超純水?？嘈尤受諏φ掌罚ㄖ袊幤飞镏破窓z定所，批號：110820-200403）；止咳定喘丸（東芝堂藥業(yè)有限公司，批號：130203、130303、130403）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱Agilent SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸（8∶92）；柱溫：30℃；體積流量：1.0 ml/min；檢測波長207 nm；進樣量10 μl。理論板數(shù)：按苦杏仁苷計算應(yīng)不低于7000，外標法計算含量。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液 取苦杏仁苷對照品，加甲醇制成每毫升含80 μg的溶液。

2.2.2 供試品溶液 取本品粉末3.5 g，精密稱定，置塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 ml，密塞，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾，精密量取續(xù)濾液5 ml，置50 ml量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，即得。

2.2.3 陰性對照液 按處方及工藝制備不含苦杏仁的陰性樣品，同供試品溶液的制備方法學(xué)考察陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 陰性干擾實驗 取“2.2”項下3種溶液各10 μl，分別注入高效液相色譜儀測定。結(jié)果色譜圖中在苦杏仁苷峰相應(yīng)的保留時間附近未檢出干擾峰（圖1）。

圖1 止咳定喘丸HPLC色譜圖

2.3.2 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對照品溶液1、5、10、15、20、25 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以對照品進樣量為橫坐標（X），峰面積積分值為縱坐標（Y），繪制標準曲線，得回歸方程為Y=117 632X－347 713，r=0.9995。結(jié)果表明，苦杏仁苷對照品進樣量在0.0824～2.0600 μg范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系。

2.3.3 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10 μl，重復(fù)進樣6次，記錄色譜圖，按峰面積計算，結(jié)果RSD= 0.18%，說明儀器精密度良好。

2.3.4 重現(xiàn)性試驗 取同一批號樣品6份，分別依法處理后測定。結(jié)果RSD=0.64%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗 取同一批號樣品溶液，在室溫條件下放置，按上述色譜條件，分別于0、2、4、8、12、24 h進樣，測得峰面積值RSD=0.78%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.6 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的供試品（批號：130203，苦杏仁苷含量為3.28 mg/g）6份，每份0.5 g，精密加入苦杏仁苷對照品溶液（0.1950 mg/ml）2 ml，按供試品溶液方法制備，依法測定含量并計算回收率（表1）。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果

2.4 樣品含量的測定

取3批樣品，按供試品溶液方法制備，分別進樣10 μl，依法測定，采用外標法計算樣品中苦杏仁苷的含量（表2）。

表2 樣品中苦杏仁苷的測定結(jié)果（n=5）

3 討論

本實驗中，苦杏仁苷在207 nm處有最大吸收，選用207 nm作檢測波長，苦杏仁苷峰有最大峰面積，其他組分在此無干擾吸收。

苦杏仁苷的含量測定方法現(xiàn)多用HPLC法[3]。在實驗過程中，曾按照參考文獻，用各種比例的甲醇-水、乙腈-水作流動相，發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)的穩(wěn)定性太差[4-5]，無法檢測，且出現(xiàn)雙齒峰，改用乙腈-水后，得到單峰，穩(wěn)定性明顯改善，且靈敏度也有所提高，苦杏仁苷色譜峰基本上達到了基線分離。經(jīng)過反復(fù)實驗，最終建立了適合本品的含量測定方法，流動相比例為乙腈-0.1%磷酸（8∶92）。

綜合考慮提取分離中藥有效成分常用的各種方法的優(yōu)缺點，本實驗以甲醇為溶劑，由于溶劑浸提法、回流提取法和索式提取法提取時間較長，超聲提取法提取時間短，且無其他組分峰干擾，因此選擇超聲提取法作為止咳平喘丸中苦杏仁苷的提取方法[6-7]。

經(jīng)筆者調(diào)研發(fā)現(xiàn)，在氣候變化明顯的季節(jié)，尤其是秋冬季節(jié)，咳嗽氣喘的患者很多。此藥功能主治為清熱宣肺，止咳平喘。用于咳嗽氣喘，久咳不止。用途廣泛且有一定的市場占有率，但原標準過于簡單，標準中只對其性狀和檢查項確定了檢驗標準，無其他檢定方法，筆者認為本研究闡述的檢驗方法專屬性強、重現(xiàn)性好、陰性對照無干擾、方法可靠，使止咳定喘丸原有的質(zhì)量標準得到充實和完善[8-9]，更能準確、有效地控制止咳定喘丸的質(zhì)量標準。

[1]國家藥典委員會.中國藥典一部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：187-188.

[2]衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準中藥方成制劑第三冊[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1991：41.

[3]袁丹，胡爽，畢開順，等.HPLC法測定復(fù)方制劑中苦杏仁苷含量的研究[J].藥物分析雜志，2002，22（5）：361.

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The content of amygdalin in Zhikedingchuan pills by HPLC

GOU Xiao-dan
The Second Inspection Room,Institute for Food and Drug Control of Chaoyang City,Liaoning Province,Chaoyang 122000,China

ObjectiveTo establish a method for amygdalin in Zhikedingchuan pills,in order to provide the basis for Zhikedingchuan pills quality research.MethodsThe content of amygdalin was determind by HPLC was carried on with a Agilent SB-C18（4.6 mm×250 mm,5 μm）column,acetonitrile-0.1%phosphate(8∶92)as the mobile phase at the flow rate of 1.0 ml/min.Rusults Establish a method of HPLC for amygdalin in Zhikedingchuan pills.Amygdalin showed good linear relationship in the range of 0.0824-2.0600 μg(r=0.9995),the average recovery was 99.03%,RSD=2.25%(n=6).ConclusionThe method is accurate with a good reproducibility,and suitable for quality control of Zhikedingchuan pills.

HPLC;Zhikedingchuan pills;Amygdalin

R286.0

A

1674-4721（2014）02（a）-0007-03

2013-11-01本文編輯：林利利）

勾曉丹（1982-），女，籍貫：遼寧朝陽，藥學(xué)專業(yè)，本科學(xué)歷，理學(xué)士學(xué)位，主管中藥師，主要研究方向：中藥制劑的質(zhì)量控制