俞成林 崔香丹* 金武丕

（延邊大學(xué)附屬醫(yī)院急診科，吉林 延吉 133000）

PDTC對重癥急性胰腺炎大鼠腺胞細(xì)胞凋亡的影響

俞成林 崔香丹* 金武丕

（延邊大學(xué)附屬醫(yī)院急診科，吉林 延吉 133000）

目的 觀察胰腺腺胞細(xì)胞凋亡在大鼠重癥急性胰腺炎中的表達。方法 大鼠60只隨機分為對照組、模型組、干預(yù)組。造模開始第3、6、12 h麻醉后左心室采血處死，取胰腺組織；TUNEL法進行細(xì)胞凋亡檢測，雙抗體夾心ABC-ELISA法測定NF-κB及Bcl-2的含量。結(jié)果 與對照組比較，模型組大鼠血清淀粉酶、胰腺組織病理學(xué)評分、血漿NF-κB、Bcl-2含量顯著增高（P＜0.01），NF-κB與Bcl-2呈正相關(guān)關(guān)系（r=0.435，P＜0.05）；與模型組比較，干預(yù)組血淀粉酶升高幅度和NF-κB、Bcl-2含量明顯降低，細(xì)胞凋亡指數(shù)增加（P＜0.01）。結(jié)論 NF-κB激活介導(dǎo)上調(diào)Bcl-2參與L-精氨酸誘導(dǎo)的SAP發(fā)生、發(fā)展過程；PDTC干預(yù)NF-κB激活使大鼠胰腺腺胞細(xì)胞凋亡增加，改善胰腺病理損傷。

重癥急性胰腺炎；細(xì)胞凋亡；核轉(zhuǎn)錄因子-κB；四氫化吡咯二硫代氨基甲酸酯

急性胰腺炎的發(fā)病機制至今尚不完全清楚，大量實驗研究表明胰腺腺胞細(xì)胞凋亡在急性胰腺炎的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸中起重要作用[1]。近年來，L-精氨酸用于動物重癥急性胰腺炎（SAP）模型的研究[2]。本實驗通過動態(tài)觀察NF-κB及Bcl-2在L-精氨酸誘導(dǎo)的大鼠SAP模型中的表達，進一步探討細(xì)胞凋亡在急性胰腺炎發(fā)病中的作用及NF-κB抑制劑PDTC對胰腺損傷的保護作用。

1 材料與方法

1.1 大鼠急性胰腺炎模型制造和取材

清潔級健康Wistar雄性大鼠60只，隨機分成模型組、干預(yù)組、正常組。所有大鼠在實驗前禁食12 h，自由飲水。模型組給予L-精氨酸2×200 mg/100 mg分2次腹腔注射，間隔1 h；干預(yù)組造模前1 h給予PDTC100 mg/kg腹腔注射，余同模型組；對照組給予相同劑量的生理鹽水腹腔注射。每組大鼠分別于造模開始第3、6、12 h麻醉后左心室采血處死，取胰腺組織用甲醛固定。

1.2 觀察指標(biāo)及檢測方法

全自動生化分析儀檢測血清淀粉酶濃度，HE染色觀察胰腺組織病理學(xué)改變，TUNEL法進行細(xì)胞凋亡檢測，雙抗體夾心ABC-ELISA法測定NF-κB及Bcl-2的含量。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS11.5進行兩因素方差分析及直線相關(guān)的積差相關(guān)分析，P＜0.05提示有顯著差異。

2 結(jié) 果

2.1 血清淀粉酶的變化

模型組和干預(yù)組大鼠的血清淀粉酶均較對照組顯著增高（P＜0.05），干預(yù)組淀粉酶較模型組顯著降低（P＜0.01），見表1。

2.2 胰腺組織病理學(xué)改變

對照組的大鼠胰腺組織無明顯改變。模型組見水腫性胰腺炎表現(xiàn)；干預(yù)組大鼠的胰腺水腫及炎癥減輕，細(xì)胞壞死減少，見表1。

2.3 胰腺腺胞細(xì)胞凋亡

對照組細(xì)胞凋亡罕見。模型組細(xì)胞凋亡指數(shù)較對照組升高，隨時間逐漸下降（P＜0.05）。干預(yù)組細(xì)胞凋亡指數(shù)較模型組顯著增加（P＜0.01）見表1。

2.4 血漿NF-κB及Bcl-2的變化

模型組血漿NF-κB及Bcl-2較對照組明顯增加（P＜0.01），干預(yù)組較模型組明顯下降（P＜0.05），二者呈正相關(guān)（r=0.435，P＜0.05），見表2。

表1 各組大鼠血清淀粉酶的變化、胰腺組織病理學(xué)評分及細(xì)胞凋亡指數(shù)AI（%）

表2 各組大鼠血漿NF-κB及Bcl-2的變化[()，pg/nL]

表2 各組大鼠血漿NF-κB及Bcl-2的變化[()，pg/nL]

注：模型組與對照組比較P＜0.01；干預(yù)組與模型組比較P＜0.05

組別 時間 n NF-κB Bcl-2對照組 3 h 6 27.2±1.9 24.1±1.6 6 h 6 26.5±3.7 26.6±2.5 12 h 6 28.3±2.4 35.7±1.8模型組 3 h 6 61.9±2.7 60.3±5.4 6 h 6 69.8±2.1 68.8±2.0 12 h 6 78.6±5.1 75.1±3.1干預(yù)組 3 h 6 50.1±1.3 43.8±3.8 6 h 6 61.2±1.9 58.6±2.9 12 h 6 70.9±3.8 64.8±3.5

3 討 論

近年來，在不同程度急性胰腺炎動物模型中發(fā)現(xiàn)腺胞細(xì)胞凋亡與胰腺炎病情輕重負(fù)相關(guān)性[2]。核因子-κB（NF-κB）是一組真核細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄因子，對下游抗凋亡基因的調(diào)節(jié)發(fā)揮作用[3]。研究表明[4]L-精氨酸能激活NF-κB，在重癥胰腺炎中可能通過上調(diào)抗凋亡基因，引起胰腺和遠處器官的損傷。本研究顯示，大鼠腹腔注射L-精氨酸后，隨著時間的推移，模型組大鼠血清淀粉酶和血漿NF-κB、Bcl-2含量與正常組比較明顯增高（P＜0.01），與病理上胰腺炎癥損害嚴(yán)重程度相平行，兩指標(biāo)呈正相關(guān)關(guān)系（r=0.435，P＜0.05），模型組細(xì)胞凋亡指數(shù)較對照組升高（P＜0.05）；而經(jīng)PDTC預(yù)處理的干預(yù)組大鼠血淀粉酶升高幅度和NF-κB、Bcl-2含量與模型組對比明顯降低，胰腺組織的出血、壞死減輕（P＜0.05），而細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著升高（P＜0.01）。

綜上所述，本實驗結(jié)果提示NF-κB激活介導(dǎo)上調(diào)Bcl-2參與L-精氨酸誘導(dǎo)的SAP發(fā)生、發(fā)展過程；通過抗凋亡作用來加重胰腺炎的病變程度。PDTC通過抑制NF-κB活性后細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯上升，使重癥胰腺炎向輕型轉(zhuǎn)化，有效改善胰腺病理損傷[5]。

[1] 楊元生,崔淑蘭,陳墾,等.重癥胰腺炎實驗動物模型的研究進展[J].世界華人消化雜志,2009,17(25):2601-2606.

[2] 陳墾,鄭吉順,龍友明,等.核因子-κB在L-精氨酸所致小鼠急性水腫性胰腺炎模型早期發(fā)病中的作用探討[J].胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志,2004,13(4):371-374.

[3] Wang YL,Zheng YJ,Zhang ZP,et al.Effects of gut barrier dysfunction and NFāκB activation on aggravating mechanism of severe acute pancreatitis[J].Dig Dis,2009,10(1): 30-40.

[4] Kan S,Huang F,Tang J,et al.Role of Intrapulmonary Expression of Inducible Nitric Oxide Synthase Gene and Nuclear Factor κB Activation in Severe Pancreatitis-associated Lung Injury[J]. Inflammation,2010,33(5): 287-294.

[5] Li YY,Lu XY,Li XJ,et al.Intervention of pyrrolidine dithiocarbamate and tetrandrine on cellular calcium overload of pancreatic acinar cells induced by serum and ascitic fluid from rats with acute pancreatitis[J].astroenterol Hepatol,2009,24(1): 155-165.

R576；R-33

B

1671-8194（2014）18-0082-02

延邊大學(xué)科技發(fā)展計劃項目，延大科合字（2010）第024號

*通訊作者