杜 亮 ，王國金 ，王維劍

（1.中國人民解放軍濟南軍區(qū)聯(lián)勤部疾病預(yù)防控制中心，山東 濟南 250014；2.山東省食品藥品檢驗所，山東 濟南 250101）

克拉霉素屬大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，制劑有片劑、膠囊劑及顆粒劑，其原料與制劑均收載于2010年版《中國藥典（二部）》[1-2]。2010年版《中國藥典(二部)》中克拉霉素顆粒的溶出度采用硫酸顯色法檢測，該方法專屬性差、操作煩瑣、易腐蝕儀器設(shè)備。筆者采用高效液相色譜（HPLC）法替代硫酸顯色法，建立了一種快速、簡便、準(zhǔn)確的克拉霉素顆粒溶出度測定方法。現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀；RC-806型溶出度測定儀器；BP211D型電子天平。克拉霉素對照品由中國藥品生物制品檢定所提供，批號為130558-200501，含量為97.5%；克拉霉素顆粒樣品來源見表1；乙腈為色譜純，水為蒸餾水。

表1 克拉霉素顆粒樣品來源

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent Zorbax-C18柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀 9.11 g，加水溶解并稀釋至1 000 mL，加三乙胺 2 mL，用磷酸調(diào)節(jié) pH 至 5.5）-乙腈（60∶40）；檢測波長：210 nm；流速：1.0 mL /min；柱溫：45 ℃ ；進(jìn)樣量：40 μL。

2.2 溶液制備

取克拉霉素顆粒樣品，照溶出度測定法，以醋酸鹽緩沖液（取0.1 mol/L醋酸鈉溶液，用冰醋酸調(diào)節(jié) pH 至 5.0）900 mL為溶出介質(zhì)，以50 r/min的速度離心30 min，取溶液適量，濾過，精密量取續(xù)濾液適量，用溶出介質(zhì)稀釋成每1 mL中約含55 μg的溶液，即得供試品溶液；取克拉霉素對照品適量，精密稱定，加少量乙腈溶解并用溶出介質(zhì)稀釋成每1 mL中約含55 μg的溶液，即得對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性考察：將克拉霉素顆粒的輔料按處方配比混合，取處方量（相當(dāng)于1袋的輔料）的混合輔料，用900 mL溶出介質(zhì)超聲30 min，濾過，取續(xù)濾液按供試品溶液制備方法稀釋，得輔料供試液。取輔料供試液、溶出介質(zhì)、對照品溶液、供試品溶液分別用HPLC法進(jìn)樣測定。結(jié)果表明，輔料與溶出介質(zhì)對溶出度測定均無干擾。見圖1。

檢測限與定量限試驗：用溶出介質(zhì)分別配制質(zhì)量濃度為0.13，0.26，0.39，0.77，1.3，2.6 μg /mL 的對照品溶液，分別依法進(jìn)樣測定，進(jìn)樣量為 40 μL。結(jié)果檢測限進(jìn)樣質(zhì)量濃度為 0.26 μg /mL，定量限進(jìn)樣質(zhì)量濃度為 0.77 μg /mL。

線性關(guān)系考察：取克拉霉素對照品約25 mg，加少量乙腈溶解并用溶出介質(zhì)稀釋成質(zhì)量濃度為1 μg/mL的溶液，作為對照品貯備溶液。精密量取上述對照品貯備溶液 2，3，4，5，6，7，8，9 mL分別置100 mL容量瓶中，用溶出介質(zhì)稀釋至刻度，依法進(jìn)樣測定，得線性方程為 A＝1.998 7 C+0.152 1，r＝0.999 3(n＝8)。結(jié)果表明，克拉霉素質(zhì)量濃度在 20.60～92.68 μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

圖1 高效液相色譜圖

回收率試驗：將克拉霉素顆粒輔料按處方配比混合，取處方量（相當(dāng)于 1袋的輔料）的混合輔料 9份，分別加入標(biāo)示量100%，80%，50%的克拉霉素對照品各3份，按擬訂方法分別測定；另取克拉霉素對照品，同法測定。結(jié)果平均回收率為99.30%，RSD ＝0.91%。

穩(wěn)定性試驗：取供試品溶液，分別于 0，1，2，4，6，8，12 h 時進(jìn)樣測定，考察溶液的穩(wěn)定性。結(jié)果的 RSD為0.70%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

檢測方法耐用性試驗：取對照品溶液，分別用3臺不同的高效液相色譜儀與3根不同的色譜柱，按擬訂色譜條件分別進(jìn)樣測定，考察方法的系統(tǒng)適應(yīng)性，結(jié)果3套系統(tǒng)均能滿足檢測的需要，表明該方法耐用性良好。

2.4 溶出均一性曲線測定

取本品4個不同規(guī)格樣品各1批，依法操作，分別于5，10，15，20，30，45，60 min時取樣測定，計算每個時間點的平均累計溶出量，繪制溶出曲線，見圖2。結(jié)果表明，各批樣品溶出均一性均較好。

2.5 樣品溶出度測定

取克拉霉素顆粒4個規(guī)格共10批樣品，照擬訂方法測定，結(jié)果見表2。結(jié)果表明，10批樣品在30 min的溶出度均大于標(biāo)示量的80%。

3 討論

檢測方法選擇：中國藥典中收載了克拉霉素顆粒劑溶出度檢測方法，采用硫酸顯色法，但該方法專屬性較差，且操作復(fù)雜，具有一定的危險性（硫酸腐蝕），因此本研究建立了專屬性比硫酸顯色法更強的HPLC法，且方法簡單、快速、準(zhǔn)確，適用于克拉霉素顆粒的溶出度測定。

溶出介質(zhì)選擇：中國藥典的克拉霉素顆粒、膠囊及片劑以及美國藥典(2008年版2 692頁中克拉霉素片劑的溶出介質(zhì)均為醋酸鹽緩沖液（pH＝5.0）[3]，本研究參考上述兩國藥典，采用醋酸鹽緩沖液（pH＝5.0）作為克拉霉素顆粒劑的溶出介質(zhì)。

溶出轉(zhuǎn)速與取樣時間選擇：首先采用槳法的最低轉(zhuǎn)速（50 r/min）進(jìn)行溶出曲線考察。取5個不同廠家產(chǎn)品各1批，50 r/min，依法操作，分別于 5，10，15，20，30，45，60 min 時取樣測定，計算每個時間點的平均累計溶出量，繪制溶出曲線。50 r/min，15 min時，克拉霉素已基本達(dá)到溶出平臺。參照溶出度轉(zhuǎn)速選擇時首選低轉(zhuǎn)速的原則，本研究選擇了50 r/min，30 min時測定溶出度，不再考慮更高的轉(zhuǎn)速。

圖2 克拉霉素顆粒溶出曲線圖

表2 樣品溶出度測定結(jié)果

參考文獻(xiàn)：

[1]張 彥，陳 雅，何鳳慈.克拉霉素膠囊質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)[J].中國藥業(yè)，1999，8（11）：11.

[2]周 艷，高旭光，王德霞，等.克拉霉素片處方及工藝研究[J].中國藥業(yè)，2012，21（4）：42-43.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：316-318.