閆 蕾,張洪宇,郭英君

(寧夏自治區(qū)人民醫(yī)院 感染科，寧夏 銀川 750001)

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丹參注射液對(duì)非酒精性脂肪肝炎性因子IL-6、TNF-a的影響

閆 蕾,張洪宇,郭英君

(寧夏自治區(qū)人民醫(yī)院 感染科，寧夏 銀川 750001)

目的：觀察丹參注射液對(duì)非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠血清中白細(xì)胞介素(IL-6)及腫瘤壞死因子-a(TNF-a)的影響，從而驗(yàn)證丹參注射液對(duì)非酒精性脂肪肝治療作用。方法：將40只大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、丹參小劑量組(400mg/kg)、丹參大劑量組(1 600mg/kg)，8周后采用免疫組化法(ELLSA)檢測(cè)各組大鼠血清中IL-6及TNF-a的水平。結(jié)果：模型組大鼠血清中IL-6、TNF-a水平明顯增高；與模型組比較，不同劑量丹參組血清中IL-6、TNF-a水平顯著降低。結(jié)論：丹參可能通過降低血清中IL-6、TNF-a水平，從而抑制肝細(xì)胞炎癥反應(yīng)，減輕肝組織損傷，達(dá)到治療NAFLD的效果。

非酒精性脂肪肝；丹參；IL-6;TNF-a

非酒精性脂肪肝病(NAFLD)是引起肝功能紊亂的主要誘因，是指以無過量飲酒史的肝細(xì)胞脂肪變性和脂肪貯積為病理特征的臨床病理綜合征，NAFLD可迅速進(jìn)展為纖維化和肝硬化，是隱源性肝硬化的重要因素之一。近年來，非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)逐漸取代了病毒性肝炎，成為歐美發(fā)達(dá)國家的最主要肝病。據(jù)預(yù)測(cè)，僅需10年左右的時(shí)間，NAFLD將有可能成為終末期肝病和肝移植的首要病因。因此，開展NAFLD相關(guān)研究具有重要意義[1]。丹參為活血化瘀類中藥，其主要成分丹參酮ⅡA(TanshinoneⅡA，TSA)具有抗腫瘤、抗菌、抗炎、抗氧化和抗凋亡等作用。本文采用高脂飲食誘導(dǎo)NAFLD大鼠模型，檢測(cè)血清中IL-6、TNF-a水平，初步探討丹參對(duì)NAFLD大鼠肝臟炎性因子的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：健康雄性SD大鼠40只，體重150～200g，購自寧夏醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心；丹參注射液購自四川升和藥業(yè)股份有限公司；IL-6、TNF-a試劑盒購自武漢博士德生物工程公司；高脂飼料購自寧夏醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。

1.2 方法

健康雄性SD大鼠40只，正常喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為4組，每組10只，即：正常組、模型組、低劑量丹參組(400mg/kg)、高劑量丹參組(1 600mg/kg)。正常組喂飼普通飼料，其余各組均給予高脂飼料，連續(xù)8周。造模開始第5周，干預(yù)組大鼠給予肌肉注射不同劑量的丹參注射液28天，正常組、模型組均給予肌肉注射等量生理鹽水，各組大鼠均于第8周結(jié)束處死。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)

所有觀察對(duì)象抽取靜脈血，分離血清，放置于-20℃低溫冰箱貯存?zhèn)溆?。檢測(cè)前將血清置室溫復(fù)融，轉(zhuǎn)離心，取上清液進(jìn)行檢測(cè)。采用光度酶聯(lián)免疫分析法(ELLSA)檢測(cè)各組大鼠的TNF-a和IL-6含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

經(jīng)檢測(cè)，模型組血清中IL-6和TNF-a含量明顯升高；經(jīng)丹參治療后，低、高劑量丹參注射液組血清中IL-6和TNF-a含量均低于模型組(P<0.05)。低、高劑量組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 不同組各指標(biāo)比較 (±s，ng/mL)

注：與模型組比較，*P<0.05。

3 討論

非酒精性脂肪肝(NAFLD)是近年來全球范圍內(nèi)患病率迅速增高的一種獲得性代謝應(yīng)激性肝損害，包括一系列由脂肪在肝臟堆積誘發(fā)引起的疾病：單純性脂肪肝，伴有肝細(xì)胞損傷和炎癥反應(yīng)的非酒精性脂肪性肝炎，最終可發(fā)展為肝纖維化、肝硬化、肝癌。該癥常合并有內(nèi)臟性肥胖、血脂紊亂、高血壓、糖調(diào)節(jié)異常和2型糖尿病等多元代謝性紊亂疾病。病理組織學(xué)表現(xiàn)為：肝細(xì)胞脂肪變性及肝實(shí)質(zhì)炎癥反應(yīng)。隨著現(xiàn)代生活方式、行為方式的改變，NAFLD發(fā)病率呈逐年升高趨勢(shì)，是隱源性肝硬化最主要原因。

近年來研究發(fā)現(xiàn)，多種炎性因子、脂肪細(xì)胞因子對(duì)NAFLD發(fā)病具有一定作用，如TNF-a、IL-6等。TNF-a作為一種肝毒性細(xì)胞因子，在NAFLD發(fā)生時(shí)表達(dá)增加，成為導(dǎo)致脂肪肝炎發(fā)生的首要因子[2]。TNF-a直接損傷肝細(xì)胞是通過TNF-a與肝細(xì)胞膜受體結(jié)合，活化Caspase-8，進(jìn)而活化Caspase-3，導(dǎo)致肝細(xì)胞凋亡；另外，TNF-a是脂蛋白酶強(qiáng)力抑制劑，高濃度TNF-a可減少外周組織脂肪分解，并促進(jìn)肝細(xì)胞甘油三酯的合成及聚集。TNF-a還可誘導(dǎo)激活肝臟Kupffer細(xì)胞，釋放大量IL-6、IL-8等炎性因子，可直接引起肝細(xì)胞脂肪變性、炎癥及肝細(xì)胞壞死[3]。TNF-a可活化其它細(xì)胞因子如IL-6、IL-8和一些黏附分子，形成炎癥瀑布反應(yīng)，誘發(fā)肝臟炎癥，導(dǎo)致胰島素抵抗(IR)進(jìn)而引起NAFLD[4]。

IL-6是由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等多種細(xì)胞產(chǎn)生，與肝臟局部炎癥反應(yīng)有關(guān)，參與炎性損傷過程。IL-6可直接刺激肝細(xì)胞、儲(chǔ)脂細(xì)胞及庫普弗細(xì)胞增生分泌膠原、層黏連蛋白和蛋白多糖，參與肝纖維化形成，促進(jìn)肝損害[5]。此外，IL-6與IR關(guān)系密切，可抑制肝臟胰島素信號(hào)，造成胰島素抵抗，高胰島素血癥可通過阻斷線粒體脂肪酸氧化，導(dǎo)致肝臟脂肪酸聚集，形成肝脂肪變性，IL-6可能與非酒精性脂肪肝炎的“第一次打擊”有關(guān)[6]。因此，炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)改變與NAFLD疾病進(jìn)程密切相關(guān)。

丹參為傳統(tǒng)臨床中藥，具有活血通絡(luò)、祛肝經(jīng)之瘀、增強(qiáng)肝臟血運(yùn)等作用，現(xiàn)代藥理顯示：丹參含有兒茶酸、丹參素、丹參酮等化學(xué)成分，文獻(xiàn)表明主要成分丹參酮ⅡA是一種新型有效的細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，是與DNA相互作用的抑制劑[7]。丹參可能通過抑制促炎因子的分泌，上調(diào)抑炎癥因子水平，從而顯著抑制小鼠血清IL-6、TNF-α表達(dá)的上調(diào)而發(fā)揮作用。

本研究證實(shí)：丹參組血清中IL-6、TNF-a水平含量與模型組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；高、低劑量組的IL-6、TNF-a含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。因此，IL-6、TNF-a與NAFILD發(fā)病關(guān)系密切，丹參可能通過降低血清中IL-6、TNF-a水平，調(diào)節(jié)體內(nèi)炎性因子變化，從而抑制肝細(xì)胞炎癥反應(yīng)，減輕肝組織損傷，達(dá)到治療NAFLD的目的。

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[3] 韓婷，井源，吳靜，等．酒精性脂肪肝的肝損傷機(jī)制研究近況[J]．實(shí)用肝臟病雜志，2007，10(4)：279-281．

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(責(zé)任編輯：李嵐春)

Injection of Non-Alcoholic Steatohepatitis Factor IL-6, TNF-a Salvia

Yan Lei, Zhang Hongyu ,Guo Yingjun

(Ningxia Autonomous Region People's Hospital of Infectious Diseases, Ningxia 750001,China)

Objective:Salvia serum of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) in rats injections of interleukin (IL-6 ) and tumor necrosis factor-a (TNF-a) , so as to verify Salvia Injection on non-alcoholic fatty liver treatment.Methods:The 40 rats were randomly divided into normal group, model group and low dose group salvia (400mg / kg), Salvia high dose group (1 600mg / kg), after 8 weeks using immunohistochemistry (ELLSA) detected group, serum levels of IL-6 and TNF-a in. Results:Model group, the serum IL-6, TNF-a levels were significantly higher ; compared with the model group, each group with different doses of Salvia serum IL-6, TNF-a levels were significantly reduced. Conclusion:Salvia possible by reducing the serum IL-6, TNF-a levels,inhibiting the inflammatory response in liver cells,reducing damage to liver tissue , the therapeutic effect of NAFLD.

Non-alcoholic Fatty Liver;Salvia;IL-6;TNF-a

2014-08-25

閆蕾(1983-)，女，寧夏自治區(qū)人民醫(yī)院主治醫(yī)師，研究方向?yàn)橹靖沃委煛?/p>

R285.5

A

1673-2197(2014)24-0010-02