摘要：目的 探討和分析免疫細(xì)胞化學(xué)鑒別胸腹水脫落細(xì)胞在腫瘤診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法 采用免疫細(xì)胞化學(xué)的方法，觀察50例患者的胸腹水脫落細(xì)胞中抗體上皮細(xì)胞膜抗原（EMA）、鈣結(jié)合素（PCNA）、細(xì)胞角蛋白（CK）、肢紋蛋白（VIM）、CAL、P53蛋白、癌胚抗原（CEA）的表達(dá)情況，以此判斷細(xì)胞類(lèi)型。結(jié)果 癌細(xì)胞EMA、CK（+），部分P53蛋白、CEA、PCNA（+），部分CAL、VIM（-）、惡性間皮瘤細(xì)胞、間皮細(xì)胞的VIM、CAL（+），部分PCNA、EMA、CK（+），CEA（-）。聯(lián)合胸腹水脫落細(xì)胞學(xué)和蛋白表達(dá)檢測(cè)，50例胸腹水脫落細(xì)胞檢出惡性腫瘤患者30例，良性腫瘤患者20例。結(jié)論 免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)有助于判斷胸腹水的性質(zhì)和腫瘤類(lèi)型，與抗體聯(lián)合應(yīng)用能進(jìn)一步提高檢出準(zhǔn)確率。

關(guān)鍵詞：免疫細(xì)胞化學(xué)；胸腹水；腫瘤；價(jià)值

胸腹水是臨床常見(jiàn)的疾病之一，由于其病因的復(fù)雜性，判斷其良、惡性對(duì)疾病的診治顯得尤為重要［1］。近幾年來(lái)，由于免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展和完善以及抗原純化和抗體制備技術(shù)的改良，免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)（ICC）已經(jīng)成為輔助細(xì)胞病理學(xué)鑒別診斷胸腹水良、惡病變的主要手段之一［2］。本文利用ICC聯(lián)合胸腹水脫落細(xì)胞學(xué)檢測(cè)技術(shù)，鑒別了50例患者胸腹水的性質(zhì)及腫瘤類(lèi)型，有效地提高了胸腹水病理診斷的準(zhǔn)確率?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1一般資料 選取2010年10月~2013年10月50例胸腹水患者，其中男性30例，女性20例。胸水28例，腹水22例。年齡22～80歲，平均年齡(53±2.3)歲。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞學(xué)涂片的制備將通過(guò)胸腹腔穿刺獲取的新鮮胸腹水100mL送檢，經(jīng)過(guò)沉淀后，丟棄上清，將剩余物(約40mL)以2000rpm/min的轉(zhuǎn)速離心10min.用吸管將沉淀析出，涂片兩張HE常規(guī)染色觀察，用經(jīng)防脫膠處理的玻片涂片6張，冷丙酮固定，用作免疫細(xì)胞化學(xué)染色［3］。

1.2.2免疫細(xì)胞化學(xué)方法：鼠抗人單克隆抗體抗體為EMA、PCNA、CK、VIM、CAL、P53蛋白、CEA。滴加一滴3%的H2O2室溫溫孵15min以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性。用5%正常羊血清封閉，接著先加入一抗37℃恒溫箱孵育，1h后用PBS洗5遍，再加入HRP孵育30min，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，中性樹(shù)膠封固，每組涂片均設(shè)陽(yáng)性對(duì)照片［4］。

1.2.3顯微鏡觀察觀察抗體EMA、CEA、CK、VIM、CAL、P53蛋白、PCNA在細(xì)胞中的表達(dá)情況，以判斷細(xì)胞的類(lèi)型，同時(shí)與常規(guī)細(xì)胞學(xué)進(jìn)行比較。

1.2.4陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)［5］參考組織學(xué)原則，如果EMA、CEA、CK、VIM、CAL的胞膜或胞膜、胞質(zhì)呈現(xiàn)棕黃色即為陽(yáng)性，并且依據(jù)棕黃色的強(qiáng)度分強(qiáng)陽(yáng)性、弱陽(yáng)性，若胞膜或胞質(zhì)未出現(xiàn)棕黃色則為陰性；P53蛋白、PCNA的胞核呈棕黃色即為陽(yáng)性，未出現(xiàn)棕黃色則為陰性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料用例數(shù)進(jìn)行表示，使用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

50例患者經(jīng)過(guò)HE法診斷，結(jié)果顯示：腺癌細(xì)胞20例，鱗癌細(xì)胞15例，增生間皮細(xì)胞10例，惡性腫瘤細(xì)胞5例，ICC法診斷結(jié)果顯示：腺癌細(xì)胞19例，鱗癌細(xì)胞16例，增生間皮細(xì)胞9例，惡性腫瘤細(xì)胞6例。50例胸腹水患者采取不同檢查方法的診斷結(jié)果比較見(jiàn)表1。50例胸腹水免疫細(xì)胞化學(xué)染色標(biāo)記結(jié)果見(jiàn)表2。

3討論

臨床上主要是通過(guò)常規(guī)脫落細(xì)胞病理學(xué)檢查和生化指標(biāo)來(lái)診斷胸腹水的性質(zhì)，這兩種方法的缺陷是惡性檢出率低。而胸腹水細(xì)胞學(xué)HE檢測(cè)最大的缺陷為較難鑒別出腺癌細(xì)胞與增生或部分變性間皮細(xì)胞，同時(shí)難以對(duì)某些惡性腫瘤細(xì)胞進(jìn)行分型［6］。而免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)使細(xì)胞學(xué)診斷從單純的形態(tài)學(xué)觀察提高到了特異性抗原水平， 大大提高了胸腹水惡性腫瘤的診斷水平［7］。

本研究通過(guò)對(duì)50例胸腹水患者采用免疫細(xì)胞化學(xué)聯(lián)合檢測(cè)，確定了患者的腫瘤類(lèi)型及良惡性，準(zhǔn)確率較高。因此，將細(xì)胞形態(tài)學(xué)診斷與免疫細(xì)胞化學(xué)聯(lián)合應(yīng)用，可以很好的鑒別惡性腫瘤細(xì)胞的類(lèi)型，同時(shí)能夠解決良惡性的診斷鑒別問(wèn)題，在臨床上值得推廣應(yīng)用。

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編輯/許言