摘要：目的 探討Survivin在OSCC中的表達及其意義。方法 采用免疫組織化學(xué)方法檢測40例OSCC組織 、15例癌旁組織及15例口腔正常組織的表達情況。結(jié)果 Survivin 蛋白在正?？谇火つぁ┡越M織及OSCC 中的表達率分別為6.66% 、20.00% 、82.50%，三組相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），OSCC中Survivin 表達與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（P＜0.05），與細胞分化程度無關(guān)（P＞0.05）。結(jié)論Survivin在OSCC的發(fā)生發(fā)展過程中可能起著重要作用。

關(guān)鍵詞：口腔鱗狀細胞癌；Survivin蛋白；免疫組化

中圖分類號:R739.85文獻標識碼:A

口腔鱗狀細胞癌 (Oral squamous cell carcinoma)發(fā)病率占口腔癌瘤的80％[1]，因頭頸部血供豐富，口腔頜面部腫瘤生長迅速，易發(fā)生轉(zhuǎn)移，其5年生存率為45％～50％。本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測Survivin的表達情況，以進一步揭示Survivin在口腔鱗狀細胞癌發(fā)生、發(fā)展的機制。

1資料與方法

1.1一般資料標本選自瀘州醫(yī)學(xué)院附屬口腔醫(yī)院2008～2012年未經(jīng)任何治療的OSCC患者40例，其中男性22例，女性18例，年齡42~71歲，平均年齡53歲。發(fā)生部位：唇頰部9例，舌緣、舌腹及舌根部13例，口底13例，牙齦4例，咽旁1例。40例OSCC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移26例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移14例，病理分級：高分化19例，中、低分化21例。以唇裂修補術(shù)中切除的多余唇組織共15例作為正常對照組織。腫瘤臨床邊界周圍1cm，肉眼觀察大體正常的組織作為癌旁組織，共15例。

1.2主要實驗試劑及主要實驗儀器 Survivin 鼠抗人多克隆抗體(福州邁新生物科技有限公司)；即用型SP試劑盒(福州邁新生物科技有限公司)；光學(xué)顯微鏡(OLMPUS，JAPAN)；Image-Pro Plus6.0 (MEDIA CYBERNETICS專業(yè)圖像分析系統(tǒng)開發(fā)公司)。

1.3 免疫組化染色標本經(jīng)10％中性甲醛溶液固定后常規(guī)石蠟包埋，4um厚連續(xù)切片。SP三步法檢測，微波抗原熱修復(fù)，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，飽和碳酸鋰返藍，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。

1.4 結(jié)果判定Survivin表達的判斷以胞核（部分胞漿棕黃染色）中染成棕黃色為陽性 根據(jù)陽性細胞百分率判斷：沒有或僅有弱的染色或陽性細胞率10%的標本記為（-）；陽性細胞 10%～25%記為（+）；陽性細胞 25%～50%記為（+ +）；陽性細胞＞50%記為（+ + + ）；+、 + +、+ + +均視為陽性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理PSS13.0軟件進行分析，采用x2檢驗，P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 Survivin在各組織中的表達Survivin陽性顆粒呈棕黃色， 主要定位于腫瘤細胞的胞漿， 胞核亦可見到。15例正?？谇唤M織標本中，Survivin 陽性表達率為 6.66%； 15 例癌旁組織標本中，Survivin陽性表達率為20.00%；40例OSCC組織標本中，Survivin陽性表達率為82.50%。 本研究顯示： OSCC 組織中Survivin表達陽性率明顯高于癌旁組織和正常組織（P＜0.05）。癌旁組織與正常組織間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2Survivin陽性表達與OSCC臨床病理參數(shù)的關(guān)系26例伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移OSCC組織標本中，25例標本Survivin陽性表達，陽性率為96.15% （25/26），14例不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移OSCC 組織標本中，8例標本Survivin陽性表達，陽性率為57.14% （8/14），有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組Survivin 在OSCC的表達高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P< 0.05) 。16例高分化OSCC 組織標本中，12例標本Survivin陽性表達， 陽性率為75.00%（12/16）。24例中、 低分化OSCC組織標本中，16例Survivin陽性表達， 其陽性率為87.50%（21/24），Survivin 在OSCC的表達與腫瘤的病理學(xué)分級無明顯關(guān)系(P> 0.05) 。

3 討論

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是一個多階段、多步驟的漸進演化過程。由于細胞增殖與凋亡的正常平衡失控，細胞死亡減少，增殖增加，當(dāng)增殖速度超過死亡時，則形成了腫瘤。 Survivin是凋亡抑制蛋白家族中新近被發(fā)現(xiàn)的成員，是迄今發(fā)現(xiàn)最強的凋亡抑制因子。Survivin蛋白主要通過以下兩種途徑抑制凋亡: ①Survivin可通過細胞周期依賴激酶調(diào)節(jié)凋亡， 通過促進CDK4釋放p21而抑制凋亡; ②Survivin可與激活的Caspase-3和Caspase-7結(jié)合，阻止由Caspase激活劑或凋亡誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)的細胞DEVD-cleaving自殺酶的累積[2]。

Survivin 表達于胚胎、胎兒組織，但不表達或極低表達于終末分化的成人組織中（除胸腺 生殖腺外），而在絕大多數(shù)惡性腫瘤組織中均有表達，如胃癌、肺癌、肝癌、乳腺癌、神經(jīng)母細胞瘤、食管癌、直腸癌、子宮癌、卵巢癌、胰腺癌、黑色素瘤、軟組織肉瘤、白血病中等[3]。本實驗中口腔正常組織也存有 Survivin極低表達情況。并且Survivin在口腔頜面部腫瘤也有異常表達。例如腺樣囊性癌、口腔黏膜下纖維性變及涎腺腫瘤等。

OSCC的發(fā)生發(fā)展是一個復(fù)雜的過程，必然涉及到變異的積累和細胞正常周期的紊亂。Survivin的異常表達與OSCC的發(fā)生發(fā)展、淋巴轉(zhuǎn)移、惡性演變、預(yù)后等密切相關(guān)。Tanaka等[4]采用免疫組化方法檢測口腔正常黏膜、白斑(OLK)和OSCC中Survivin的表達發(fā)現(xiàn)：正常黏膜中未見Survivin表達；在異常增生的白斑(OLK) 組中，隨異常增生程度的增加，Survivin的表達逐漸增強；OSCC中Survivin表達隨細胞分化程度降低而表達增強。本研究中，Survivin 蛋白在正?？谇火つぁ┡越M織及OSCC中的表達率分別為6.66% 、20.00% 、82.50%，可以推測出，Survivin表達后可能抑制正常細胞的凋亡，導(dǎo)致腫瘤細胞的出現(xiàn)，Survivin的表達失調(diào)可能是口腔鱗癌發(fā)生的機制之一，對Survivin表達的監(jiān)測可能有助于OSCC的早期診斷。

本研究中Survivin在OSCC中表達率高，而在癌旁組織和正常組織中表達率低的特點。提示Survivin可能發(fā)生在OSCC的早期，Survivin在OSCC組織中的表達可能抑制了腫瘤細胞的凋亡，從而擾亂了腫瘤細胞的凋亡途徑。Survivin基因可能成為腫瘤基因治療的一個較為理想的靶點?？梢酝ㄟ^抑制Survivin基因的表達，從而抑制腫瘤細胞的生長。劉世鋒等[5]采用小干擾RNA技術(shù)，通過干擾Survivin基因的表達來治療口腔鱗狀細胞癌，MTT法測定細胞活性發(fā)現(xiàn)，干擾Survivin基因可以降低口腔鱗狀細胞癌的細胞活性；tunnel和流式細胞術(shù)測定結(jié)果可見，干擾Survivin基因可以誘導(dǎo)癌細胞凋亡。

本研究表明：有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P <0.05) ，表明Survivin表達與OSCC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)， 提示Survivin可促進腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。 Survivin在OSCC組織、 癌旁組織、 正常口腔黏膜組織中表達逐漸降低，OSCC組織中Survivin表達陽性率明顯高于癌旁組織和正常組織（P＜0.05）。干擾Survivin可能是治療OSCC極有潛力的腫瘤標志和治療靶點。

參考文獻:

[1]張志愿，邱蔚六，孫堅，等.口腔頜面外科學(xué)[M].7版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2012：324.

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[3]Pennati M， Folini M， Zaffaroni N. Targeting survivin in cancer therapy：Fulfilled promises and open questions[J].Carcinogenesis， 2007， 28（6）:1133-1139.

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[5]劉世鋒，梁新華，包崇云.采用RNA干擾技術(shù)沉默Survivin基因?qū)谇击[狀細胞癌細胞凋亡的影響[J].華西口腔醫(yī)學(xué)雜志，2013，31( 4 ):345-352.