摘要：目的探討端粒酶催化亞基在膀胱內(nèi)翻性乳頭狀瘤組織中的表達(dá)及意義。方法用RT-PCR 法分別對38例膀胱內(nèi)翻性乳頭狀瘤組織、53例膀胱低級別移行細(xì)胞癌組織、32例正常膀胱粘膜組織進(jìn)行hTERT檢測。結(jié)果膀胱內(nèi)翻性乳頭狀瘤組織hTERT表達(dá)陽性23例（60.5%），膀胱低級別移行細(xì)胞癌組織100%陽性表達(dá)；32例正常膀胱粘膜組織均無陽性表達(dá)。三者比較在統(tǒng)計學(xué)上具有顯著性差異（P＜0.01）。結(jié)論hTERT 在膀胱內(nèi)翻性乳頭狀瘤中的高陽性表達(dá)可能與其向膀胱癌的惡性轉(zhuǎn)化有關(guān)。

關(guān)鍵詞：膀胱癌;膀胱內(nèi)翻性乳頭狀瘤;端粒酶催化亞基

Study the Expression of Human Telomerase Reverse Transcriptase(hTERT) in the Inverted Papilloma of Bladder

LU Dong-liang1，CUI Shu1 ，JIANG Guo1 ，CHEN Zai-xian2

(1.Department of Urology，The Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College ，Nanchong 637000，Sichuan，China;2.Department of Urology，The First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University，Chongqing 400016，China)

Abstract：ObjectiveTo evaluate the significance of detection of human telomerase reverse transcriptase （hTERT）expression in the inverted papilloma of bladder.MethodsUsing reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) assay，hTERT in 38 inverted papilloma of bladder tissue ，53 TCC tissue and 32 normal bladder tissues were examined.ResultshTERT was detected in 53 of 53 (100%)TCC tissues，23 in 38 （60.5%）the inverted papilloma of bladder and none of 32 normal bladder tissues(0)，the positive rate of hTERT in TCC and in the inverted papilloma of bladder being significantly higher than than in noumal bladder tissues(P＜0.01）.ConclusionThe high expression ofhTERT in the inverted papilloma of bladder maybe have the relelationship toits m alignant transformation.

Key words：Bladder cancer; Inverted papilloma of bladder; Telomerase catalytic subunit膀胱內(nèi)翻性乳頭瘤(inverted papilloma of thebladder，IPB)是一種以內(nèi)翻性生長為特征的尿路上皮良性腫瘤，隨著檢測方法的改進(jìn)和對本病認(rèn)識程度的提高，發(fā)病率逐年上升。由于其存在一定的復(fù)發(fā)率及惡變率，因此目前臨床上對于膀胱內(nèi)翻性乳頭狀瘤術(shù)后是否定期行膀胱灌注化療以及是否需要長期隨訪膀胱鏡產(chǎn)生了不同的意見，本研究對38例膀胱內(nèi)翻性乳頭狀瘤、53例膀胱低級別移行細(xì)胞癌組織、32例正常膀胱組織進(jìn)行端粒酶催化亞基檢測及分析，以期探討膀胱內(nèi)翻性乳頭狀瘤與低級別膀胱移行細(xì)胞癌的關(guān)系，為臨床提供診治依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料經(jīng)臨床和病理證實為膀胱內(nèi)翻性乳頭狀瘤者例38 ，男32例，女6例，年齡31~72歲；膀胱低級別移行細(xì)胞癌者53例，男36例，女17例，年齡 29~82歲。正常膀胱粘膜組織32例作為對照組，男16例，女16例，年齡30~83歲。手術(shù)時或膀胱鏡檢查時獲取的標(biāo)本均立即置入液氮罐保存。

1.2試劑及儀器TRIzol 總RNA提取液為美國INVITROGEN公司產(chǎn)品；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒及DNA聚合酶為立陶宛MBI公司產(chǎn)品；凝膠電泳成像系統(tǒng)為美國Bio-Rad GelDoc凝膠電泳成像分析系統(tǒng)；聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）儀為美國ABI公司產(chǎn)品。引物設(shè)計參照文獻(xiàn)，引物由北京三博遠(yuǎn)志合成，hTERT mRNA 上游引物5'-CGC AAG AGT GTC TGG AGC AA- 3'；下游引物5' -GGA TGA AGC GGA GTC TGG A-3'，擴增片段為145bp。均采用β-肌動蛋白作為內(nèi)參，內(nèi)參引物序列上游5'-AAC TCC ATC ATG AAG TGT GA-3';下游5'-ACT CCT GCT TGC TGA TCC AC -3'，擴增片段為247bp。

1.3 方法①TRIzol總RNA提取按照試劑說明書操作。②逆轉(zhuǎn)錄反映按試劑說明書操作。③PCR反應(yīng)，25μL反應(yīng)總體積，取cDNA 2μL，加10×PCR 緩沖液2.5μL，25mol/L的MgCL2 1.5μL，10mmol/L dNTP 0.5 μL，5U/μL DNA 聚合酶0.2 μL，hTRT mRNA 及β-actin mRNA 上、下游引物各0.5μL，滅菌水16.3μL。反應(yīng)條件為95℃ 5min 預(yù)變性；95℃ 45 s，55℃ 45s ，72℃ 1 min ，40個循環(huán)；72℃延伸 2 min。④PCR 產(chǎn)物鑒定，取PCR產(chǎn)物5μL進(jìn)行瓊脂糖電泳，紫外透視儀上觀察結(jié)果，并在凝膠成像儀上照相和測定分析。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理并進(jìn)行χ2檢驗。

2結(jié)果

38例膀胱內(nèi)翻性乳頭狀瘤標(biāo)本中hTERT陽性表達(dá)23 例，陽性率為60.5 %； 53例膀胱低級別移行細(xì)胞癌組織100%陽性表達(dá)；32 例正常膀胱粘膜組織均無陽性表達(dá)。結(jié)果見表1，三組差異有極顯著性意義P＜0.01。

3討論

端粒酶活性與人類細(xì)胞的永生化和癌變密切相關(guān)，是最普遍而又最重要的腫瘤特異性的生物學(xué)標(biāo)志之一。端粒酶催化亞基hTERT與端粒酶活性調(diào)節(jié)的關(guān)系最密切，是端粒酶活化過程中的限制性因素，并與端粒酶活性呈現(xiàn)一致性，即在正常體細(xì)胞不表達(dá)或很少表達(dá)，而在惡性腫瘤細(xì)胞中呈高度陽性表達(dá)。因其在腫瘤中表達(dá)的特異性，有研究表明其可作為腫瘤檢測的標(biāo)志物，在某些腫瘤組織中hTERT 還可以作為生物標(biāo)記用于鑒定組織惡化的程度，判定其療效和預(yù)后[1]。

膀胱內(nèi)翻性乳頭瘤的生物學(xué)特征，因其局限性生長，最多侵犯粘膜固有層，不侵犯肌層，鏡下表現(xiàn)細(xì)胞大小一致，異型性不大，核分裂象少見，這些都支持內(nèi)翻性乳頭瘤的良性特征，故膀胱內(nèi)翻性乳頭瘤被普遍認(rèn)為是良性腫瘤，復(fù)發(fā)及惡變率低。Kyirakos等[2]報道3％ ～7％ 可轉(zhuǎn)化為膀胱移行細(xì)胞癌，約10％可同時伴有膀胱移行細(xì)胞癌，并發(fā)現(xiàn) 發(fā)現(xiàn)有些內(nèi)翻性乳頭狀瘤病灶中，有約10％ 的表淺病灶由低惡性度移行細(xì)胞癌細(xì)胞構(gòu)成，提示內(nèi)翻性乳頭狀瘤與膀胱癌有著某種程度的關(guān)聯(lián)。Urakami等[3]對膀胱內(nèi)翻性乳頭瘤生物學(xué)特性進(jìn)行了研究并與淺表性和浸潤性膀胱移行細(xì)胞癌進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)膀胱內(nèi)翻性乳頭瘤增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)及抑癌基因p53的免疫反應(yīng)顯著低于浸潤性膀胱移行細(xì)胞癌，但與淺表膀胱移行細(xì)胞癌無明顯差別，表明內(nèi)翻性乳頭瘤有較高的細(xì)胞增殖活性。Monge等[4]認(rèn)為應(yīng)將膀胱內(nèi)翻性乳頭狀瘤定為癌前病變，有少數(shù)學(xué)者認(rèn)為應(yīng)將內(nèi)翻性乳頭瘤當(dāng)作早期低級別膀胱移行細(xì)胞癌對待。因此，目前臨床上對于膀胱內(nèi)翻性乳頭狀瘤術(shù)后是否定期行膀胱灌注化療以及是否需要長期隨訪膀胱鏡產(chǎn)生了不同的意見，Sung等[5]認(rèn)為本病雖有一定的復(fù)發(fā)率，但膀胱內(nèi)翻乳頭狀瘤畢竟是一種良性病變，根據(jù)嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)確診后，并沒有必要像膀胱癌那樣嚴(yán)格的術(shù)后化療及繁瑣的術(shù)后膀胱鏡隨訪。Ho等[6]也提出單純膀胱內(nèi)翻乳頭狀瘤不伴有移行細(xì)胞癌時，無需嚴(yán)格的長期復(fù)查膀胱鏡。Tiwari等[7]通過對24例病理確診為膀胱內(nèi)翻性乳頭狀瘤患者的跟蹤隨訪發(fā)現(xiàn)，在2年半的隨訪時間里，未見任何腫瘤復(fù)發(fā)，因此他們認(rèn)為經(jīng)尿道腫瘤切除可以達(dá)到滿意的效果，沒有必要按照膀胱移行細(xì)胞癌進(jìn)行嚴(yán)格的術(shù)后灌注及隨訪。Riesz 等[8]通過對30例膀胱內(nèi)翻性乳頭狀瘤患者隨訪發(fā)現(xiàn)，有3例患者分別在術(shù)后17、60、90個月惡化為膀胱移行上皮癌。其惡化率為10%，他們認(rèn)為不能將膀胱內(nèi)翻性乳頭狀瘤看做為良性腫瘤，而應(yīng)看作為早期低級別移行細(xì)胞癌。因此，膀胱內(nèi)翻性乳頭瘤的生物學(xué)惡性潛能成為非常重要的臨床問題。

本研究通過采用RT-PCR法檢測膀胱內(nèi)翻性乳頭狀瘤、膀胱低級別移行細(xì)胞癌以及正常膀胱粘膜中的hTERT的表達(dá)，探討膀胱內(nèi)翻性乳頭狀瘤與低級別膀胱移行細(xì)胞癌的關(guān)系。結(jié)果顯示，38例膀胱內(nèi)翻性乳頭狀瘤組織中hTERT陽性表達(dá)23 例，陽性表達(dá)率為60.5 %，53例膀胱低級別移行細(xì)胞癌組織hTERT陽性表達(dá)率為100%，正常膀胱粘膜組織32例均無陽性表達(dá)。三者之間具有顯著性差異（P＜0.01)，因此我們推測hTERT在膀胱內(nèi)翻性乳頭狀瘤中的高陽性表達(dá)可能與其向膀胱移行細(xì)胞癌的惡性轉(zhuǎn)化有關(guān)，我們認(rèn)為， 膀胱內(nèi)翻性乳頭狀瘤雖然為良性腫瘤，但由于其存在惡變傾向，我們建議術(shù)后應(yīng)進(jìn)行規(guī)律膀胱灌注化療藥物及嚴(yán)格膀胱鏡隨訪。

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