摘要：目的 探討中藥加味宮外孕Ⅱ號(hào)方對(duì)早孕大鼠滋養(yǎng)細(xì)胞的影響，進(jìn)一步探索中藥的殺胚作用和作用機(jī)理。方法 將55只造模成功的早孕大鼠隨機(jī)分為6組：西藥組、中西藥結(jié)合組和中藥低、中、高劑量組、空白組，分別予以連續(xù)給藥7d（西藥組肌注甲氨蝶呤，中西藥結(jié)合組肌注甲氨蝶呤和加味宮外孕Ⅱ號(hào)方中劑量中藥灌胃，中藥低、中、高劑量組分別予加味宮外孕Ⅱ號(hào)方低、中、高劑量灌胃，空白組予生理鹽水灌胃），第8d處死大鼠，取出子宮及孕囊行光鏡及電鏡檢測(cè)。結(jié)果 用藥后各組與空白組比較，滋養(yǎng)細(xì)胞組織形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)均有不同程度的病理學(xué)改變，中藥低、中劑量組及西藥組滋養(yǎng)細(xì)胞排列紊亂，有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，胚囊正常形態(tài)被破壞，線粒體腫脹；高劑量組及結(jié)合組滋養(yǎng)細(xì)胞及胚囊正常形態(tài)完全消失，無(wú)或少量壞死組織殘留，線粒體出現(xiàn)空泡化。結(jié)論 加味宮外孕Ⅱ號(hào)方可能通過(guò)改變滋養(yǎng)細(xì)胞的組織形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)，影響滋養(yǎng)細(xì)胞的數(shù)量、形態(tài)、分泌、合成等生理代謝功能，從而起到殺胚作用，其中變化表現(xiàn)最明顯的是中藥高劑量組，說(shuō)明隨著中藥濃度的增大，滋養(yǎng)細(xì)胞破壞更明顯。

關(guān)鍵詞：加味宮外孕Ⅱ號(hào)方；早孕大鼠；滋養(yǎng)細(xì)胞

目前在臨床上異位妊娠的保守治療主要以中西醫(yī)結(jié)合治療為主，西藥殺胚的機(jī)理明確，而關(guān)于活血消癥殺胚中藥的機(jī)理研究則很少見(jiàn)，其機(jī)理尚不明確。目前未找到有關(guān)異位妊娠動(dòng)物模型的建立方法，由于異位妊娠早期與早期宮內(nèi)妊娠相似，因此，我們以早孕大鼠作實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，通過(guò)觀察加味宮外孕Ⅱ號(hào)方對(duì)早孕大鼠滋養(yǎng)細(xì)胞組織形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)的影響的實(shí)驗(yàn)研究，進(jìn)一步探索中藥的殺胚作用和作用機(jī)理，間接為中醫(yī)藥保守治療異位妊娠提供新的理論依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料 SD 大鼠共110只，雄性30只，體重（280±10）g，雌性80只，體重（250±10）g，由重慶第三軍醫(yī)大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（渝）2012-0005。

1.2儀器 OLMPUS光學(xué)顯微鏡，日立H-600型透射電鏡，包埋機(jī)，石蠟切片機(jī)，脫水機(jī)，攤片機(jī)，烤片機(jī)（美國(guó)LEICA）。

1.3藥物 加味宮外孕Ⅱ號(hào)方：丹參15 g，桃仁9 g，赤芍15 g，莪術(shù)9 g，三棱9 g，全蝎10 g，地鱉蟲(chóng)10 g，蜈蚣9 g，紫草25 g，由貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院中藥制劑室通過(guò)水煎、過(guò)濾、濃縮制成每毫升含生藥6 g、3 g、1.5 g三種不同劑量（即：高劑量、中劑量、低劑量）的藥液；分裝密封，于4度冰箱保存?zhèn)溆?；甲氨喋? mg/支 （山西普德藥業(yè)有限公司生產(chǎn)）。

1.4方法

1.4.1動(dòng)物造模 造模方法參照徐叔云《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》[1]：將動(dòng)情期雌鼠共69只與雄鼠按1∶1比例合籠過(guò)夜，次晨將發(fā)現(xiàn)陰栓或行陰道涂片發(fā)現(xiàn)精子者定為妊娠的第 1 d。為避免假孕大鼠對(duì)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響，參照文獻(xiàn)[2]后本實(shí)驗(yàn)在第5 d起連續(xù)對(duì)交配成功的大鼠行陰道脫落細(xì)胞檢查，共檢查3 d，剔除交配成功而未受孕的大鼠14只。

1.4.2分組及給藥 將造模成功的55只孕鼠隨機(jī)分為6組：西藥組、中西藥結(jié)合組和中藥低、中、高劑量組、空白組。西藥組在妊娠第1 d一次性肌注甲氨蝶呤7.775 mg/Kg體重，一次為一療程，同時(shí)予生理鹽水7.77 mL/Kg體重灌胃1次/d；中西藥結(jié)合組于妊娠第1 d起予加味宮外孕Ⅱ號(hào)方煎劑按7.77 mL/Kg體重（每毫升含生藥3 g）灌胃1次/d，同時(shí)在妊娠第1 d一次性肌注甲氨蝶呤7.775 mL/Kg體重；中藥高、中、低劑量組分別在妊娠第1 d予相應(yīng)劑量的加味宮外孕Ⅱ號(hào)方煎劑按7.77 mL/Kg體重灌胃，1次/d，空白組予等量生理鹽水灌胃；各組均連續(xù)灌胃7 d。

1.4.3標(biāo)本制備及檢測(cè) 用藥后第7日晚8點(diǎn)起禁食水，于12 h后處死大鼠，剖腹取出大鼠子宮及孕囊，平均分成兩份，一份浸入4%多聚甲醛液中固定24 h，再進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋、切片、HE染色，行光鏡下觀察。另一份切取1 mm2大小組織塊用2.5% 的戊二醛液固定，置于4℃冰箱內(nèi)固定24 h，再按照電鏡常規(guī)標(biāo)本制作，于透射電鏡下觀察滋養(yǎng)細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)。

2結(jié)果

2.1光鏡檢測(cè) 空白組滋養(yǎng)細(xì)胞發(fā)育良好，細(xì)胞間隙緊密、排列整齊、體積大、扁平，胚囊完整；西藥組滋養(yǎng)細(xì)胞間隙不清、排列紊亂，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，胚囊正常形態(tài)破壞；中西藥結(jié)合組滋養(yǎng)細(xì)胞及胚囊正常形態(tài)完全消失，無(wú)或少量壞死組織殘留；中藥中劑量組滋養(yǎng)細(xì)胞間隙增大、排列紊亂，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，胚囊正常形態(tài)被破壞；低劑量組滋養(yǎng)細(xì)胞間隙增大、排列紊亂、少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，胚囊正常形態(tài)破壞；高劑量組滋養(yǎng)細(xì)胞及胚囊正常形態(tài)完全消失，大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，無(wú)或少量壞死組織殘留，見(jiàn)圖1。

2.2電鏡檢測(cè) 空白組可見(jiàn)到清晰的核膜及核仁，均勻的染色質(zhì)（常染色質(zhì)）散布于核質(zhì)內(nèi)；西藥組細(xì)胞核呈橢圓形，異染色質(zhì)邊集，線粒體腫脹；結(jié)合組細(xì)胞與細(xì)胞的間隙明顯增寬，細(xì)胞核的核漿致密，內(nèi)含邊集，呈團(tuán)塊狀的異染色質(zhì)，線粒體出現(xiàn)空泡化；中藥中劑量組細(xì)胞核形狀不規(guī)則，異染色質(zhì)增多，線粒體腫脹；低劑量組線粒體腫脹；高劑量組整個(gè)細(xì)胞腫脹，線粒體腫脹，脊斷裂或消失，見(jiàn)圖2。

3討論

異位妊娠（ectopic pregnancy ，EP）是婦產(chǎn)科的常見(jiàn)病，嚴(yán)重威脅育齡婦女生命安全并影響生殖功能，目前在臨床上異位妊娠的保守治療主要以中西醫(yī)結(jié)合治療為主。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為血瘀和氣虛導(dǎo)致胎元阻絡(luò)是本病的病因病機(jī)，主要證候是少腹血瘀之實(shí)證，以活血化瘀，消癥殺胚為治法，運(yùn)用活血化瘀消癥中藥。本實(shí)驗(yàn)所用加味宮外孕Ⅱ號(hào)方是在宮外孕Ⅱ號(hào)方的基礎(chǔ)上加蜈蚣、全蝎、土鱉蟲(chóng)、紫草。方中丹參、赤芍、桃仁、三棱、莪術(shù)有活血化瘀、消徵散結(jié)的作用；蜈蚣、全蝎、土鱉蟲(chóng)、紫草有破血、殺胚的作用。全方以活血化瘀，殺胚消徵為治法，改善胎元阻絡(luò)，氣血運(yùn)行不暢現(xiàn)狀，達(dá)到殺胚消徵，通暢氣血經(jīng)絡(luò)之功效。

滋養(yǎng)細(xì)胞（trophoblast cel1）是胎盤組織的主要功能細(xì)胞，在正常妊娠過(guò)程中具有類似腫瘤的浸潤(rùn)能力，有利于母胎間的營(yíng)養(yǎng)供給[3]。本實(shí)驗(yàn)專注于對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞的組織形態(tài)學(xué)及超微結(jié)構(gòu)研究，以此佐證加味宮外孕Ⅱ號(hào)方的殺胚作用。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，應(yīng)用西藥及殺胚中藥后滋養(yǎng)細(xì)胞的組織形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)較空白組均產(chǎn)生不同程度的影響，中藥低、中劑量組及西藥組滋養(yǎng)細(xì)胞排列紊亂，有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，胚囊正常形態(tài)被破壞，線粒體腫脹；高劑量組及結(jié)合組滋養(yǎng)細(xì)胞及胚囊正常形態(tài)完全消失，無(wú)或少量壞死組織殘留，線粒體出現(xiàn)空泡化，不同劑量的加味宮外孕Ⅱ號(hào)方均能改變滋養(yǎng)細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)，特別體現(xiàn)在線粒體上，因線粒體是能量代謝的場(chǎng)地，由此筆者推測(cè)加味宮外孕Ⅱ號(hào)方可能通過(guò)細(xì)胞內(nèi)線粒體的結(jié)構(gòu)破壞而使線粒體合成的ATP量變少，導(dǎo)致細(xì)胞功能障礙，并促使炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，影響滋養(yǎng)細(xì)胞的正常生理代謝過(guò)程，促進(jìn)細(xì)胞凋亡或壞死，不能為胚胎提供營(yíng)養(yǎng)支持，從而起到殺胚作用。且隨著中藥濃度的增大，滋養(yǎng)細(xì)胞破壞更明顯，殺胚作用更強(qiáng)。但高劑量的中藥是否會(huì)加重藥物的副作用有待今后進(jìn)一步深入研究，從而指導(dǎo)臨床用藥。

參考文獻(xiàn)：

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[2]趙春梅，鄭文蘭.陰道脫落細(xì)胞檢查對(duì)確定大鼠妊娠價(jià)值的探討[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2013，32（2）：31-32.

[3]Harris LK，Review：trophoblast-cascular cell interactions in early pregnancy：how to remodel a vesse[J].Placenta，2010，31：93-98.

編輯/肖慧