摘要:目的 探討自制外部弱陽性質(zhì)控血清在檢測血清單純皰疹病毒Ⅱ型(HSVⅡ)試劑盒中應用的可行性,并與康潤公司質(zhì)控血清進行結(jié)果比對。方法 試驗采用對比檢測研究,使用美國Trinity Biotech Plc公司提供抗HSVⅡIgG型和IgM型試劑盒分別檢測自制和康潤公司質(zhì)控血清 ,采用SPSS16.0進行數(shù)據(jù)處理。不同月份和不同批號試劑盒間質(zhì)控血清精密度和穩(wěn)定性的比較采用均數(shù)的t檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。結(jié)果 自制血清抗HSVⅡIgM S/CO 平均值為(2.56±0.611),CV值11.95%;康潤公司質(zhì)控血清抗HSVⅡIgM型S/CO值(2.38±0.48),CV值為10.08%,兩種質(zhì)控血清CV值比較無統(tǒng)計學差異P>0.05。自制血清抗HSVⅡIgG型的S/CO值(3.57±0.98),CV值13.78%;康潤公司抗HSVⅡIgG型質(zhì)控血清S/CO值為(3.275±0.822),CV值為12.55%,兩種質(zhì)控血清CV值比較無統(tǒng)計學差異P>0.05。結(jié)論 自制外部弱陽性質(zhì)控血清在實際檢測中精密度、穩(wěn)定性符合國家對質(zhì)控物的要求,基層醫(yī)院檢驗科有能力制備,值得推廣應用。
關(guān)鍵詞:質(zhì)控血清;單純皰疹病毒;生殖器皰疹
生殖器皰疹(GH)是皮膚性病科常見的一種由單純皰疹病毒Ⅱ型(HSVⅡ)感染引起的性傳播疾病,常與生殖道致病微生物如淋球菌,支原體,衣原體,梅毒螺旋體混合感染或其他性病治愈后而發(fā)??;此病典型臨床表現(xiàn)為生殖器部位的密集水泡,臨床診斷相對容易;部分病例由于臨床癥狀不典型或臨床醫(yī)師認識不足常漏診,因此檢測血清HSVⅡ抗體(IgG型和IgM型)可輔助臨床確診此??;尤其是 IgM型抗-HSVⅡ在血清中出現(xiàn)早,上升快,但在血液中存在時間短,可協(xié)助臨床早期診斷。為了保證檢測結(jié)果準確性,精密度和可靠性,每次實驗均須有內(nèi)部對照質(zhì)控血清(陽性及陰性血清)和外部對照質(zhì)控血清,以外部對照質(zhì)控血清進行室內(nèi)質(zhì)量控制。為了避免商品化質(zhì)控血清可能存在的基質(zhì)效應,我們利用檢測病例中抗 HSVⅡ陽性標本分別制備了IgG和IgM型弱陽性外部對照質(zhì)控血清,結(jié)果如下。
1 資料與方法
1.1試劑與儀器 ①試劑:抗HSVⅡIgG型和IgM型試劑盒由美國Trinity Biotech Plc公司提供,批號050,有效期2014-11;外部質(zhì)控血清IgG型和IgM型(4NCU/ml),廣州康潤生物制品有限公司提供,批號20131202,有效期20141201;②儀器:BIO-RAD680酶標儀及ZL-5洗板機。
1.2抗HSVⅡIgG型和IgM型檢測采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),按照試劑盒說明書進行操作,以吸光度值/cut-off值(S/CO)判定檢測結(jié)果,S/CO≥1.1為陽性;S/CO≤0.9為陰性;S/CO值介于0.9~1.1間為檢測灰區(qū)。
1.3弱陽性外部質(zhì)控血清制備 我們將皮膚性病門診確診為生殖器皰疹病例16例,其中9例為IgG抗體陽性;7例IgM抗體陽性病例再次抽血5ml,并分離血清;同時使用10例健康體檢者血清(肝炎標志物,抗HIV,梅毒抗體均陰性并無脂血、溶血、黃疸);分別將上述血清混勻,經(jīng)高速離心20min去除蛋白質(zhì)等沉淀,56℃加熱30min備用。用處理后的健康人血清對IgG陽性血清和IgM陽性血清進行倍比稀釋,檢測吸光度并計算S/CO值。選擇陽性質(zhì)控血清濃度(以吸光度OD值表示)為cut-off值的2~3倍上下的稀釋度血清為室內(nèi)質(zhì)控血清,過濾除菌并加入0.01%硫柳汞混勻,按50ul用量分裝后,-70℃冷凍保存。
1.4室內(nèi)質(zhì)控方法 ①繪制質(zhì)控圖:在常規(guī)條件下,連續(xù)檢測抗HSVⅡIgG型和IgM型自制血清20批次,得到20個S/CO值,計算平均值(x)、標準差(s)、變異系數(shù)(cv),以S/CO值為縱坐標,以檢測批次日期為橫坐標,繪制質(zhì)控圖,每次外部對照質(zhì)控血清的結(jié)果(S/CO)依次填入該質(zhì)控圖中;②自制質(zhì)控血清的精密度和穩(wěn)定性觀察:每次取自制50ul質(zhì)控血清與標本同時測定抗HSVⅡIgG和IgM;持續(xù)檢測9個月后統(tǒng)計S/CO的x、SD、CV,并分析各月與第1個月的檢測結(jié)果的統(tǒng)計學差異;③用三個不同批號試劑盒檢測室內(nèi)質(zhì)控血清,并持續(xù)9個月后統(tǒng)計S/CO的x、SD、CV,并分析本批質(zhì)控血清用不同批號試劑盒間檢測結(jié)果的統(tǒng)計學差異。
1.5統(tǒng)計學方法 采用SPSS16.0進行數(shù)據(jù)處理。不同月份和不同批號試劑盒間質(zhì)控血清精密度和穩(wěn)定性的比較采用均數(shù)的t檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
2 結(jié)果
2.1抗HSVⅡIgM、IgG型弱陽性質(zhì)控血清檢測 自制抗HSVⅡIgM、IgG型質(zhì)控血清和康潤公司抗HSVⅡIgM、IgG型質(zhì)控血清連續(xù)檢測20d的結(jié)果:自制血清吸光度值(S)均在CO值3倍左右,達到了外部質(zhì)控血清的要求,與康潤公司抗HSVⅡIgM、IgG型質(zhì)控血清S值基本相似。經(jīng)統(tǒng)計學處理結(jié)果如下(以x±s表示):自制血清抗HSVⅡIgM S/CO 平均值為(2.56±0.611),CV值11.95%;康潤公司質(zhì)控血清抗HSVⅡIgM型S/CO值(2.38±0.48),CV值為10.08%,兩種質(zhì)控血清CV值比較無統(tǒng)計學差異P>0.05。自制血清抗HSVⅡIgG型的S/CO值(3.57±0.98),CV值13.78%;康潤公司抗HSVⅡIgG型質(zhì)控血清S/CO值為(3.275±0.822),CV值為12.55%,兩種質(zhì)控血清CV值比較無統(tǒng)計學差異P>0.05。
2.2自制質(zhì)控血清精密度和穩(wěn)定性觀察 每月檢測自制血清抗HSVⅡIgM、IgG型S/CO值的X、S、CV結(jié)果變化分別見表1;康潤公司質(zhì)控血清抗HSVⅡIgM型結(jié)果表2。按照室內(nèi)質(zhì)控要求,以第1個月的結(jié)果(S/CO)為基準,以后每月與第1個月的檢測結(jié)果比較無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。進行16~20次/月檢測,持續(xù)檢測9個月,自制質(zhì)控血清抗HSVⅡIgM型S/CO的均值2.493,CV值為13.30%,每月的cv值均小于20%,沒有超出試劑盒規(guī)定的質(zhì)控范圍。
2.3三個不同試劑批號檢測抗HSVⅡIgM型精密度、穩(wěn)定性檢測結(jié)果 用三個不同批號的試劑盒檢測自制質(zhì)控血清抗HSVⅡIgM,每個批號檢測20次,持續(xù)檢測3個月結(jié)果的CV值均<20%(表3),不同批號試劑盒檢測結(jié)果比較無統(tǒng)計學差異(P>0.05),表明本批自制質(zhì)控血清的精密度和穩(wěn)定性符合質(zhì)控要求。
3 討論
人體免疫系統(tǒng)對致病微生物可產(chǎn)生體液免疫或細胞免疫。在產(chǎn)生體液免疫時,在感染的窗口期后可以在血液中檢測到特異性抗體,HSVⅡIgM型抗體分子量大,出現(xiàn)早,一旦檢測結(jié)果為陽性,再結(jié)合臨床資料有不潔性接觸史或其他接觸途徑,盡管臨床檢查無癥狀或不明顯,可診斷為HSVⅡ早期感染的生殖器皰疹(GH);當HSVⅡIgG和IgM抗體均陽性時,此時臨床癥狀明顯,可明確診斷為生殖器皰疹(GH);當僅有HSVⅡIgG抗體陽性,可結(jié)合臨床資料是否有藥物治療史,可診斷為既往HSVⅡ感染的生殖器皰疹[1]。
可見血清抗體檢測在臨床診斷生殖器皰疹(GH)重要性,認真進行室內(nèi)質(zhì)量控制是保證檢測結(jié)果穩(wěn)定及可靠的要素之一;室內(nèi)質(zhì)控目的是控制實驗室每天檢測結(jié)果的可靠性,是實驗室管理的基本措施。外部對照質(zhì)控血清是為了監(jiān)控檢測的重復性和試劑盒反映批間或批內(nèi)差異而由實驗室設置的一套對照血清,而弱陽性對照最能反映檢測結(jié)果的差異,即能顯示半定量分析或定性分析上的假陰性結(jié)果或誤差[2]。盡管試劑盒中設有陰陽性對照,但從實際檢測中我們發(fā)現(xiàn)其陽性對照質(zhì)控的吸光度值是試劑盒CO值的10倍及以上,僅能說明試劑盒的有效性和可靠性。當血清中抗體濃度較高時,檢測結(jié)果是符合臨床預期的;當濃度在CO值左右時,如果不同時檢測外部弱陽性質(zhì)控血清,很容易忽視該檢測結(jié)果,一般報告陰性結(jié)果,形成漏診的可能性極大[3]。
所以我們采用健康人血清稀釋抗HSVⅡIgM、IgG型陽性血清制備弱陽性質(zhì)控血清,避免了用其他類稀釋劑稀釋陽性血清而必然存在的基質(zhì)效應[4]。根據(jù)與外購康潤公司質(zhì)控血清檢測結(jié)果對比,自制弱血清質(zhì)控效果和穩(wěn)定性也符合國家對質(zhì)控物的要求,基層醫(yī)院檢驗科有能力制備,值得推廣應用。
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