摘要：目的 探討血清人附睪蛋白4（HE4）和糖類(lèi)抗原125（CA125）水平聯(lián)合檢測(cè)在新疆維吾爾族卵巢惡性腫瘤診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法 選取新疆維吾爾族病例：67例卵巢惡性腫瘤組患者、63例婦科良性腫瘤組患者和60例健康對(duì)照組，用ELISA法測(cè)定血清HE4水平，用ECLIA法測(cè)定CA125水平，計(jì)算ROMA風(fēng)險(xiǎn)概率，并比較三組間數(shù)據(jù)差異。結(jié)果 卵巢惡性腫瘤組血清CA125、HE4水平及ROMA與婦科良性腫瘤組、健康對(duì)照組比較明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而婦科良性腫瘤組血清CA125、HE4水平及ROMA與健康對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。CA125、HE4和ROMA三者對(duì)卵巢惡性腫瘤診斷靈敏度及特異度逐漸升高，對(duì)應(yīng)ROC曲線下面積也遞增，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 HE4的靈敏度和特異度均優(yōu)于CA125，二者聯(lián)合檢測(cè)即ROMA可同時(shí)提高靈敏度和特異度，優(yōu)于單獨(dú)檢測(cè)HE4或CA125。

關(guān)鍵詞：卵巢惡性腫瘤；維吾爾族；人附睪蛋白4；糖類(lèi)抗原125；診斷價(jià)值

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)腫瘤，居?jì)D科腫瘤死亡原因之首，因其起病隱匿，缺乏敏感的早期敏感診斷工具，5年生存率低，約50%。目前已知經(jīng)典的腫瘤標(biāo)志物為CA125，對(duì)疾病診斷及檢測(cè)復(fù)發(fā)有一定價(jià)值。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)人附睪分泌蛋白4（ HE4） 和卵巢惡性腫瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)模型（ ROMA） 在卵巢癌中的應(yīng)用做了相關(guān)研究[1，2]，結(jié)果提示HE4對(duì)卵巢癌的診斷價(jià)值優(yōu)于CA125，二者聯(lián)合檢測(cè)及ROMA模型提高了卵巢上皮癌診斷的準(zhǔn)確性，亞洲[3]的研究結(jié)果與西方多數(shù)研究結(jié)果一致。尚未有學(xué)者研究HE4對(duì)維吾爾族女性卵巢惡性腫瘤診斷價(jià)值。本文對(duì)HE4和CA125水平進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)，并結(jié)合ROMA模型，探討其在新疆維吾爾族女性卵巢惡性腫瘤診斷及鑒別診斷中的價(jià)值。

1資料與方法

1.1一般資料 研究病例共190例，均來(lái)自2012年1月～12月在新疆腫瘤醫(yī)院住院并經(jīng)術(shù)后病理結(jié)果確診的患者，其中健康對(duì)照組來(lái)自體檢中心；①卵巢惡性腫瘤組：67例，其中漿液性腺癌24例，粘液性腺癌20例，內(nèi)膜樣腺癌17例，透明細(xì)胞癌4例，支持-間質(zhì)細(xì)胞瘤2例。②婦科良性腫瘤組： 63例，其中卵巢巧克力囊腫16例，卵巢粘液性囊腺瘤18例，卵巢腺纖維瘤8例，卵巢成熟性畸胎瘤17例，輸卵管副中腎源性囊腫4例。③健康對(duì)照組：選取我院同期體檢中心體檢合格的健康女性60例，均無(wú)個(gè)人腫瘤史或家族腫瘤史。三組病例均未合并中重度內(nèi)科疾病或其他系統(tǒng)惡性腫瘤。

1.2標(biāo)本采集及保存 體檢者及住院患者（手術(shù)前）空腹肘靜脈采血4ml，靜置30min后，3000r/min離心5min，分離收集血清，-80℃冰箱保存待測(cè)。

1.3試劑與儀器 HE4 （ 酶聯(lián)免疫吸附法，試劑盒購(gòu)自瑞典Fujirebio Diagnostics公司），CA125 （電化學(xué)發(fā)光法，試劑盒購(gòu)自瑞士Roehe 公司），BIO-RAD model 680酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio-Rad公司），E170電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（瑞士Roehe公司）。

1.4檢測(cè)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) CA125正常范圍為0-35U/ml，HE4正常范圍為：70pmol/L（絕經(jīng)前）、140pmol/L（絕經(jīng)后），ROMA引用Moore 等[4]提出的計(jì)算公式：絕經(jīng)前患者預(yù)測(cè)指數(shù)（ predictive index，PI）=-12.0+2.38×LN（HE4）+0.0626×LN（CA125），絕經(jīng)后患者PI=-8. 09+1.04×LN（ HE4）+0.732×LN（CA125）。預(yù)測(cè)概率（ predicted probability，PP）=Exp（PI）/[1+Exp（PI）]×100。并以PP>13.1% （絕經(jīng)前）及PP>27.7%（絕經(jīng)后）作為截?cái)帱c(diǎn)，判斷卵巢癌高風(fēng)險(xiǎn)組及低分險(xiǎn)阻。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法 應(yīng)用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，正態(tài)分布計(jì)量資料使用x±s表示，多組間比較使用方差分析，偏態(tài)分布計(jì)量資料使用中位數(shù)（四分位數(shù)）表示，兩組間比較采用t'檢驗(yàn)，多組間比較采用非參數(shù)Kruskal -Wallis秩和檢驗(yàn)，再采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)進(jìn)一步做兩兩比較；計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)，采用受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic，ROC），比較HE4、CA125和ROMA診斷卵巢惡性腫瘤的價(jià)值，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2結(jié)果

2.1各組病例基本資料 三組病例中，年齡跨度類(lèi)似，方差分析提示三組間年齡均值差異無(wú)顯著性，絕經(jīng)前及絕經(jīng)后病例分布均勻，見(jiàn)表1。

2.2 CA125、HE4及ROMA頻數(shù)分布圖 由圖1可見(jiàn)，三組數(shù)據(jù)頻數(shù)分布圖符合右偏態(tài)分布，不符合正態(tài)分布模型，三組間數(shù)據(jù)比較選擇非參數(shù)Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)。

2.3各組CA125、HE4及ROMA水平比較 各組血清CA125、HE4（絕經(jīng)前、絕經(jīng)后）和ROMA（絕經(jīng)前、絕經(jīng)后）相比，χ2值分別為43.68、16.49、10.96、15.14、10.60，均P<0.01，提示三組數(shù)據(jù)差異有顯著性。以非參數(shù)Mann-Whiney U檢驗(yàn)進(jìn)一步行兩兩比較，卵巢惡性腫瘤組與婦科良性腫瘤組、健康對(duì)照組比較，U值分別為209、44、28、60、48，均P<0.05，提示卵巢惡性腫瘤組患者血清三項(xiàng)指標(biāo)（以下指CA125、HE4絕經(jīng)前、絕經(jīng)后和ROMA絕經(jīng)前、絕經(jīng)后）中位數(shù)均明顯高于婦科良性腫瘤組及健康對(duì)照組，差異有顯著性；婦科良性腫瘤組和健康對(duì)照組比較，P>0.05，兩組間血清三項(xiàng)指標(biāo)差異無(wú)顯著性。三組病例HE4、ROMA在絕經(jīng)前及絕經(jīng)后病例間差異無(wú)顯著性，見(jiàn)表2。

2.4 CA125、HE4及ROMA對(duì)卵巢惡性腫瘤診斷價(jià)值比較 由表3可見(jiàn)，CA125、HE4和ROMA三者對(duì)卵巢惡性腫瘤診斷靈敏度及特異度逐漸升高，對(duì)應(yīng)ROC曲線下面積也遞增，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。圖2可更為直觀觀察三者對(duì)卵巢惡性腫瘤診斷價(jià)值。

3討論

人附睪分泌蛋白4（human sapiens epididymis specific protein 4，HE4）是1991年由Kirchhoff等[5]在男性附睪組織中發(fā)現(xiàn)的。2009年Li 等[6]研究發(fā)現(xiàn)HE4 基因在人類(lèi)染色體20q12～13.1上，這一區(qū)域的染色體是卵巢癌變異基因表達(dá)最頻繁的區(qū)段[7，8]。HE4基因在卵巢癌組織中高表達(dá)，在正常卵巢組織中不表達(dá)或低表達(dá)。有研究顯示，敲除HE4基因的卵巢癌細(xì)胞將無(wú)法從G1期進(jìn)入S期，提示HE4能抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，是抗腫瘤基因。分泌型HE4已經(jīng)在卵巢癌患者的血清中檢測(cè)到有高水平表達(dá)。2003年Hellstrm等[1]通過(guò)ELISA法對(duì)比檢測(cè)HE4和CA125在絕經(jīng)后婦女血清的水平，提出HE4可以作為診斷卵巢癌的腫瘤標(biāo)志物，并且比CA125更有優(yōu)勢(shì)。自此，掀起了國(guó)內(nèi)外研究HE4在診斷卵巢癌中的價(jià)值的熱潮。近年來(lái)國(guó)內(nèi)研究表明HE4單項(xiàng)檢測(cè)診斷卵巢癌的特異度優(yōu)于CA125 ，兩者聯(lián)合檢測(cè)可以提高檢測(cè)敏感度。

本研究顯示CA125、HE4在新疆維吾爾族女性血清中可被檢測(cè)到，且符合右偏態(tài)分布。卵巢惡性腫瘤組血清HE4水平明顯高于婦科良性腫瘤組及健康婦女組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在婦科良性腫瘤組及健康婦女組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示HE4可作為卵巢惡性腫瘤診斷及鑒別指標(biāo)之一，與國(guó)內(nèi)外研究結(jié)果相同。絕經(jīng)前與絕經(jīng)后病例比較，HE4水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，故在后續(xù)評(píng)價(jià)HE4及ROMA診斷卵巢惡性腫瘤價(jià)值中未再依據(jù)是否絕經(jīng)分亞組。其與本研究所選病例年齡跨度大，且標(biāo)本量較少有關(guān)，后續(xù)研究可劃定年齡范圍，大樣本收集維吾爾族女性血清標(biāo)本，測(cè)定HE4正常值范圍，并進(jìn)一步觀察HE4與年齡及是否絕經(jīng)有無(wú)相關(guān)性。

與診斷\"金標(biāo)準(zhǔn)\"病理結(jié)果比較，HE4診斷卵巢惡性腫瘤靈敏度及特異度分別為85.7%、80.4%，均高于CA125（76.1%、77.1%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ROMA模型為綜合HE4及CA125水平所計(jì)算出的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)值，其對(duì)卵巢惡性腫瘤診斷價(jià)值為二者的結(jié)合。ROMA的靈敏度及特異度（87.5%、86.7%）較HE單獨(dú)檢測(cè)更高，提示聯(lián)合CA125和HE4可提高卵巢惡性腫瘤診斷效率。ROC曲線下面積可更為直觀的顯示三者診斷價(jià)值排序，即ROMA>HE4>CA125。這一結(jié)果與國(guó)內(nèi)多數(shù)漢族病例研究結(jié)論一致[9，10]，HE4對(duì)于新疆維吾爾族女性卵巢惡性腫瘤同樣有診斷及鑒別診斷價(jià)值。調(diào)查新疆維吾爾族人群卵巢惡性腫瘤的發(fā)病率，可進(jìn)一步計(jì)算HE4及ROMA的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值，為臨床診斷決策提供更多信息。

參考文獻(xiàn)：

[1] Hellstrm I， Raycraft J， Hayden-Ledbetter M， et al. The HE4 （WFDC2） protein is a biomarker for ovarian carcinoma [J]. Cancer Res，2003，63（13）：3695-3700.

[2] Park Y， Kim Y， Lee EY， et al. Reference ranges for HE4 and CA125 in a large Asian population by automated assays and diagnostic performances for ovarian cancer [J]. Int J Cancer，2012，130（5）：1136-1144.

[3] Anderson MR， Goff BA， Lowe KA， et al. Use of a Symptom Index，CA125 and HE4 to predict ovarian cancer [J]. Gynecol Oncol，2010，116（3）：378-383.

[4] Moore RG， Jabre-Raughley M， Brown AK， et al. Comparison of a novel multiple marker assay vs the Risk of Malignancy Index for the prediction of epithelial ovarian cancer in patients with a pelvic mass[J].Am J Obstet Gynecol，2010，203（3）： 228-236.

[5] Kirehhof C， Habben I， Lye HR， et al. A major human epididymis-specific cDNA encodes a protein with sequence homology to extracellular proteinase inhibitom [J].Bid Reprod，2009，45（2）：350-357.

[6] Li J， Dowdy S， Tipton T， et al. HE4 as a biomarker for ovarian and endometrial cancer management[J]. Expert Rev Mol Diagn，2009，9（6）：555-566.

[7] Sonda G， Palazzo J， du Manoir S， et al. Comparative genomic hybridization detects frequent overrepresentation of chromosomal material from 3q26，8q24 and 20q13 in human ovarian carcinomas [J]. Genes Chromosomes Cancer，1997，20（4）：320-328.

[8]Kiechle M， Jacobsen A， Schwarz -Boeger U， et al. Comparative genomic hybridization detects genetic imbalances in primary ovarian carcinomas as correlated with grade of differentiation [J]. Cancer，2001，91（3）：534-540.]

[9]陳少林，常皤，祁云清.血清HE4和CA125聯(lián)合檢測(cè)在卵巢癌診斷中的應(yīng)用分析[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2012，l9（1）：6-8.

[10]李子軍，鄭雅琴，徐仙鳳，等.血清HE4 和CA125水平聯(lián)合ROMA預(yù)測(cè)和診斷卵巢癌的臨床價(jià)值[J].腫瘤學(xué)雜志，2013，19（3）：219-222.

編輯/申磊