摘要：目的 研究溫度對(duì)葛根中葛根素的影響。方法 以條件甲醇：水（25：75）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，流速：1.0mL/min，用HPLC方法對(duì)其進(jìn)行測(cè)定，對(duì)葛根生品及不同溫度下處理的葛根進(jìn)行測(cè)定和比較。結(jié)果 所確定的含測(cè)方法穩(wěn)定可行，實(shí)驗(yàn)表明溫度對(duì)葛根中的葛根素有影響，隨溫度的升高葛根素會(huì)有所降低，提示葛根的炮制過(guò)程應(yīng)注意對(duì)溫度控制。

關(guān)鍵詞：葛根素；葛根；HPLC；烘制

葛根為豆科植物野葛Pueraria lobata （Wild.）Ohwi的干燥根。味甘、辛，涼。歸脾、胃、肺經(jīng)。具有解肌退熱，生津止渴，透疹，升陽(yáng)止瀉等功效[1]。葛根臨床應(yīng)用生熟有別。本文以葛根素為指標(biāo)，研究溫度對(duì)葛根影響。

1 儀器與試劑

P230II大連依利特（UV230II紫外檢測(cè)器，EC2006-色譜數(shù)據(jù)處理工作站），1100 Series高效液相色譜儀（Agilent，美國(guó)）KQ3200超聲波清洗器（江蘇昆山）等。葛根藥材（購(gòu)于開(kāi)發(fā)區(qū)保健大藥房，經(jīng)鑒定符合藥典要求）；葛根素對(duì)照品（批號(hào)110721-201014，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；高效液相色譜用水為純凈水，甲醇為色譜純；其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1葛根素的含量測(cè)定方法

2.1.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇：水（25：75）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，流速：1.0mL/min；柱溫：30℃。理論板數(shù)按葛根素峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

2.1.2供試品溶液的制備 取本品粉末（過(guò)三號(hào)篩）約0.1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入30%乙醇50ml，稱定重量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，加30%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.1.3對(duì)照品溶液制備 精密稱取葛根素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.08mg，即得。

2.1.4 空白試驗(yàn) 即溶劑。

2.1.5 測(cè)定結(jié)果 分別精密吸取對(duì)照品、供試品和空白試驗(yàn)各20μL。依次進(jìn)樣，在上述色譜條件下測(cè)定，記錄色譜圖。

2.2含量測(cè)定方法學(xué)考察

2.2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取葛根素對(duì)照品適量，加甲醇制成0.4mg/ml的溶液。精密量取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分別至于10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。分別量取20μl，注入HPLC色譜儀中，按上述色譜條件測(cè)定，測(cè)定峰面積。以對(duì)照品溶液的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程：Y=251.0X-9.2，r=0.9998。結(jié)果表明，葛根素在0.8～4.0μg之間峰面積于進(jìn)樣質(zhì)量有良好的線性關(guān)系。

2.2.2精密度試驗(yàn) 依法連續(xù)測(cè)定6次，RSD 為1.00%，表明本方法精密度良好。

2.2.3穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，于0、2、4、6、8、10h測(cè)定葛根素色譜峰面積，測(cè)定結(jié)果RSD為0.98%，結(jié)果表明，溶液在10h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.4重復(fù)性試驗(yàn) 取樣品，按2.1項(xiàng)下供試品溶液制備，根據(jù)2.3項(xiàng)下色譜條件及檢測(cè)方法測(cè)定5次，記錄峰面積，測(cè)定結(jié)果RSD為1.33%，表明方法重復(fù)性良好。

2.2.5回收率試驗(yàn) 分別精密稱取葛根樣品0.1g，加4.05mg/ml對(duì)照品1ml，按2.1.2項(xiàng)下方法處理，按2.1.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算回收率，結(jié)果RSD值為1.14%，表明方法的回收率試驗(yàn)符合相關(guān)要求。

2.3葛根加熱處理的方法 供試品藥材的制備[2]取凈葛根生品50g，于粉碎機(jī)中粉碎，過(guò)篩，將粉末分成3份，留取一份作為對(duì)照，不做任何處理，編號(hào)為葛根1，其余2份分別置于玻璃皿中，編號(hào)為葛根2，3，于電熱鼓風(fēng)恒溫干燥箱內(nèi)分別于100℃，120℃，烘制35min。將上述3份樣品于相同溫度、濕度條件下放置24h后，精密稱量葛根粉末1g，按前述方法進(jìn)行含量測(cè)定。見(jiàn)表1。

2.4不同溫度對(duì)葛根素含量的影響結(jié)果 取葛根不同樣品，按2.1.2方法進(jìn)行處理，按2.1.1色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定，見(jiàn)表2。

3 討論與結(jié)論

3.1本研究結(jié)果表明，所確定的含量測(cè)定方法，適合樣品的含量測(cè)定。

3.2目前葛根的炮制有煨制，炒制等法。其中麩煨是：①取麥麩置鍋內(nèi)，用文火加熱，投入葛根片，適當(dāng)翻動(dòng)，至葛根片呈焦黃色，取出篩去麥麩，放涼。每葛根片100kg，用麥麩30kg（《規(guī)范》）；②取葛根片，用麩炒法，炒至黃色為度（《四川》）?；垤?取滑五粉，置鍋內(nèi)加熱，倒入凈葛根片，文火微炒至表面呈黃色，取出，篩凈滑石粉（《寧夏》）。紙煨 取葛根塊，用紙裹煨法煨至紙呈焦黑色為度（《四川》）。米湯煨 取葛根片用米湯拌浸，以吸潤(rùn)為度；連藥和米湯一同入鍋內(nèi)炒干，至色轉(zhuǎn)深黃褐色，即稱煨葛根。葛根16kg，用米湯6kg（《集成》）。其炒制的方法是取凈葛根片或塊，用文火炒至表面呈黃色，稍帶焦斑，取出，篩去灰屑（《江蘇》）。以上炮制過(guò)程均有加熱過(guò)程。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)烘制的方法對(duì)葛根進(jìn)行作用，發(fā)現(xiàn)不同溫度作用下的葛根素的含量與未加熱葛根相比較，結(jié)果： 未加熱樣品>100℃烘品>120℃烘品，說(shuō)明在不同溫度作用下，對(duì)葛根素有不同程度的影響。隨溫度的升高葛根素會(huì)有所降低，提示葛根的炮制過(guò)程應(yīng)注意對(duì)溫度控制。

參考文獻(xiàn)：

[1]王鵬，黃偉，彭宇生.葛根炮制工藝研究[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2007，8：15-16.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：312-313.

編輯/哈濤